Muvaffaqiyatli kuchaytirish reaktsiyalari uchun har bir preparatda individual reaktsiya komponentlari to'g'ri konsentratsiyada bo'lishi kerak. Bundan tashqari, hech qanday ifloslanish sodir bo'lmasligi muhimdir.
Ayniqsa, ko'plab reaktsiyalarni o'rnatish kerak bo'lganda, har bir reagentni har bir idishga alohida pipetlash o'rniga asosiy aralashmani tayyorlash o'rnatilgan. Oldindan tuzilgan aralashmalar sotuvda mavjud bo'lib, unda faqat namunaga xos komponentlar (primer) va suv qo'shiladi. Shu bilan bir qatorda, asosiy aralashmani o'zingiz tayyorlashingiz mumkin. Ikkala variantda ham aralash har bir PCR idishiga shablonsiz taqsimlanadi va oxirida alohida DNK namunasi qo'shiladi.
Asosiy aralashmani ishlatish bir nechta afzalliklarga ega: Birinchidan, bitta pipetlash bosqichlari soni kamayadi. Shunday qilib, pipetlash paytida foydalanuvchi xatolari xavfi ham, ifloslanish xavfi ham minimallashtiriladi va, albatta, vaqt tejaladi. Printsipial jihatdan pipetlashning aniqligi ham yuqori, chunki kattaroq hajmlar dozalanadi. Pipetlarning texnik ma'lumotlarini tekshirishda buni tushunish oson: dozalangan hajm qanchalik kichik bo'lsa, og'ishlar shunchalik yuqori bo'lishi mumkin. Barcha preparatlarning bir xil idishdan kelishi bir hillikka ijobiy ta'sir ko'rsatadi (agar yaxshi aralashsa). Bu, shuningdek, tajribalarning takrorlanishini yaxshilaydi.
Asosiy aralashmani tayyorlashda, hatto oxirgi idish ham to'g'ri to'ldirilishi uchun kamida 10% qo'shimcha hajm qo'shilishi kerak (masalan, 10 ta preparat kerak bo'lsa, 11 ga qarab hisoblang). Shu tarzda, (ozgina) pipetlash noaniqliklari va detarjan o'z ichiga olgan eritmalarni dozalashda namunaning yo'qolishi ta'siri qoplanishi mumkin. Yuvish vositalari polimerazalar va asosiy aralashmalar kabi ferment eritmalarida mavjud bo'lib, ko'pik hosil bo'lishiga va normalning ichki yuzasida qoldiqlarga olib keladi.pipetka uchlari.
Qo'llashga va yuboriladigan suyuqlik turiga qarab, to'g'ri pipetlash texnikasi (1) va tegishli uskunani tanlash kerak. Yuvish vositalarini o'z ichiga olgan eritmalar uchun havo yostig'i pipetkalariga muqobil sifatida to'g'ridan-to'g'ri joy almashtirish tizimi yoki "past ushlab turish" deb ataladigan pipetka uchlari tavsiya etiladi. ning ta'siriACE PIPETTE uchiayniqsa hidrofobik sirtga asoslangan. Kir yuvish vositalarini o'z ichiga olgan suyuqliklar ichki va tashqi tomondan qoldiq plyonka qoldirmaydi, shuning uchun eritmaning yo'qolishini minimallashtirish mumkin.
Barcha komponentlarni aniq dozalashdan tashqari, preparatlarning ifloslanishiga yo'l qo'ymaslik ham muhimdir. Yuqori tozalikdagi sarf materiallaridan foydalanish etarli emas, chunki havo yostig'i pipetkasida pipetlash jarayoni pipetkada qoladigan aerozollarni ishlab chiqarishi mumkin. Aerozolda bo'lishi mumkin bo'lgan DNK keyingi pipetlash bosqichida bir namunadan ikkinchisiga o'tkazilishi va shu bilan ifloslanishga olib kelishi mumkin. Yuqorida aytib o'tilgan to'g'ridan-to'g'ri o'zgartirish tizimlari ham ushbu xavfni minimallashtirishi mumkin. Havo yostig'i pipetkalari uchun chayqalishlar, aerozollar va biomolekulalarni ushlab turish orqali pipetka konusini himoya qilish uchun filtr uchlarini ishlatish mantiqan.
Yuborilgan vaqt: 2022-yil 06-dekabr