Ọrọ Iṣaaju
Kini Iyọkuro Acid Nucleic?
Ni awọn ọrọ ti o rọrun julọ, isediwon acid nucleic jẹ yiyọ RNA ati/tabi DNA kuro ninu ayẹwo ati gbogbo awọn apọju ti ko wulo. Ilana ti isediwon ya sọtọ awọn acids nucleic lati inu apẹẹrẹ kan ati ki o fun wọn ni irisi eluate ti o ni idojukọ, ti o ni ominira lati awọn diluents ati awọn contaminants ti o le ni ipa lori eyikeyi awọn ohun elo isalẹ.
Awọn ohun elo ti Nucleic Acid isediwon
Awọn acids nucleic ti a sọ di mimọ ni a lo ni plethora ti awọn ohun elo oriṣiriṣi, ti o wa kọja awọn ile-iṣẹ oriṣiriṣi lọpọlọpọ. Itọju ilera jẹ boya agbegbe nibiti o ti lo pupọ julọ, pẹlu RNA ti a sọ di mimọ ati DNA ti o nilo fun ogun ti awọn oriṣiriṣi awọn idi idanwo.
Awọn ohun elo ti isediwon acid nucleic ni ilera pẹlu:
- Atẹle iran ti nbọ (NGS)
- Imudara-orisun SNP Genotyping
- Orun-orisun Genotyping
- Ihamọ Enzyme Digestion
- Awọn itupalẹ nipa lilo awọn ensaemusi Iyipada (fun apẹẹrẹ ligition ati cloning)
Awọn aaye miiran tun wa ni ikọja ilera nibiti a ti lo isediwon acid nucleic, pẹlu ṣugbọn kii ṣe opin si idanwo baba, awọn oniwadi ati awọn jinomiki.
Itan kukuru ti Iyọkuro Acid Nucleic
DNA isediwonọjọ ti o ti pẹ sẹhin, pẹlu ipinya akọkọ ti a mọ ti ṣe nipasẹ dokita Swiss kan ti a npè ni Friedrich Miescher ni 1869. Miescher nireti lati yanju awọn ilana ipilẹ ti igbesi aye nipa ṣiṣe ipinnu akojọpọ kemikali ti awọn sẹẹli. Lẹhin ti o kuna pẹlu awọn lymphocytes, o ni anfani lati gba omi robi ti DNA lati awọn leukocytes ti a ri ninu pus lori awọn bandages ti a danu. O ṣe eyi nipa fifi acid kun ati lẹhinna alkali si sẹẹli lati lọ kuro ni cytoplasm sẹẹli, ati lẹhinna ṣe agbekalẹ ilana kan lati ya DNA kuro lati awọn ọlọjẹ miiran.
Ni atẹle iwadi ti ilẹ-ilẹ Miescher, ọpọlọpọ awọn onimo ijinlẹ sayensi ti lọ siwaju ati ṣe agbekalẹ awọn ilana lati ya sọtọ ati sọ DNA di mimọ. Edwin Joseph Cohn, onimọ-jinlẹ amuaradagba kan ṣe agbekalẹ ọpọlọpọ awọn ilana fun isọdọmọ amuaradagba lakoko WW2. O jẹ iduro fun ipinya ida-ara albumin omi ara ti pilasima ẹjẹ, eyiti o ṣe pataki ni mimu titẹ osmotic ninu awọn ohun elo ẹjẹ. Eyi ṣe pataki fun mimu awọn ọmọ ogun laaye.
Ni 1953 Francis Crick, pẹlu Rosalind Franklin ati James Watson, pinnu igbekalẹ DNA, ti o fihan pe o jẹ awọn okun meji ti awọn ẹwọn gigun ti awọn nucleotides nucleic acid. Awari awaridii yii ṣe ọna fun Meselson ati Stahl, ti wọn ni anfani lati ṣe agbekalẹ ilana isọdọtun iwuwo iwuwo lati ya sọtọ DNA kuro ninu kokoro arun E. Coli bi wọn ṣe ṣe afihan ẹda-agbedemeji Konsafetifu ti DNA lakoko idanwo 1958 wọn.
Awọn ilana ti Iyọkuro Acid Nucleic
Kini awọn ipele 4 ti isediwon DNA?
Gbogbo awọn ọna isediwon ṣan silẹ si awọn igbesẹ ipilẹ kanna.
Idalọwọduro sẹẹli. Ipele yii, ti a tun mọ ni lysis sẹẹli, pẹlu fifọ ogiri sẹẹli ati/tabi awo sẹẹli, lati le tu awọn omi inu-cellular ti o ni awọn acids nucleic ti iwulo ninu.
Yiyọ ti aifẹ idoti. Eyi pẹlu awọn lipids awọ ara, awọn ọlọjẹ ati awọn acids nucleic miiran ti aifẹ eyiti o le dabaru pẹlu awọn ohun elo isalẹ.
Ìyàraẹniṣọ́tọ̀. Nọmba awọn ọna oriṣiriṣi lo wa lati ya sọtọ awọn acids nucleic ti iwulo lati lysate ti a ti sọ di mimọ ti o ṣẹda, eyiti o ṣubu laarin awọn ẹka akọkọ meji: orisun ojutu tabi ipo to lagbara (wo apakan atẹle).
Ifojusi. Lẹhin ti awọn acids nucleic ti ya sọtọ lati gbogbo awọn contaminants ati awọn diluents miiran, wọn ti gbekalẹ ni eluate ti o pọju.
Awọn oriṣi meji ti isediwon
Awọn oriṣi meji ti isediwon acid nucleic lo wa - awọn ọna orisun ojutu ati awọn ọna ipinlẹ to lagbara. Ọna ti o da lori ojutu ni a tun mọ ni ọna isediwon kemikali, bi o ṣe pẹlu lilo awọn kemikali lati fọ sẹẹli naa ati wọle si ohun elo iparun. Eyi le jẹ lilo boya awọn agbo ogun Organic gẹgẹbi phenol ati chloroform, tabi ipalara ti o kere si ati nitori naa diẹ sii niyanju awọn agbo ogun inorganic gẹgẹbi Proteinase K tabi silica gel.
Awọn apẹẹrẹ ti awọn ọna isediwon kemikali oriṣiriṣi lati fọ sẹẹli kan pẹlu:
- Osmotic rupturing ti awo ilu
- Enzymatic tito nkan lẹsẹsẹ ti ogiri sẹẹli
- Solubilisation ti awọ ara
- Pẹlu detergents
- Pẹlu alkali itọju
Awọn imọ-ẹrọ ipinlẹ ti o lagbara, ti a tun mọ si awọn ọna ẹrọ, pẹlu ilokulo bi DNA ṣe n ṣe ajọṣepọ pẹlu sobusitireti to lagbara. Nipa yiyan ilẹkẹ tabi moleku eyiti DNA yoo so mọ ṣugbọn atupale ko ni, o ṣee ṣe lati ya awọn mejeeji ya. Awọn apẹẹrẹ ti awọn ilana isọdi-alakoso ti o lagbara pẹlu lilo siliki ati awọn ilẹkẹ oofa.
Isediwon Ileke Oofa Salaye
Ọna isediwon Ileke Oofa
Agbara fun isediwon nipa lilo awọn ilẹkẹ oofa ni a kọkọ mọ ni itọsi AMẸRIKA ti a fiweranṣẹ nipasẹ Trevor Hawkins, fun ile-iṣẹ iwadii Whitehead Institute. Itọsi yii jẹwọ pe o ṣee ṣe lati yọ awọn ohun elo jiini jade nipa sisọ wọn mọ agbẹru atilẹyin ti o lagbara, eyiti o le jẹ ilẹkẹ oofa. Ilana naa ni pe o lo ileke oofa ti o ṣiṣẹ gaan lori eyiti ohun elo jiini yoo so mọ, eyiti o le yapa kuro ninu supernatant nipa lilo agbara oofa si ita ọkọ ti o mu ayẹwo naa.
Kilode ti Lo Isediwon Ilẹkẹ Oofa?
Imọ-ẹrọ isediwon ileke oofa ti n pọ si siwaju sii, nitori agbara ti o dimu fun awọn ilana isediwon yiyara ati lilo daradara. Ni awọn akoko aipẹ awọn idagbasoke ti awọn ilẹkẹ oofa ti iṣẹ ṣiṣe pupọ pẹlu awọn eto ifipamọ to dara, eyiti o jẹ ki adaṣe ṣee ṣe ti isediwon acid nucleic ati ṣiṣan iṣẹ kan eyiti o jẹ ina orisun pupọ ati iye owo daradara. Pẹlupẹlu, awọn ọna isediwon ileke oofa ko kan awọn igbesẹ centrifugation ti o le fa awọn ipa rirẹ ti o fọ awọn ege DNA to gun. Eyi tumọ si pe awọn okun gigun ti DNA wa titi, eyiti o ṣe pataki ni idanwo jinomiki.
Akoko ifiweranṣẹ: Oṣu kọkanla-25-2022