冰冷的通常用于在充满液氮的露水中，用于细胞系和其他关键生物材料的低温储存。

在液氮中成功保存细胞的成功保存涉及几个阶段。尽管基本原理是缓慢的冻结，但采用的确切技术取决于细胞类型和使用的冷冻保护剂。在这种低温下存储细胞时，有几种安全考虑和最佳实践要考虑。

这篇文章旨在概述冰冻剂如何存储在液氮中。

什么是冰冷的

Cryovials是小的，盖的小瓶，设计用于在极低温度下存储液体样品。它们确保保存在冷冻保护剂中的细胞不会直接与液氮直接接触，从而最大程度地减少了细胞骨折的风险，同时仍然受益于液氮的极端冷却效应。

小瓶通常有一系列的卷和设计 - 它们可以内部或外部用平坦或圆形的底部螺纹。也可以使用无菌和非疾病格式。

谁使用细胞运动将细胞存储在液氮中

一系列NHS和私人实验室，以及专门从事脐带血库，上皮细胞生物学，免疫学和干细胞生物学的研究机构，使用冷冻物质来冷冻保存细胞。

以这种方式保存的细胞包括B和T细胞，CHO细胞，造血干细胞和祖细胞，杂交瘤，肠细胞，巨噬细胞，间质干细胞和祖细胞，单核细胞，骨髓瘤，NK细胞和多能干细胞。

概述如何在液氮中存放冰棍

冷冻保存是一个通过将细胞和其他生物构建体冷却至非常低的温度来保留细胞和其他生物结构的过程。细胞可以在液氮中存储多年，而不会丧失细胞活力。这是所采用程序的概述。

细胞制备

制备样品的确切方法将根据细胞类型而有所不同，但通常，收集细胞并离心以形成富细胞的颗粒。然后将该颗粒重悬于与冷冻保护剂或冷冻保存介质混合的上清液中。

冷冻保存介质

该培养基被用来在低温环境中保存细胞，通过抑制细胞内和细胞外晶体的形成，从而遭受细胞死亡。它们的作用是在冷冻，存储和融化过程中为细胞和组织提供安全，保护性的环境。

像新鲜的冷冻血浆（FFP），肝素化的血浆溶液或无血清的无动物成分溶液的培养基与冷冻保护剂（例如二甲基磺胺（DMSO）或甘油）混合。

将重新置化的样品颗粒等分为聚丙烯冰冷，例如苏州王牌生物医学公司低温存储小瓶.

重要的是不要过度填充冰冻剂，因为这会增加破裂的风险和可能释放内容物的风险（1）。

受控的冻结速率

通常，使用缓慢的控制冻结速率用于细胞的成功冷冻保存。

将样品等分为低温小瓶后，将它们置于湿冰或4英制冰箱中，并在5分钟内开始冻结过程。作为一般指南，细胞以每分钟-1至-3的速度冷却（2）。这是使用可编程冷却器或将小瓶放在放置在–70°C至–90°C控制速率冰箱中的绝缘盒中实现的。

转移到液氮

然后将冷冻的低温小瓶转移到无限期的液氮罐中，只要维持小于-135℃的温度。

这些超低温度可以通过浸入液相或蒸汽相氮中获得。

液相还是蒸气相？

已知在液相氮中存储以绝对一致性维持冷温，但由于以下原因通常不建议使用：

• 对液氮的大量（深度）的需求，这是一种潜在的危害。烧伤或窒息是真正的风险。
• 通过液氮培养基，例如曲霉，HEP B和病毒扩散的传染剂的交叉污染病例（2,3）
• 浸入过程中液氮渗入小瓶的潜力。当从存储中取出并温暖到室温时，氮会迅速膨胀。因此，当从液体氮储存中取出时，小瓶可能会崩溃，从而从飞行碎屑和暴露于含量的情况下造成危险（1，4）。

由于这些原因，超低温度储存最常见于蒸气期氮。当必须将样品存储在液相中时，应使用专门的Cryoflex管。

蒸气相的缺点是垂直温度梯度可能导致-135℃和-190℃之间的温度波动。这需要对液氮水平和温度变化进行仔细和勤奋的监测（5）。

许多制造商建议Cryovials适合存储至-135℃或仅在蒸气阶段使用。

解冻您的冷冻细胞

解冻程序对于冷冻培养物是压力的，需要适当的处理和技术来确保细胞的最佳生存能力，恢复和功能。确切的解冻协议将取决于特定的单元格类型。但是，快速解冻被认为是：

• 减少对细胞恢复的任何影响
• 帮助减少冰冻媒体中存在的溶质的曝光时间
• 通过冰重结晶来最大程度地减少任何损坏

水浴，珠子浴或专门的自动化仪器通常用于解冻样品。

最常见的1个细胞系在一次融化1-2分钟，通过在37℃的水浴中轻轻旋转，直到在小瓶中只剩下一点冰，然后才在预热的生长培养基中洗涤。

对于某些细胞（例如哺乳动物胚胎），缓慢变暖对于它们的生存至关重要。

现在，这些细胞已准备好用于细胞培养，细胞分离或在造血干细胞的情况下 - 生存能力研究，以确保髓间疗法之前的供体干细胞的完整性。

采取用于执行细胞计数以确定培养细胞浓度的预洗样品的小等分试样是正常的做法。然后，您可以评估细胞隔离程序的结果并确定细胞活力。

存储冰​​冷的最佳实践

储存在冰冷的样品的成功冷冻保存取决于协议中的许多元素，包括正确的存储和记录保存。

• 在存储位置之间拆分单元格- 如果允许体积，则将小瓶分开，然后将其存储在不同的位置，以减少由于设备故障而导致样品损失的风险。
• 防止交叉污染- 在随后使用之前选择一次性无菌低温小瓶或高压灭菌器
• 为您的细胞使用适当尺寸的小瓶- 小瓶有1到5毫升之间的一系列体积。避免过度填充小瓶以降低开裂的风险。
• 选择内部或外部螺纹低温小瓶- 某些大学建议内部螺纹小瓶进行安全措施 - 它们还可以在填充过程中或存储在液氮中时也可以防止污染。
• 防止泄漏- 使用模制成螺丝盘或O形圈的双注射密封件，以防止泄漏和污染。
• 使用2D条形码和标签小瓶- 为了确保可追溯性，具有较大写作区域的小瓶使每个小瓶都能得到足够的标记。 2D条形码可以帮助进行存储管理和记录保存。颜色编码的帽子对于更容易识别很有用。
• 足够的存储维护- 为确保细胞不会丢失，储存容器应不断监测温度和液体氮水平。应安装警报以提醒用户错误。

安全预防措施

液氮已成为现代研究中的普遍做法，但如果使用不正确，则会承受严重伤害的风险。

应戴上适当的个人防护设备（PPE），以最大程度地减少处理液氮时冻伤，烧伤和其他不良事件的风险。穿

• 低温手套
• 实验室外套
• 耐抗脖子的耐抗全面盾牌
• 闭鞋
• 防溅塑料围裙

应将液氮冰箱放置在通风良好的区域中，以最大程度地减少窒息的风险 - 逃避氮蒸发并置换了大气中的氧气。大型商店应具有低氧气警报系统。

当处理液氮时，成对工作是理想的，并且应禁止其在正常工作时间之外的使用。

哭泣的人支持您的工作流程

苏州Ace生物医学公司提供多种产品，可满足您对不同类型细胞的冷冻保存需求。该投资组合包括一系列管道以及一系列无菌冰棍。

我们的冰冷是：

• 实验室螺钉盖0.5ml 1.5ml 2.0ml冰冷的低温小瓶锥形底部冰管带垫圈

  ●0.5毫升，1.5毫升，2.0毫升规格，带裙子或不裙子
  ●锥形或自立设计，无菌或非疾病都可以使用
  ●螺钉盖管由医学级聚丙烯制成
  ●PP冷冻管小瓶可以反复冷冻并解冻
  ●外部帽设计可以降低样品处理过程中的污染概率。
  ●螺钉盖低温管通用螺纹供使用
  ●管适合最常见的转子
  ●低温管O形圈拟合标准1英寸和2英寸，48韦尔，81韦尔，96韦尔和100韦尔冰箱盒子
  ●高压灭菌至121°C，可冷冻至-86°C

  部分第	材料	体积	帽颜色	件/包	袋子/盒子
  ACT05-BL-N	PP	0.5毫升	黑色，黄色，蓝色，红色，紫色，白色	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5毫升	黑色，黄色，蓝色，红色，紫色，白色	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5毫升	黑色，黄色，蓝色，红色，紫色，白色	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0毫升	黑色，黄色，蓝色，红色，紫色，白色	500	10