Cryovialsodatda hujayra liniyalari va boshqa muhim biologik materiallarni kriyojenik saqlash uchun suyuq azot bilan to'ldirilgan devarlarda ishlatiladi.

Suyuq azotda hujayralarni muvaffaqiyatli saqlab qolish uchun bir necha bosqichlar mavjud. Asosiy printsip sekin muzlatish bo'lsa-da, qo'llaniladigan aniq texnika hujayra turiga va ishlatiladigan kriyoprotektorga bog'liq. Hujayralarni bunday past haroratlarda saqlashda bir nechta xavfsizlik qoidalari va eng yaxshi amaliyotlarni hisobga olish kerak.

Ushbu post krioviallarning suyuq azotda qanday saqlanishi haqida umumiy ma'lumot berishga qaratilgan.

Cryovials nima

Krioviallar juda past haroratlarda suyuqlik namunalarini saqlash uchun mo'ljallangan kichik, qopqoqli flakonlardir. Ular kriyoprotektorda saqlangan hujayralar suyuq azot bilan bevosita aloqada bo'lmasligini ta'minlaydi, bu esa suyuq azotning haddan tashqari sovutish ta'siridan foyda ko'rgan holda hujayra sinishi xavfini kamaytiradi.

Flakonlar odatda bir qator hajm va dizaynlarda mavjud - ular ichki yoki tashqi tomondan tekis yoki yumaloq tagliklari bilan tishli bo'lishi mumkin. Steril va steril bo'lmagan formatlar ham mavjud.

Kim foydalanadiCyrovialsHujayralarni suyuq azotda saqlash

Bir qator NHS va xususiy laboratoriyalar, shuningdek, kordon qon banki, epitelial hujayralar biologiyasi, immunologiya va ildiz hujayra biologiyasi bo'yicha ixtisoslashgan tadqiqot muassasalari hujayralarni krioserveratsiya qilish uchun kriyoviallardan foydalanadilar.

Shu tarzda saqlanadigan hujayralarga B va T hujayralari, CHO hujayralari, gematopoetik ildiz va nasl hujayralari, gibridomalar, ichak hujayralari, makrofaglar, mezenximal ildiz va progenitor hujayralar, monositlar, mieloma, NK hujayralari va pluripotent ildiz hujayralari kiradi.

Krioviallarni suyuq azotda qanday saqlash kerakligi haqida umumiy ma'lumot

Kriyokonservalash - bu hujayralarni va boshqa biologik tuzilmalarni juda past haroratlarda sovutish orqali saqlab qolish jarayoni. Hujayralar suyuq azotda hujayra hayotiyligini yo'qotmasdan yillar davomida saqlanishi mumkin. Bu qo'llaniladigan protseduralarning qisqacha tavsifi.

Hujayra tayyorlash

Namunalarni tayyorlashning aniq usuli hujayra turiga qarab o'zgaradi, lekin umuman olganda, hujayralar to'planadi va hujayraga boy pellet hosil qilish uchun santrifüj qilinadi. Keyin bu granula kriyoprotektor yoki kriyokonservatsiya vositasi bilan aralashtirilgan supernatantda qayta suspenziya qilinadi.

Kriyosaqlash vositasi

Ushbu vosita hujayra ichidagi va hujayradan tashqari kristallarning shakllanishiga va shuning uchun hujayra o'limiga to'sqinlik qiladigan past haroratli muhitda hujayralarni saqlab qolish uchun ishlatiladi. Ularning vazifasi muzlatish, saqlash va eritish jarayonlarida hujayralar va to'qimalar uchun xavfsiz, himoya muhitni ta'minlashdan iborat.

Yangi muzlatilgan plazma (FFP), geparinlangan plazmalit eritmasi yoki zardobsiz, hayvon tarkibiy qismlarisiz eritmalar kabi vosita dimetil sulfoksid (DMSO) yoki glitserin kabi kriyoprotektorlar bilan aralashtiriladi.

Qayta suyultirilgan namuna pelleti polipropilen krioviallarga ajratiladi, masalanSuzhou Ace Biomedikal kompaniyasi Cryogenic Storage Flakonlari.

Krioviallarni haddan tashqari to'ldirmaslik muhim, chunki bu yorilish xavfini oshiradi va tarkibning chiqishi mumkin (1).

Boshqariladigan muzlash tezligi

Umuman olganda, hujayralarni muvaffaqiyatli kriyokonservalash uchun sekin boshqariladigan muzlash tezligi qo'llaniladi.

Namunalar kriyojenik flakonlarga ajratilgandan so'ng, ular ho'l muzga yoki 4 ℃ sovutgichga joylashtiriladi va 5 daqiqa ichida muzlatish jarayoni boshlanadi. Umumiy qo'llanma sifatida hujayralar daqiqada -1 dan -3 gacha tezlikda sovutiladi (2). Bunga dasturlashtiriladigan sovutgich yordamida yoki flakonlarni -70 ° C dan -90 ° C gacha boshqariladigan muzlatkichga joylashtirilgan izolyatsiyalangan qutiga joylashtirish orqali erishiladi.

Suyuq azotga o'tkazish

Keyin muzlatilgan kriogen flakonlar -135 ° C dan past haroratni saqlab turish sharti bilan noma'lum muddatga suyuq azotli idishga o'tkaziladi.

Bu juda past haroratlarni suyuqlik yoki bug 'fazasi azotiga botirish orqali olish mumkin.

Suyuqlik yoki bug 'fazasi?

Suyuq fazali azotda saqlash sovuq haroratni mutlaq mustahkamlik bilan saqlab turishi ma'lum, ammo ko'pincha quyidagi sabablarga ko'ra tavsiya etilmaydi:

• Potentsial xavfli bo'lgan katta hajmdagi (chuqurlikdagi) suyuq azotga bo'lgan ehtiyoj. Buning natijasida kuyish yoki asfiksiya haqiqiy xavf hisoblanadi.
• Aspergillus, hep B kabi yuqumli agentlar va suyuq azot muhiti orqali virus tarqalishining hujjatlashtirilgan holatlari (2,3)
• Suvga cho'mish paytida flakonlarga suyuq azotning oqishi ehtimoli. Saqlashdan olib tashlanganda va xona haroratiga qizdirilsa, azot tez kengayadi. Binobarin, flakon suyuq azot omboridan olib tashlanganida parchalanib ketishi mumkin, bu ham uchuvchi qoldiqlar, ham uning tarkibiga ta'sir qilish xavfini tug'diradi (1, 4).

Shu sabablarga ko'ra, ultra past haroratli saqlash odatda bug' fazasi azotida bo'ladi. Namunalar suyuq fazada saqlanishi kerak bo'lganda, maxsus kriofleks quvurlardan foydalanish kerak.

Bug 'fazasining salbiy tomoni shundaki, vertikal harorat gradienti paydo bo'lishi mumkin, bu esa -135 ℃ dan -190 ℃ gacha bo'lgan harorat o'zgarishiga olib keladi. Bu suyuq azot darajasi va harorat o'zgarishini diqqat bilan va sinchkovlik bilan kuzatishni talab qiladi (5).

Ko'pgina ishlab chiqaruvchilar krioviallarni -135 ℃ gacha saqlash yoki faqat bug 'fazasida foydalanish uchun mos bo'lishini tavsiya qiladi.

Kriyokonservalangan hujayralaringizni eritish

Muzlatilgan madaniyat uchun eritish jarayoni stressdir va hujayralarning optimal hayotiyligi, tiklanishi va funksionalligini ta'minlash uchun to'g'ri ishlov berish va texnika talab qilinadi. Aniq eritish protokollari ma'lum hujayra turlariga bog'liq bo'ladi. Biroq, tez eritish quyidagi holatlar uchun standart hisoblanadi:

• Hujayra tiklanishiga har qanday ta'sirni kamaytiring
• Muzlatish muhitida mavjud bo'lgan eritmalarga ta'sir qilish vaqtini kamaytirishga yordam bering
• Muzning qayta kristallanishi orqali har qanday zararni minimallashtiring

Odatda namunalarni eritish uchun suv hammomlari, boncuk vannalari yoki maxsus avtomatlashtirilgan asboblar qo'llaniladi.

Ko'pincha 1 ta hujayra chizig'i bir vaqtning o'zida 1-2 daqiqa davomida eritiladi, 37 ℃ suv hammomida oldindan qizdirilgan o'sish muhitida yuvilishidan oldin flakonda ozgina muz qolguncha yumshoq aylantiriladi.

Sutemizuvchilar embrionlari kabi ba'zi hujayralar uchun sekin isinish ularning omon qolishi uchun zarurdir.

Hujayralar endi hujayra madaniyati, hujayra izolyatsiyasi yoki gematopoetik ildiz hujayralari holatida - miyeloablativ terapiyadan oldin donor ildiz hujayralarining yaxlitligini kafolatlash uchun hayotiylik tadqiqotlariga tayyor.

Madaniyatga joylashtirish uchun hujayra kontsentratsiyasini aniqlash uchun hujayralarni hisoblash uchun ishlatiladigan oldindan yuvilgan namunaning kichik alikotlarini olish odatiy amaliyotdir. Shundan so'ng siz hujayra izolyatsiyasi protseduralarining natijalarini baholashingiz va hujayra hayotiyligini aniqlashingiz mumkin.

Cryoviallarni saqlash bo'yicha eng yaxshi amaliyotlar

Krioviallarda saqlanadigan namunalarni muvaffaqiyatli kriyokonservalash protokoldagi ko'plab elementlarga, shu jumladan to'g'ri saqlash va yozuvlarni saqlashga bog'liq.

• Hujayralarni saqlash joylari o'rtasida taqsimlang– Agar hajmlar ruxsat etilsa, uskunaning nosozliklari tufayli namunani yo‘qotish xavfini kamaytirish uchun hujayralarni flakonlar o‘rtasida ajrating va ularni alohida joylarda saqlang.
• O'zaro kontaminatsiyani oldini olish– Keyingi foydalanishdan oldin bir martalik steril kriogen flakonlarni yoki avtoklavni tanlang
• Hujayralaringiz uchun mos o'lchamdagi flakonlardan foydalaning- flakonlar 1 dan 5 ml gacha bo'lgan hajmlarda keladi. Yorilish xavfini kamaytirish uchun flakonlarni ortiqcha to'ldirishdan saqlaning.
• Ichki yoki tashqi tishli kriogen flakonlarni tanlang– Ichki tishli flakonlar baʼzi universitetlar tomonidan xavfsizlik choralari uchun tavsiya etiladi – ular toʻldirish vaqtida yoki suyuq azotda saqlanganda ifloslanishning oldini oladi.
• Oqishning oldini olish- Oqish va ifloslanishning oldini olish uchun vintli qopqoq yoki O-halqalarga o'rnatilgan ikki tomonlama muhrlardan foydalaning.
• 2D shtrix-kodlar va flakonlarni etiketkadan foydalaning- kuzatuvni ta'minlash uchun katta yozuv joylari bo'lgan flakonlar har bir flakonga tegishli yorliq qo'yish imkonini beradi. 2D shtrix-kodlar saqlashni boshqarish va yozuvlarni saqlashda yordam berishi mumkin. Rangli kodli qopqoqlar identifikatsiyani osonlashtirish uchun foydalidir.
• Tegishli saqlash xizmati- Hujayralar yo'qolmasligini ta'minlash uchun saqlash idishlari harorat va suyuq azot darajasini doimiy ravishda kuzatib borishlari kerak. Foydalanuvchilarni xatolar haqida ogohlantirish uchun signallar o'rnatilishi kerak.

Xavfsizlik choralari

Suyuq azot zamonaviy tadqiqotlarda keng tarqalgan amaliyotga aylandi, ammo noto'g'ri ishlatilsa, jiddiy shikastlanish xavfi mavjud.

Suyuq azot bilan ishlashda muzlash, kuyish va boshqa noxush hodisalar xavfini kamaytirish uchun tegishli shaxsiy himoya vositalarini (PPE) ishlatish kerak. Kiyish

• Kriogen qo'lqoplar
• Laboratoriya kiyimi
• Bo'yinni ham qoplaydigan zarbaga chidamli to'liq yuz qalqoni
• Oyoqlari yopiq poyabzal
• Chaqmoqqa chidamli plastik apron

Suyuq azotli muzlatgichlar asfiksiya xavfini minimallashtirish uchun yaxshi gazlangan joylarga joylashtirilishi kerak - qochib ketgan azot bug'lanadi va atmosfera kislorodini siqib chiqaradi. Katta hajmli do'konlarda kam kislorodli signalizatsiya tizimlari bo'lishi kerak.

Suyuq azot bilan ishlashda juftlikda ishlash ideal va uni oddiy ish vaqtidan tashqarida ishlatish taqiqlanishi kerak.

Ish oqimini qo'llab-quvvatlash uchun Cryovials

Suzhou Ace Biomedical kompaniyasi har xil turdagi hujayralar uchun kriyokonservatsiya ehtiyojlaringizga javob beradigan mahsulotlarning keng tanlovini taklif etadi. Portfelga bir qator naychalar, shuningdek, steril krioviallar kiradi.

Bizning krioviallarimiz:

• Laboratoriya vintli qopqog'i 0,5 ml 1,5 ml 2,0 ml kriovial kriogen flakon, qistirmali konusli pastki kriyotub

  ● 0,5 ml, 1,5 ml, 2,0 ml spetsifikatsiya, yubka bilan yoki yubkasiz
  ● Konussimon yoki o'z-o'zidan turuvchi dizayn, steril yoki steril bo'lmagan ikkalasi ham mavjud
  ● Vintli qopqoqli quvurlar tibbiy sifatli polipropilendan tayyorlanadi
  ● PP Cryotube flakonlarini qayta-qayta muzlatish va eritish mumkin
  ●Tashqi qopqoq dizayni namunani qayta ishlash jarayonida ifloslanish ehtimolini kamaytirishi mumkin.
  ● Vida qopqog'i kriogen quvurlar Foydalanish uchun universal vintli iplar
  ● Quvurlar eng keng tarqalgan rotorlarga mos keladi
  ● Kriogen naychali o-ring quvurlari standart 1 dyuymli va 2 dyuymli, 48 va 81 quduqli, 96 va 100 quduqli muzlatgich qutilariga mos keladi.
  ● 121 ° C gacha avtoklavlanadi va -86 ° C gacha muzlatiladi

  QISM №	MATERIAL	Ovoz	CAPRANG	PCS/BAG	SUMTALAR/KOL
  ACT05-BL-N	PP	0,5 ml	Qora, sariq, ko'k, qizil, binafsha, oq	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1,5 ml	Qora, sariq, ko'k, qizil, binafsha, oq	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1,5 ml	Qora, sariq, ko'k, qizil, binafsha, oq	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2,0 ml	Qora, sariq, ko'k, qizil, binafsha, oq	500	10