Qo'lda ishlatiladigan pipetkalar yordamida kichik hajmlarni qanday pipetkalash mumkin

Reagentlar va xarajatlarni kamaytirishga ko'proq e'tibor qaratilayotganligi sababli, kichikroq hajmlar yuqori talabga ega, masalan, PCR Mastermix yoki ferment reaktsiyalarini tayyorlash uchun. Ammo 0,2 dan 5 mkL gacha bo'lgan kichik hajmlarni pipetlash pipetlashning aniqligi va aniqligi uchun yangi muammolarni qo'yadi. Quyidagi fikrlar muhim ahamiyatga ega:

1. Pipetka va uchi o'lchami: Havo yostig'ini iloji boricha kichikroq tutish uchun har doim imkon qadar eng past nominal hajmli pipetkani va eng kichik uchini tanlang. Masalan, 1 µL pipetlashda 1 – 10 µL pipetka o‘rniga 0,25 – 2,5 µL pipetka va mos keladigan uchini tanlang.
2. Kalibrlash va texnik xizmat ko'rsatish: Pipetkalaringiz to'g'ri kalibrlangan va texnik xizmat ko'rsatilishi muhim. Pipetkadagi kichik sozlashlar va singan qismlar tizimli va tasodifiy xato qiymatlarining katta o'sishiga olib keladi. ISO 8655 ga muvofiq kalibrlash yiliga bir marta amalga oshirilishi kerak.
3. Ijobiy joy almashuvchi pipetkalar: laboratoriyangizda past hajmli musbat joy almashuvchi pipetka mavjudligini tekshiring. Umuman olganda, ushbu turdagi pipetkalardan foydalanish klassik havo yostig'i pipetkalariga qaraganda aniqlik va aniqlik nuqtai nazaridan yaxshiroq pipetlash natijasiga olib keladi.
4. Kattaroq hajmlardan foydalanishga harakat qiling: Yakuniy reaktsiyada bir xil miqdorda kattaroq hajmdagi pipetka uchun namunangizni suyultirishni ko'rib chiqishingiz mumkin. Bu juda kichik namuna hajmlari bilan pipetlash xatolarini kamaytirishi mumkin.

Yaxshi vositadan tashqari, tadqiqotchi juda yaxshi pipetlash texnikasiga ega bo'lishi kerak. Quyidagi bosqichlarga alohida e'tibor bering:

1. Maslahat uchun biriktirma: Pipetkani uchiga tiqmang, chunki bu nozik uchining uchiga shikast etkazishi, suyuqlik nurining qayta yo'naltirilishi yoki teshikka zarar etkazishi mumkin. Faqat uchini ulashda engil bosim o'tkazing va prujinali uchi konusli pipetkadan foydalaning.
2. Pipetkani ushlab turish: Santrifüj, sikl va hokazolarni kutayotganda pipetkani qo'lingizda ushlamang. Pipetaning ichki qismi qizib ketadi va havo yostig'i kengayishiga olib keladi, natijada pipetka o'rnatilganda belgilangan hajmdan chetga chiqadi.
3. Oldindan namlash: uchi va pipetka ichidagi havoning namlanishi uchni namuna uchun tayyorlaydi va uzatish hajmini aspiratsiya qilishda bug'lanishni oldini oladi.
4. Vertikal aspiratsiya: bu pipetka burchak ostida ushlab turilganda yuzaga keladigan kapillyar ta'sirni oldini olish uchun kichik hajmlarni ishlatishda juda muhimdir.
5. Cho'milish chuqurligi: kapillyar ta'sir tufayli suyuqlikning uchiga kirishiga yo'l qo'ymaslik uchun uchini iloji boricha kamroq botiring. Asosiy qoida: uchi va hajmi qanchalik kichik bo'lsa, suvga cho'mish chuqurligi shunchalik past bo'ladi. Kichik hajmlarni pipetlashda maksimal 2 mm tavsiya qilamiz.
6. 45° burchak ostida tarqatish: Pipetka 45° burchak ostida ushlab turilganda suyuqlikning optimal chiqishi kafolatlanadi.
7. Idish devoriga yoki suyuqlik yuzasiga tegish: Kichik hajmlarni faqat uchi tomir devoriga tutib turganda yoki suyuqlikka botirilganda to'g'ri tarzda tarqatish mumkin. Hatto uchidan oxirgi tomchi ham to'g'ri tarqatilishi mumkin.
8. Chiqib ketish: uchida mavjud bo'lgan suyuqlikning oxirgi tomchisini ham tarqatish uchun past hajmlarni tarqatgandan keyin puflash majburiydir. Portlash ham tomir devoriga qarshi amalga oshirilishi kerak. Suyuqlik yuzasiga zarba berishda havo pufakchalarini namunaga olib kelmaslik uchun ehtiyot bo'ling.