Kirish
Nuklein kislotasi qanday ekstrakti?
Eng sodda jihatdan yadro kislotasi olish - bu RNK va / yoki DNKni namunadan olib tashlash va har qanday ortiqcha ortiqcha ortiqcha miqdordan olib tashlash. Qazib olish jarayoni namunadan nuklein kislotalarini ajratadi va ularni quyi oqimlar va ifloslantiruvchi moddalardan xoli, ular quyi oqimlarga ta'sir ko'rsatishi mumkin.
Nuklein kislotasi olishning arizalari
Tozalangan nuklein kislotalar turli xil qo'llanmalarda turli xil dasturlarning plitoralarida qo'llaniladi. Sog'liqni saqlash sohasi, ehtimol u ko'p ishlatiladigan hudud bo'lib, ular turli xil sinov maqsadlarida turli xil test maqsadlaridan farq qiladigan tozalangan RNK va DNK bilan zarur.
Sog'liqni saqlashda nuklein kislotasi ekstradining arizalari quyidagilarni o'z ichiga oladi:
- keyingi avlodning ketma-ketligi (NGS)
- kuchaytirishga asoslangan SNP genotiping
- qatorga asoslangan genotiping
- cheklash fermentini hazm qilish
- O'rnatish fermentlari yordamida tahlil qilinadi (masalan, liple va klonlash)
Sog'liqni saqlashdan tashqari boshqa sohalar ham mavjud, bu erda nuklon kislotasi ekstrakti qo'llaniladi, shu jumladan, otalik sinovlari, sud-tibbiyot va genomika bilan cheklanmaydi.
Nuklein kislotasi olishning qisqacha tarixi
DNK chiqarib olish1869 yilda Friedrix Mistiker ismli Shveytsariya shifokorining uzoq yo'llariga qaytdi. Misscher hujayralarning kimyoviy tarkibini aniqlash orqali hayotning asosiy printsiplarini hal qilishga umid qilgan. Limfotsitlar bilan muvaffaqiyatsiz bo'lgandan so'ng, u tashlangan bandajlardagi yiringda topilgan leykotsitlardan olingan DNKning xom cho'kindi. U kislota va undan keyin kameraga hujayraga hujayraga qoldirib, hujayraning sitoplazini qoldirib, keyin DNKni boshqa oqsillardan ajratib protokol ishlab chiqdi.
Mistscherning er osti tadqiqotidan so'ng, boshqa ko'plab olimlar DNKni ajratib olish va tozalash uchun texnikani oldinga olib borishmoqda. Protein oppozida Edvin Jozef Kon "WW2" da protein tozalash uchun ko'plab usullarni ishlab chiqdi. U qon tomirlarida osmotik bosimni saqlashda muhim bo'lgan qon plazmasining zardob plazmasining zarbasini ajratish uchun javobgar edi. Bu askarlarni tirik saqlash uchun juda muhim edi.
1953 yilda Frensis Frankin Franklin va Jeyms Uotson bilan birga DNK tuzilmasini aniqladi, shuni ko'rsatib, u ikki ipdan yadro kislotidlarining ikki ipidan iborat ekanligini ko'rsatdi. Ushbu ajablanarli kashfiyot Benzistik sentrifuagenation DNKni E. Cola bakteriyalaridan DNKni izolyatsiya qilib, 1958 yilgi tajribasi davomida DNKning yarim konservativ tarqalishini namoyish etgan Meselson va Stanhlga yo'l ochdi.
Nuklein kislotasi texnikasi texnikasi
DNKni olishning 4 bosqichi nima?
Barcha qazib olish usullari bir xil fundamental qadamlarga qadar qaynatiladi.
Uyali aloqa. Ushbu bosqichda, shuningdek, hujayralar devori va / yoki hujayra membranasini buzishni o'z ichiga oladi, bu hujayralar devori va hujayra membranasini o'z ichiga oladi, ularda nuklein kislotalarini o'z ichiga olgan hujayra ichidagi suyuqliklarni chiqaradi.
Kiruvchi qoldiqlarni olib tashlash. Bunga membrana lipidlari, oqsillar va boshqa istalmagan yadro kislotalari kiradi, ular quyi oqimlarga murojaat qilishlari mumkin.
Izolyatsiya. Siz yaratgan bo'shashgan lizatdan olingan nuklein kislotalaridan, siz ikkita asosiy toifaga kiradigan tozalangan lyseate-dan foizlarni ajratishning bir necha xil usullari mavjud: eritma yoki qattiq holat (keyingi qismga qarang).
Konsentratsiya. Nuklelak kislotalaridan keyin boshqa barcha ifloslantiruvchi moddalar va oraliqlardan ajratilgandan so'ng, ular yuqori konsentratsiyalangan oqsoqoldir.
Ikki turni ajratish
Nuklein kislotasi olishning ikki turi mavjud - eritmaga asoslangan usullar va qattiq davlat usullari mavjud. Yechimga asoslangan usul kimyoviy qazib olish usuli sifatida ham tanilgan, chunki u hujayrani buzish va yadro materialga kirishni o'z ichiga oladi. Bu fhenol va xloroform, masalan, fenol va xloroform yoki kamroq zararli va shuning uchun tavsiya etilgan noorganik birikmalardan foydalanish mumkin.
Hujayrani buzish uchun turli xil kimyoviy qazib olish usullariga misollar o'z ichiga oladi:
- membrananing osmik qismi
- hujayra devorining fermentativ hazm
- membranani sotish
- Yuvish bilan
- ishqorli davolash bilan
Mexanik usullar deb ham tanilgan mustahkam davlat texnikasi, DNK qanday qilib qattiq substrat bilan o'zaro ta'sir qilishini o'z ichiga oladi. DNKni bog'lab turadigan boncuk yoki molekulasini tanlab, ikkalasini ajratib bo'lmaydi. Silli va magnit munchoqlardan foydalangan holda qattiq fazali qazib olish texnikasining namunalari.
Magnit boncuk ekstrakti tushuntirildi
Magnit boncuction usuli
Magnit boncuklardan foydalanish potentsial birinchi marta "Treevor Xokins" tomonidan "Whitead Instituti ilmiy-tadqiqot instituti uchun" Trevor Xokkins "tomonidan berilgan AQSh patentida tan olingan. Ushbu patent genetik materiallarni ularni majburiy qo'llab-quvvatlovchi tashuvchiga bog'lab, magnitli bonce bo'lishi mumkinligini tan oldi. Printsip shundaki, siz juda funktsional magnitli boncukdan foydalanasiz, ularda genetik materialni maydalagichdan namunaning tashqi tomoniga qo'llash orqali ajratish mumkin.
Nega magnit boncukdan foydalanishdan foydalanish kerak?
Magnit boncuk qazib olish texnologiyasi tobora keng tarqalgan bo'lib, u tez va samarali qazib olinish tartibi uchun imkoniyatga ega. So'nggi paytlarda yuqori funktsional magnit boncuklar bilan mos keladigan tampon tizimlari mavjud bo'lib, ular juda aniq va xarajatlarni tejaydigan nuklein kislotasi va ish oqimini avtomatlashtirishni avtomatlashtirishga imkon berdi. Bundan tashqari, magnit boncuk ekstruction usullari DNK bo'laklarini buzadigan kesma kuchlarini keltirib chiqarishi mumkin bo'lgan sandig'dan chiqarish bosqichlarini o'z ichiga olmaydi. Bu shuni anglatadiki, bu genomik sinovlarda muhim bo'lgan bu erda DNKning tortalari saqlanib qoladi.
Post vaqti: 25-2022