Để các phản ứng khuếch đại thành công, điều cần thiết là các thành phần phản ứng riêng lẻ phải có nồng độ chính xác trong mỗi chế phẩm. Ngoài ra, điều quan trọng là không xảy ra ô nhiễm.
Đặc biệt khi phải thiết lập nhiều phản ứng, người ta đã thiết lập để chuẩn bị cái gọi là hỗn hợp chính thay vì dùng pipet để trộn từng thuốc thử riêng biệt vào từng bình. Hỗn hợp được cấu hình sẵn có sẵn trên thị trường, trong đó chỉ các thành phần dành riêng cho từng mẫu (sơn lót) và nước được thêm vào. Ngoài ra, hỗn hợp chính có thể được chuẩn bị bởi chính bạn. Trong cả hai biến thể, hỗn hợp được phân phối đến từng bình PCR mà không cần khuôn mẫu và mẫu DNA riêng lẻ được thêm riêng vào cuối.
Sử dụng hỗn hợp gốc có một số ưu điểm: Thứ nhất, giảm số bước sử dụng pipet đơn lẻ. Bằng cách này, cả nguy cơ xảy ra lỗi của người dùng trong quá trình sử dụng pipet và nguy cơ ô nhiễm đều được giảm thiểu và tất nhiên là tiết kiệm được thời gian. Về nguyên tắc, độ chính xác của pipet cũng cao hơn do thể tích được định lượng lớn hơn. Điều này rất dễ hiểu khi kiểm tra dữ liệu kỹ thuật của pipet: Thể tích định lượng càng nhỏ thì độ lệch càng cao. Thực tế là tất cả các chế phẩm đều đến từ cùng một bình có tác động tích cực đến tính đồng nhất (nếu trộn đều). Điều này cũng cải thiện khả năng tái tạo của các thí nghiệm.
Khi chuẩn bị hỗn hợp gốc, nên thêm ít nhất 10 % thể tích (ví dụ: nếu cần 10 lần chuẩn bị, hãy tính trên cơ sở 11), sao cho ngay cả bình cuối cùng cũng được đổ đầy. Bằng cách này, có thể bù đắp được sự thiếu chính xác (nhẹ) của pipet và ảnh hưởng của việc mất mẫu khi định lượng dung dịch chứa chất tẩy rửa. Chất tẩy rửa có trong các dung dịch enzyme như polymerase và hỗn hợp tổng thể, gây ra sự hình thành bọt và cặn trên bề mặt bên trong của quần áo thông thường.mẹo pipet.
Tùy thuộc vào ứng dụng và loại chất lỏng được phân phối, nên chọn đúng kỹ thuật sử dụng pipet (1) và chọn thiết bị thích hợp. Đối với các dung dịch chứa chất tẩy rửa, nên sử dụng hệ thống dịch chuyển trực tiếp hoặc còn gọi là đầu tip pipet “độ lưu giữ thấp” thay thế cho pipet đệm khí. Tác dụng củaĐầu tip ACE Pipettedựa trên bề mặt kỵ nước đặc biệt. Chất lỏng chứa chất tẩy rửa không để lại màng cặn ở bên trong và bên ngoài, do đó có thể giảm thiểu sự thất thoát dung dịch.
Bên cạnh việc xác định liều lượng chính xác của tất cả các thành phần, điều quan trọng là không xảy ra tình trạng nhiễm bẩn các chế phẩm. Việc sử dụng vật tư tiêu hao có độ tinh khiết cao là chưa đủ vì quá trình trộn trong pipet đệm khí có thể tạo ra các sol khí còn sót lại trong pipet. DNA có thể chứa trong bình xịt có thể được chuyển từ mẫu này sang mẫu tiếp theo trong bước sử dụng pipet tiếp theo và do đó dẫn đến ô nhiễm. Các hệ thống dịch chuyển trực tiếp nêu trên cũng có thể giảm thiểu rủi ro này. Đối với pipet đệm khí, nên sử dụng đầu lọc để bảo vệ nón pipet bằng cách giữ lại các tia bắn, khí dung và phân tử sinh học.
Thời gian đăng: Dec-06-2022