Cyovialsti wa ni lilo nigbagbogbo fun ibi ipamọ cryogenic ti awọn laini sẹẹli ati awọn ohun elo igbe aye to ṣe pataki, ni awọn dewars ti o kun pẹlu nitrogen olomi.

Awọn ipele pupọ lo wa ninu itọju aṣeyọri ti awọn sẹẹli ninu nitrogen olomi. Lakoko ti ipilẹ ipilẹ jẹ didi lọra, ilana gangan ti a lo da lori iru sẹẹli ati cryoprotectant ti a lo. Ọpọlọpọ awọn ero aabo ati awọn iṣe ti o dara julọ wa lati ṣe akiyesi nigbati o ba tọju awọn sẹẹli ni iru awọn iwọn otutu kekere.

Ifiweranṣẹ yii ni ifọkansi lati funni ni awotẹlẹ ti bii a ṣe tọju cryovials sinu nitrogen olomi.

Kini Cryovials

Cryovials wa ni kekere, capped vials apẹrẹ fun titoju omi awọn ayẹwo ni lalailopinpin kekere awọn iwọn otutu. Wọn rii daju pe awọn sẹẹli ti o tọju ni cryoprotectant ko wa si olubasọrọ taara pẹlu nitrogen olomi, idinku eewu ti awọn fifọ cellular lakoko ti o tun ni anfani lati ipa itutu agbaiye ti nitrogen olomi.

Awọn lẹgbẹrun nigbagbogbo wa ni iwọn awọn iwọn didun ati awọn apẹrẹ - wọn le wa ni inu tabi ti ita pẹlu alapin tabi awọn isalẹ yika. Ni ifo ati awọn ọna kika ti ko ni ifo tun wa.

Tani NloCyrovialsLati Tọju Awọn sẹẹli ni Nitrogen Liquid

Ọpọlọpọ awọn ile-iṣẹ NHS ati awọn ile-iṣẹ aladani, ati awọn ile-iṣẹ iwadii ti o ṣe amọja ni ile-ifowopamọ ẹjẹ okun, isedale sẹẹli epithelial, ajẹsara ati isedale sẹẹli stem lo awọn cryovial lati tọju awọn sẹẹli.

Awọn sẹẹli ti a tọju ni ọna yii pẹlu Awọn sẹẹli B ati T, Awọn sẹẹli CHO, Hematopoietic Stem ati Awọn sẹẹli Progenitor, Hybridomas, Awọn sẹẹli Intestinal, Macrophages, Stem Mesenchymal ati Awọn sẹẹli Progenitor, Monocytes, Myeloma, Awọn sẹẹli NK ati Awọn sẹẹli Stem Pluripotent.

Akopọ ti Bii o ṣe le tọju Cryovials ni Nitrogen Liquid

Cryopreservation jẹ ilana kan ti o tọju awọn sẹẹli ati awọn igbekalẹ ti ẹda miiran nipa itutu wọn si awọn iwọn otutu kekere pupọ. Awọn sẹẹli le wa ni ipamọ sinu nitrogen olomi fun awọn ọdun laisi pipadanu ṣiṣeeṣe sẹẹli. Eyi jẹ apẹrẹ ti awọn ilana ti a lo.

Cell Igbaradi

Ọna gangan fun ṣiṣe awọn ayẹwo yoo yatọ si da lori iru sẹẹli, ṣugbọn ni gbogbogbo, awọn sẹẹli ti wa ni gbigba ati ti a fi centrifuged lati ṣe agbekalẹ pellet ọlọrọ sẹẹli kan. Pellet yii yoo tun tun da duro ni supernatant ti o dapọ pẹlu cryoprotectant tabi alabọde igbera.

Cryopreservation Alabọde

Alabọde yii jẹ oojọ ti lati tọju awọn sẹẹli ni awọn agbegbe iwọn otutu kekere ti wọn yoo wa labẹ rẹ nipasẹ didi idasile ti intra ati awọn kirisita extracellular ati nitorinaa iku sẹẹli. Ipa wọn ni lati pese ailewu, agbegbe aabo fun awọn sẹẹli ati awọn tisọ lakoko didi, ibi ipamọ, ati awọn ilana gbigbo.

Alabọde bii pilasima tio tutunini tuntun (FFP), ojutu heparinised plasmalyte tabi omi ara-ọfẹ, awọn ojutu ti ko ni paati ẹranko jẹ idapọ pẹlu awọn cryoprotectants bii dimethyl sulphoxide (DMSO) tabi glycerol.

Ayẹwo pellet ti o tun-omi ti wa ni aliquoted sinu polypropylene cryovial gẹgẹbiSuzhou Ace Biomedical ile-iṣẹ Cryogenic Ibi Vials.

O ṣe pataki lati maṣe kun awọn cryovials nitori eyi yoo mu eewu ti sisan ati itusilẹ awọn akoonu ti o ṣeeṣe (1).

Oṣuwọn Didi ti iṣakoso

Ni gbogbogbo, iwọn didi iṣakoso ti o lọra ti wa ni iṣẹ fun aṣeyọri cryopreservation ti awọn sẹẹli.

Lẹhin awọn ayẹwo ti a ti sọ sinu awọn lẹgbẹrun cryogenic, a gbe wọn sori yinyin tutu tabi ni firiji 4℃ ati ilana didi ti bẹrẹ laarin awọn iṣẹju 5. Gẹgẹbi itọsọna gbogbogbo, awọn sẹẹli ti wa ni tutu ni iwọn -1 si -3 fun iṣẹju kan (2). Eyi jẹ aṣeyọri nipa lilo ẹrọ tutu tabi nipa gbigbe awọn lẹgbẹrun sinu apoti ti o ya sọtọ ti a gbe sinu firisa oṣuwọn iṣakoso -70°C si –90°C.

Gbigbe lọ si Liquid Nitrogen

Awọn lẹgbẹrun cryogenic tio tutunini lẹhinna a gbe lọ si ojò nitrogen olomi fun awọn akoko ailopin ti a pese ni itọju iwọn otutu ti o kere ju -135℃.

Awọn iwọn otutu-kekere wọnyi le ṣee gba nipasẹ immersion ninu omi tabi nitrogen alakoso oru.

Omi tabi Ooru Ipele?

Ibi ipamọ ninu omi nitrogen alakoso ni a mọ lati ṣetọju iwọn otutu otutu pẹlu aitasera pipe, ṣugbọn nigbagbogbo kii ṣe iṣeduro fun awọn idi wọnyi:

• Iwulo fun awọn iwọn nla (ijinle) ti omi nitrogen ti o jẹ eewu ti o pọju. Burns tabi asphyxiation nitori eyi jẹ eewu gidi kan.
• Awọn ọran ti a gbasilẹ ti ibajẹ-agbelebu nipasẹ awọn aṣoju aarun bii aspergillus, hep B ati itankale gbogun ti nipasẹ alabọde nitrogen olomi (2,3)
• Agbara fun nitrogen olomi lati jo sinu awọn lẹgbẹrun nigba immersion. Nigbati o ba yọ kuro lati ibi ipamọ ati ki o gbona si iwọn otutu yara, nitrogen nyara ni kiakia. Nitoribẹẹ, vial le fọ nigbati o ba yọkuro lati ibi ipamọ omi nitrogen, ṣiṣẹda eewu lati awọn idoti mejeeji ti n fo ati ifihan si awọn akoonu (1, 4).

Fun awọn idi wọnyi, ibi ipamọ otutu-kekere jẹ igbagbogbo julọ ni nitrogen alakoso oru. Nigbati awọn ayẹwo gbọdọ wa ni ipamọ ni ipele omi, o yẹ ki o lo tubing cryoflex pataki.

Isalẹ si ipele oru ni pe iwọn otutu inaro le waye ti o fa awọn iyipada otutu laarin -135 ℃ ati -190 ℃. Eyi nilo abojuto iṣọra ati alãpọn ti awọn ipele nitrogen olomi ati awọn iyatọ iwọn otutu (5).

Ọpọlọpọ awọn aṣelọpọ ṣeduro pe awọn cryovials jẹ o dara fun ibi ipamọ si isalẹ -135 ℃ tabi fun lilo ni ipele oru nikan.

Thawing rẹ Cryopreserved Cells

Ilana gbigbona jẹ aapọn fun aṣa ti o tutu, ati mimu to dara ati ilana ni a nilo lati rii daju ṣiṣeeṣe to dara julọ, imularada, ati iṣẹ ṣiṣe ti awọn sẹẹli. Awọn ilana thawing gangan yoo dale lori awọn iru sẹẹli kan pato. Bibẹẹkọ, gbigbo iyara ni a gba si boṣewa si:

• Dinku eyikeyi ipa lori imularada cellular
• Iranlọwọ dinku akoko ifihan si awọn solutes ti o wa ninu media didi
• Gbe eyikeyi bibajẹ nipasẹ yinyin recrystalisation

Awọn iwẹ omi, awọn iwẹ ileke, tabi awọn ohun elo adaṣe adaṣe ni a lo nigbagbogbo lati di awọn ayẹwo.

Nigbagbogbo laini sẹẹli 1 ti wa ni yo ni akoko kan fun awọn iṣẹju 1-2, nipa yiyi rọra ni iwẹ omi ℃ 37 ℃ titi ti yinyin kekere yoo fi silẹ ninu vial ṣaaju ki wọn fọ ni alabọde idagba ti a ti gbona tẹlẹ.

Fun diẹ ninu awọn sẹẹli gẹgẹbi awọn ọmọ inu osin mammalian, imorusi lọra jẹ pataki fun iwalaaye wọn.

Awọn sẹẹli naa ti ṣetan fun aṣa sẹẹli, ipinya sẹẹli, tabi ni ọran ti awọn sẹẹli sẹẹli haematopoietic - awọn iwadii ṣiṣe ṣiṣeeṣe lati ṣe iṣeduro iduroṣinṣin ti awọn sẹẹli sẹẹli oluranlọwọ ṣaaju itọju ailera myeloablative.

O jẹ iṣe deede lati mu awọn aliquots kekere ti ayẹwo ti a ti fọ tẹlẹ ti a lo lati ṣe kika sẹẹli lati pinnu awọn ifọkansi sẹẹli fun fifin ni aṣa. Lẹhinna o le ṣe ayẹwo awọn abajade ti awọn ilana ipinya sẹẹli ati pinnu ṣiṣeeṣe sẹẹli.

Awọn iṣe ti o dara julọ fun Ibi ipamọ ti Cryovials

Aṣeyọri cryopreservation ti awọn ayẹwo ti o fipamọ sinu awọn cryovial da lori ọpọlọpọ awọn eroja ninu ilana pẹlu ibi ipamọ to dara ati titọju igbasilẹ.

• Pipin awọn sẹẹli laarin awọn ipo ibi ipamọ- Ti awọn iwọn ba gba laaye, pin awọn sẹẹli laarin awọn lẹgbẹrun ki o tọju wọn ni awọn ipo ọtọtọ lati dinku eewu pipadanu ayẹwo nitori awọn ikuna ohun elo.
• Dena agbelebu-kokoro- Jade fun lilo ẹyọkan cryogenic lẹgbẹrun tabi autoclave ṣaaju lilo atẹle
• Lo awọn ege ti o ni iwọn deede fun awọn sẹẹli rẹ- awọn lẹgbẹrun wa ni iwọn awọn iwọn laarin 1 ati 5mls. Yẹra fun fifun awọn apọn lati dinku eewu ti fifọ.
• Yan inu tabi ita asapo cryogenic lẹgbẹrun- Awọn agbọn ti inu inu ni a ṣe iṣeduro nipasẹ diẹ ninu awọn ile-ẹkọ giga fun awọn igbese aabo - wọn tun le ṣe idiwọ ibajẹ lakoko kikun tabi nigba ti o fipamọ sinu nitrogen olomi.
• Idilọwọ jijo- Lo awọn edidi abẹrẹ bi-meji ti a mọ sinu fila-filati tabi awọn oruka O lati ṣe idiwọ jijo ati idoti.
• Lo 2D barcodes ati aami lẹgbẹrun- lati rii daju wiwa kakiri, awọn lẹgbẹrun pẹlu awọn agbegbe kikọ nla jẹ ki vial kọọkan jẹ aami to peye. 2D barcodes le ṣe iranlọwọ pẹlu iṣakoso ibi ipamọ ati titọju igbasilẹ. Awọn fila koodu awọ wulo fun idanimọ rọrun.
• Itọju ipamọ deedee- Lati rii daju pe awọn sẹẹli ko padanu, awọn ohun elo ibi ipamọ yẹ ki o ṣetọju iwọn otutu nigbagbogbo ati awọn ipele nitrogen olomi. Awọn itaniji yẹ ki o wa ni ibamu lati titaniji awọn olumulo ti awọn aṣiṣe.

Awọn iṣọra Aabo

nitrogen olomi ti di adaṣe ti o wọpọ ni iwadii ode oni ṣugbọn o gbe eewu ipalara nla ti o ba lo ni aṣiṣe.

Ohun elo aabo ti ara ẹni ti o tọ (PPE) yẹ ki o wọ lati dinku eewu frostbite, gbigbona ati awọn iṣẹlẹ ikolu miiran nigba mimu nitrogen olomi mu. Wọ

• Awọn ibọwọ cryogenic
• Aso yàrá
• Ikolu sooro oju kikun oju ti o tun bo ọrun
• Awọn bata ẹsẹ ti o ni pipade
• Splashproof ṣiṣu apron

Awọn firiji nitrogen olomi yẹ ki o gbe si awọn agbegbe ti o ni afẹfẹ daradara lati dinku eewu asphyxiation - nitrogen salọ ti o yọ kuro ati yipo atẹgun oju aye. Awọn ile itaja iwọn didun nla yẹ ki o ni awọn eto itaniji atẹgun kekere.

Ṣiṣẹ ni orisii nigbati mimu nitrogen olomi jẹ apẹrẹ ati lilo rẹ ni ita awọn wakati iṣẹ deede yẹ ki o jẹ eewọ.

Cryovials lati ṣe atilẹyin Sisẹ-iṣẹ Rẹ

Ile-iṣẹ Suzhou Ace Biomedical nfunni ni yiyan awọn ọja lọpọlọpọ ti o pade awọn iwulo ipamọ cryopreservation fun awọn oriṣiriṣi awọn sẹẹli. Pọtifolio pẹlu ọpọlọpọ awọn tubesas daradara bi ọpọlọpọ awọn cryovial ti ko ni ifo.

Awọn cryovial wa ni:

• Lab Screw Cap 0.5mL 1.5mL 2.0mL Cryovial Cryogenic Vials Conical Isalẹ Cryotube pẹlu Gasket

  ● 0.5ml,1.5ml,2.0ml sipesifikesonu,pẹlu yeri tabi laisi yeri
  ● Conical tabi ara lawujọ oniru, ifo tabi ti kii-ni ifo wa mejeeji wa
  ● Awọn tubes fila skru jẹ ti polypropylene ipele iṣoogun
  ● PP Cryotube Vials le jẹ tutunini leralera ati yo
  ● Apẹrẹ fila ita le dinku iṣeeṣe ibajẹ lakoko itọju ayẹwo.
  ● Dabaru awọn tubes cryogenic fila Awọn okun dabaru gbogbo agbaye fun lilo
  ● Awọn tubes baamu awọn rotors ti o wọpọ julọ
  ● Cryogenic tube o-ring tubes ipele ti 1-inch ati 2-inch, 48well, 81well,96well and 100well firisa apoti
  ● Autoclavable si 121°C ati didi si -86°C

  APA KO	OHUN elo	Iwọn didun	CAPÀWÒ	PCS/BAG	BAGS/ỌJỌ
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	Dudu,Yellow,buluu,pupa,Eleyi ti,funfun	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	Dudu,Yellow,buluu,pupa,Eleyi ti,funfun	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	Dudu,Yellow,buluu,pupa,Eleyi ti,funfun	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Dudu,Yellow,buluu,pupa,Eleyi ti,funfun	500	10