冷冻管通常用于在充满液氮的杜瓦瓶中低温储存细胞系和其他关键生物材料。

在液氮中成功保存细胞涉及几个阶段。虽然基本原理是缓慢冷冻，但所采用的具体技术取决于细胞类型和所使用的冷冻保护剂。在如此低的温度下储存电池时，需要考虑一些安全注意事项和最佳实践。

这篇文章旨在概述冷冻管如何储存在液氮中。

什么是冷冻瓶

冷冻瓶是带盖的小瓶，设计用于在极低的温度下储存液体样品。它们确保保存在冷冻保护剂中的细胞不会与液氮直接接触，从而最大限度地降低细胞破裂的风险，同时仍然受益于液氮的极端冷却效果。

这些小瓶通常有多种容量和设计可供选择——它们可以有内螺纹或外螺纹，底部为平底或圆底。还提供无菌和非无菌形式。

谁使用赛罗维亚将细胞储存在液氮中

许多 NHS 和私人实验室以及专门从事脐带血库、上皮细胞生物学、免疫学和干细胞生物学的研究机构都使用冷冻管来冷冻保存细胞。

以这种方式保存的细胞包括 B 细胞和 T 细胞、CHO 细胞、造血干细胞和祖细胞、杂交瘤、肠细胞、巨噬细胞、间充质干细胞和祖细胞、单核细胞、骨髓瘤、NK 细胞和多能干细胞。

如何在液氮中储存冷冻管概述

冷冻保存是一种通过将细胞和其他生物结构冷却至极低温度来保存它们的过程。细胞可以在液氮中保存多年而不会丧失细胞活力。这是所采用的程序的概要。

细胞制备

制备样品的确切方法将根据细胞类型而有所不同，但一般来说，收集细胞并离心以形成富含细胞的沉淀。然后将该沉淀重悬于与冷冻保护剂或冷冻保存介质混合的上清液中。

冷冻保存介质

该培养基用于通过抑制细胞内和细胞外晶体的形成从而抑制细胞死亡来将细胞保存在低温环境中。它们的作用是在冷冻、储存和解冻过程中为细胞和组织提供安全的保护环境。

将新鲜冷冻血浆 (FFP)、肝素化血浆溶液或无血清、无动物成分溶液等介质与二甲亚砜 (DMSO) 或甘油等冷冻保护剂混合。

将重新液化的样品颗粒等分到聚丙烯冷冻管中，例如苏州艾斯生物医药公司低温储存瓶.

重要的是不要将冷冻管装得过满，因为这会增加破裂的风险以及内容物可能泄漏的风险 (1)。

受控冷冻速率

一般来说，采用缓慢受控的冷冻速率来成功冷冻保存细胞。

将样品分装到低温小瓶中后，将其置于湿冰上或4℃冰箱中，并在5分钟内开始冷冻程序。作为一般指导，电池的冷却速度为每分钟 -1 至 -3 (2)。这是通过使用可编程冷却器或将小瓶放入置于 –70°C 至 –90°C 控速冰箱中的隔热盒中来实现的。

转移至液氮

然后将冷冻的低温小瓶转移到液氮罐中无限期保存，前提是温度保持低于-135℃。

这些超低温可以通过浸入液相或气相氮中来获得。

液相还是气相？

众所周知，储存在液相氮中可以保持绝对一致的低温，但通常不建议这样做，原因如下：

• 需要大量（深度）液氮，这是一个潜在的危险。由此导致的烧伤或窒息确实存在风险。
• 曲霉菌、乙型肝炎等传染源交叉污染的案例以及通过液氮培养基传播病毒的记录 (2,3)
• 在浸泡过程中液氮可能会泄漏到小瓶中。当从储存中取出并加热至室温时，氮气迅速膨胀。因此，当从液氮储存中取出时，小瓶可能会破碎，从而因飞散碎片和暴露于内容物而造成危险 (1, 4)。

由于这些原因，超低温储存最常见的是气相氮。当样品必须以液相储存时，应使用专门的cryoflex 管。

气相的缺点是会出现垂直温度梯度，导致温度在-135℃和-190℃之间波动。这就需要仔细、勤勉地监测液氮水平和温度变化 (5)。

许多制造商建议冷冻管适合储存至 -135℃ 或仅在气相中使用。

解冻冷冻保存的细胞

解冻过程对于冷冻培养物来说是有压力的，需要适当的处理和技术来确保细胞的最佳活力、恢复和功能。确切的解冻方案将取决于特定的细胞类型。然而，快速解冻被认为是以下标准：

• 减少对细胞恢复的影响
• 有助于减少冷冻介质中溶质的暴露时间
• 最大限度地减少冰重结晶造成的损害

水浴、珠浴或专用自动化仪器通常用于解冻样品。

最常见的是，一次解冻 1 个细胞系 1-2 分钟，方法是在 37℃ 水浴中轻轻旋转，直到小瓶中只剩下一小部分冰，然后在预热的生长培养基中洗涤。

对于某些细胞（例如哺乳动物胚胎）来说，缓慢变暖对于它们的生存至关重要。

这些细胞现在已准备好进行细胞培养、细胞分离，或者在造血干细胞的情况下进行活力研究，以确保清髓治疗前供体干细胞的完整性。

通常的做法是取一小部分预洗的样品用于进行细胞计数，以确定培养物中铺板的细胞浓度。然后，您可以评估细胞分离程序的结果并确定细胞活力。

冷冻管储存的最佳实践

冷冻瓶中样品的成功冷冻保存取决于方案中的许多要素，包括正确的存储和记录保存。

• 在存储位置之间拆分单元– 如果体积允许，将细胞分装在小瓶之间，并将它们存放在不同的位置，以降低因设备故障而导致样品丢失的风险。
• 防止交叉污染– 在后续使用前选择一次性无菌低温小瓶或高压灭菌器
• 使用适合您细胞的尺寸的小瓶– 小瓶的容量范围为 1 至 5 毫升。避免装得太满，以降低破裂的风险。
• 选择内螺纹或外螺纹低温瓶– 一些大学推荐使用内螺纹小瓶作为安全措施 – 它们还可以防止填充过程中或储存在液氮中时发生污染。
• 防止泄漏- 使用模压到螺帽或 O 形圈中的双注射密封件来防止泄漏和污染。
• 使用二维条形码和标签瓶– 为了确保可追溯性，具有大书写区域的小瓶可以使每个小瓶都贴上适当的标签。二维条形码有助于存储管理和记录保存。颜色编码的盖子有助于更轻松地识别。
• 适当的存储维护- 为确保细胞不丢失，储存容器应持续监控温度和液氮水平。应安装警报器以提醒用户出现错误。

安全注意事项

液氮已成为现代研究的常见做法，但如果使用不当可能会带来严重伤害的风险。

处理液氮时，应穿戴适当的个人防护装备 (PPE)，以尽量减少冻伤、烧伤和其他不良事件的风险。穿

• 低温手套
• 实验室外套
• 抗冲击全面罩，也覆盖颈部
• 闭趾鞋
• 防溅塑料围裙

液氮冰箱应放置在通风良好的地方，以尽量减少窒息的风险——逸出的氮气会蒸发并取代大气中的氧气。大容量商店应配备低氧报警系统。

处理液氮时最好成对工作，并且应禁止在正常工作时间之外使用。

冷冻管支持您的工作流程

苏州艾斯生物医药公司提供多种产品选择，满足您对不同类型细胞的冷冻保存需求。该产品组合包括一系列试管以及一系列无菌冷冻管。

我们的冷冻管是：

• 实验室螺旋盖 0.5mL 1.5mL 2.0mL 低温冷冻瓶 带垫圈的锥形底冷冻管

  ● 0.5ml、1.5ml、2.0ml规格，有裙边或无裙边
  ● 锥形或自立式设计，无菌或非无菌均可
  ● 螺旋盖管采用医用级聚丙烯制成
  ● PP冻存管可反复冷冻和解冻
  ●外盖设计，减少样品处理过程中的污染概率。
  ● 螺旋盖低温管 通用螺纹使用
  ● 管子适合最常见的转子
  ● 低温管O型圈管适合标准1英寸和2英寸、48孔、81孔、96孔和100孔冷冻箱
  ● 可高温高压灭菌至 121°C，可冷冻至 -86°C

  零件编号	材料	体积	帽颜色	件/包	袋/箱
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	黑、黄、蓝、红、紫、白	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	黑、黄、蓝、红、紫、白	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	黑、黄、蓝、红、紫、白	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	黑、黄、蓝、红、紫、白	500	10