Jarayonlarni standartlashtirish ularni optimallashtirish va keyinchalik o'rnatish va uyg'unlashtirishni o'z ichiga oladi, bu esa foydalanuvchidan mustaqil ravishda uzoq muddatli optimal ishlashga imkon beradi. Standartlashtirish yuqori sifatli natijalarni, shuningdek, ularning takrorlanishi va solishtirilishini ta'minlaydi.
(Klassik) PCRning maqsadi ishonchli va takrorlanadigan natijani yaratishdir. Muayyan ilovalar uchun rentabellikPCR mahsulotiham tegishli. Ushbu reaktsiyalar uchun namunalar buzilmasligi va PCR ish oqimi barqaror bo'lishini ta'minlash uchun ehtiyot bo'lish kerak. Xususan, bu noto'g'ri ijobiy yoki noto'g'ri salbiy natijalarga olib kelishi yoki hatto PCR reaktsiyasini inhibe qilishi mumkin bo'lgan ifloslanishlarni kiritishni minimallashtirishni anglatadi. Bundan tashqari, reaksiya sharoitlari har bir alohida namuna uchun imkon qadar bir xil bo'lishi va keyingi reaktsiyalarga (xuddi shu usulda) o'tkazilishi kerak. Bu reaktsiyalar tarkibiga, shuningdek, tsikldagi haroratni nazorat qilish turiga tegishli. Albatta, foydalanuvchi xatolaridan iloji boricha qochish kerak.
Quyida biz PCRga tayyorgarlik jarayonida va uning davomida duch keladigan qiyinchiliklarni va PCR ish oqimlarini standartlashtirish uchun ishlatiladigan asboblar va sarf materiallariga nisbatan mavjud echimlarga yondashuvlarni ko'rsatamiz.
Reaksiyani tayyorlash
Reaksiya komponentlarini mos ravishda PCR-idishlarga yoki plitalarga tarqatish bir nechta qiyinchiliklarni o'z ichiga oladi, ularni engish kerak:
Reaktsiya shartlari
Mumkin bo'lgan eng bir xil reaktsiya sharoitlariga erishish uchun individual komponentlarning aniq va aniq dozasi ajralmas hisoblanadi. Yaxshi pipetlash texnikasidan tashqari, to'g'ri vositani tanlash juda muhimdir. PCR master-aralashmalarida ko'pincha yopishqoqlikni oshiradigan yoki ko'pik hosil qiluvchi moddalar mavjud. Pipetlash jarayonida ular sezilarli darajada namlanishiga olib keladipipetka uchlari, shuning uchun pipetleme aniqligini pasaytiradi. To'g'ridan-to'g'ri tarqatish tizimlari yoki namlanishga kamroq moyil bo'lgan muqobil pipetka uchlaridan foydalanish pipetlash jarayonining aniqligi va aniqligini oshirishi mumkin.
Kontaminatsiyalar
Chiqarish jarayonida aerozollar hosil bo'ladi, ular pipetkaning ichki qismiga etib borishi mumkin bo'lsa, keyingi pipetlash bosqichida boshqa namunani ifloslantirishi mumkin. Buni filtr uchlari yoki to'g'ridan-to'g'ri o'zgartirish tizimlari yordamida oldini olish mumkin.
kabi sarf materiallarimaslahatlar, PCR ish oqimida ishlatiladigan idishlar va plitalar namunani buzadigan yoki natijani soxtalashtiruvchi moddalarni o'z ichiga olmaydi. Bularga DNK, DNazalar, RNazalar va PCR ingibitorlari, shuningdek, reaksiya jarayonida materialdan potentsial yuvilishi mumkin bo'lgan komponentlar kiradi - suzuvchi moddalar deb nomlanuvchi moddalar.
Foydalanuvchi xatosi
Qanchalik ko'p namunalar qayta ishlansa, xato xavfi shunchalik yuqori bo'ladi. Namuna noto'g'ri idishga yoki noto'g'ri quduqqa pipetlanganda osongina sodir bo'lishi mumkin. Quduqlarni osongina aniqlash mumkin bo'lgan belgilar bilan bu xavfni sezilarli darajada kamaytirish mumkin. Dozalash bosqichlarini avtomatlashtirish orqali "inson omili", ya'ni xatolar va foydalanuvchi bilan bog'liq o'zgarishlar minimallashtiriladi, bu esa, ayniqsa kichik reaktsiya hajmlarida takrorlanishni oshiradi. Buning uchun ish stantsiyasida ishlash uchun etarli o'lchamli barqarorlikka ega plitalar kerak bo'ladi. Biriktirilgan shtrix-kodlar qo'shimcha mashinada o'qilishini ta'minlaydi, bu butun jarayon davomida namunani kuzatishni osonlashtiradi.
Termosiklni dasturlash
Asbobni dasturlash ko'p vaqt talab qiladigan va xatolarga moyil bo'lishi mumkin. Turli xil PCR termal tsikli xususiyatlari ushbu jarayon bosqichini soddalashtirish va eng muhimi, uni xavfsiz qilish uchun birgalikda ishlaydi:
Oson ishlash va yaxshi foydalanuvchi ko'rsatmalari samarali dasturlashning asosidir. Ushbu asosga asoslanib, parol bilan himoyalangan foydalanuvchi ma'muriyati o'z dasturlarini boshqa foydalanuvchilar tomonidan o'zgartirilishining oldini oladi. Agar bir nechta tsiklerlar (bir xil turdagi) ishlatilayotgan bo'lsa, dastur USB yoki ulanish orqali to'g'ridan-to'g'ri bir asbobdan boshqasiga o'tkazilishi foydali bo'ladi. Kompyuter dasturlari kompyuterda dasturlar, foydalanuvchi huquqlari va hujjatlarni markaziy va xavfsiz boshqarish imkonini beradi.
PCR ishlashi
Yugurish jarayonida DNK reaktsiya idishida kuchaytiriladi, bu erda har bir namuna bir xil, izchil reaktsiya sharoitlariga duchor bo'lishi kerak. Jarayon uchun quyidagi jihatlar tegishli:
Haroratni nazorat qilish
Haroratni nazorat qilishda mukammal aniqlik va sikl blokining bir xilligi barcha namunalarni bir tekis haroratga moslashtirish uchun asosdir. Isitish va sovutish elementlarining (peltier elementlari) yuqori sifati, shuningdek ularni blokga ulash usuli "chet effekti" deb nomlanuvchi harorat farqlari xavfini aniqlaydigan hal qiluvchi omillardir.
Bug'lanish
Reaksiyaning individual komponentlarining kontsentratsiyasi bug'lanish tufayli reaktsiya davomida o'zgarmasligi kerak. Aks holda, bu juda oz bo'lishi mumkinPCR mahsulotiyaratilishi mumkin yoki umuman yo'q. Shuning uchun xavfsiz muhrni ta'minlash orqali bug'lanishni minimallashtirish juda muhimdir. Bunday holda, termosiklning isitiladigan qopqog'i va idishning muhri qo'lda ishlaydi. Turli xil muhrlash variantlari mavjudPCR plitalari (havola: muhrlash maqolasi), bu orqali eng yaxshi muhr issiqlik bilan yopish orqali erishiladi. Tsikl qopqog'ining kontakt bosimi tanlangan muhrga sozlanishi sharti bilan boshqa yopilishlar ham mos bo'lishi mumkin.
To'g'ri va takrorlanadigan natijalarni uzoq muddatda ta'minlash uchun jarayonni standartlashtirish mavjud. Bu har doim yaxshi ish holatida bo'lishini ta'minlash uchun uskunaga muntazam texnik xizmat ko'rsatishni o'z ichiga oladi. Barcha sarf materiallari ishlab chiqarilgan barcha partiyalarda doimiy ravishda yuqori sifatga ega bo'lishi va ularning ishonchli mavjudligi kafolatlanishi kerak.
Yuborilgan vaqt: 29-noyabr-2022