cryvialsمائع نائٹروجن سے بھرا ہوا دیواروں میں سیل لائنوں اور دیگر اہم حیاتیاتی مواد کے کریوجینک اسٹوریج کے لئے عام طور پر استعمال ہوتے ہیں۔

مائع نائٹروجن میں خلیوں کے کامیاب تحفظ میں کئی مراحل شامل ہیں۔ جب کہ بنیادی اصول ایک آہستہ منجمد ہے ، استعمال کی جانے والی عین مطابق تکنیک کا انحصار سیل کی قسم اور کریوپروٹیکٹینٹ پر ہوتا ہے۔ اس طرح کے کم درجہ حرارت پر خلیوں کو ذخیرہ کرتے وقت حفاظتی تحفظات اور بہترین طریقوں کو مدنظر رکھنا ہے۔

اس پوسٹ کا مقصد اس بات کا جائزہ دینا ہے کہ کس طرح کریویوئلز مائع نائٹروجن میں محفوظ ہیں۔

کریوئیلز کیا ہیں؟

کریووئلز چھوٹے ، کیپڈ شیشی ہیں جو انتہائی کم درجہ حرارت پر مائع کے نمونے ذخیرہ کرنے کے لئے ڈیزائن کیے گئے ہیں۔ وہ اس بات کو یقینی بناتے ہیں کہ کریوپروٹیکٹینٹ میں محفوظ خلیوں کو مائع نائٹروجن کے ساتھ براہ راست رابطے میں نہیں آتا ہے ، سیلولر فریکچر کے خطرے کو کم سے کم کرتے ہیں جبکہ ابھی بھی مائع نائٹروجن کے انتہائی ٹھنڈک اثر سے فائدہ اٹھاتے ہیں۔

شیشے عام طور پر حجم اور ڈیزائن کی ایک حد میں دستیاب ہوتے ہیں - وہ اندرونی یا بیرونی طور پر فلیٹ یا گول بوتلوں کے ساتھ تھریڈ ہوسکتے ہیں۔ جراثیم سے پاک اور غیر سٹرائل فارمیٹس بھی دستیاب ہیں۔

کون استعمال کرتا ہےسائروووئلزخلیوں کو مائع نائٹروجن میں ذخیرہ کرنے کے لئے

این ایچ ایس اور نجی لیبارٹریوں کی ایک رینج ، نیز تحقیقی اداروں کے ساتھ ساتھ ہڈی بلڈ بینکنگ ، اپکلا سیل بیالوجی ، امیونولوجی اور اسٹیم سیل حیاتیات میں مہارت حاصل کرنے والے تحقیقی اداروں کا استعمال کریوپریسرو سیلز کے لئے کریویوئلز کا استعمال کرتے ہیں۔

اس طرح سے محفوظ کردہ خلیوں میں بی اور ٹی خلیات ، سی ایچ او سیلز ، ہیماتوپوائٹک اسٹیم اور پروجینیٹر سیل ، ہائبرڈوماس ، آنتوں کے خلیات ، میکروفیجز ، میسینچیمل اسٹیم اور پروجینیٹر سیل ، مونوکیٹس ، مائیلوما ، این کے سیل اور پلورپوٹینٹ اسٹیم سیل شامل ہیں۔

مائع نائٹروجن میں کریوئیلز کو ذخیرہ کرنے کا طریقہ کا جائزہ

Cryopreseverse ایک ایسا عمل ہے جو خلیوں اور دیگر حیاتیاتی تعمیرات کو بہت کم درجہ حرارت پر ٹھنڈا کرکے محفوظ رکھتا ہے۔ خلیوں کو سیل کے عمل کے نقصان کے بغیر برسوں تک مائع نائٹروجن میں محفوظ کیا جاسکتا ہے۔ یہ استعمال کردہ طریقہ کار کا خاکہ ہے۔

سیل کی تیاری

نمونے تیار کرنے کا صحیح طریقہ سیل کی قسم کے لحاظ سے مختلف ہوگا ، لیکن عام طور پر ، خلیوں کو جمع کیا جاتا ہے اور سیل سے مالا مال چھرہ تیار کرنے کے لئے سینٹرفیوج کیا جاتا ہے۔ اس کے بعد اس گولی کو کریوپروٹیکٹینٹ یا کریوپریسرویشن میڈیم کے ساتھ مل کر سپرنٹنٹنٹ میں دوبارہ بھیج دیا جاتا ہے۔

Cryopresive میڈیم

یہ میڈیم کم درجہ حرارت والے ماحول میں خلیوں کو محفوظ رکھنے کے لئے کام کیا گیا ہے جس کا ان کو انٹرا اور ایکسٹروسیلولر کرسٹل کی تشکیل کو روک کر کیا جائے گا اور اسی وجہ سے سیل کی موت ہوگی۔ ان کا کردار انجماد ، اسٹوریج اور پگھلنے کے عمل کے دوران خلیوں اور ؤتکوں کے لئے ایک محفوظ ، حفاظتی ماحول فراہم کرنا ہے۔

ایک میڈیم جیسے تازہ منجمد پلازما (ایف ایف پی) ، ہیپرینیائزڈ پلازمالیٹ حل یا سیرم فری ، جانوروں کے اجزاء سے پاک حلوں کو ڈیمیتھائل سلفوکسائڈ (ڈی ایم ایس او) یا گلیسرول جیسے کریوپروٹیکٹینٹس کے ساتھ ملایا جاتا ہے۔

دوبارہ مائع نمونہ چھرے کو پولی پروپیلین کریویوئلز جیسے جیسے میں شامل کیا جاتا ہے جیسےسوزہو اککا بائیو میڈیکل کمپنی کریوجینک اسٹوریج شیشیوں.

یہ ضروری ہے کہ کریویوئلز کو زیادہ نہ کریں کیونکہ اس سے کریکنگ کے خطرے اور مشمولات کی ممکنہ رہائی میں اضافہ ہوگا (1)

کنٹرول شدہ منجمد شرح

عام طور پر ، خلیوں کے کامیاب کریوپریژرویشن کے لئے ایک سست کنٹرول شدہ منجمد شرح کا استعمال کیا جاتا ہے۔

نمونے کریوجینک شیشیوں میں گھل مل جانے کے بعد ، وہ گیلے برف پر یا 4 ℃ ​​فرج میں رکھے جاتے ہیں اور منجمد کرنے کا طریقہ کار 5 منٹ کے اندر شروع ہوجاتا ہے۔ ایک عام گائیڈ کے طور پر ، خلیوں کو -1 سے -3 فی منٹ (2) کی شرح سے ٹھنڈا کیا جاتا ہے۔ یہ ایک پروگرام قابل کولر کا استعمال کرتے ہوئے یا کسی موصل خانے میں شیشی رکھ کر –70 ° C سے –90 ° C پر قابو پانے والی شرح فریزر کے ذریعے حاصل کیا جاتا ہے۔

مائع نائٹروجن میں منتقل کریں

اس کے بعد منجمد کریوجینک شیشیوں کو غیر معینہ مدت کے لئے مائع نائٹروجن ٹینک میں منتقل کیا جاتا ہے بشرطیکہ درجہ حرارت -135 than سے بھی کم برقرار رکھا جائے۔

یہ انتہائی کم درجہ حرارت مائع یا بخارات کے مرحلے نائٹروجن میں وسرجن کے ذریعہ حاصل کیا جاسکتا ہے۔

مائع یا بخارات کا مرحلہ؟

مائع مرحلے میں نائٹروجن میں اسٹوریج مطلق مستقل مزاجی کے ساتھ سرد درجہ حرارت کو برقرار رکھنے کے لئے جانا جاتا ہے ، لیکن مندرجہ ذیل وجوہات کی بناء پر اکثر سفارش نہیں کی جاتی ہے۔

• مائع نائٹروجن کی بڑی مقدار (گہرائی) کی ضرورت جو ایک ممکنہ خطرہ ہے۔ اس کی وجہ سے جلنے یا دم گھٹنے کا ایک حقیقی خطرہ ہے۔
• مائع نائٹروجن میڈیم (2،3) کے ذریعہ ایسپرگیلس ، ہیپ بی اور وائرل جیسے متعدی ایجنٹوں کے ذریعہ کراس آلودگی کے دستاویزی مقدمات (2،3)
• وسرجن کے دوران مائع نائٹروجن شیشیوں میں لیک ہونے کا امکان۔ جب اسٹوریج سے ہٹا دیا جاتا ہے اور کمرے کے درجہ حرارت تک گرم ہوجاتا ہے تو ، نائٹروجن تیزی سے پھیل جاتا ہے۔ اس کے نتیجے میں ، جب مائع نائٹروجن اسٹوریج سے ہٹا دیا جاتا ہے تو شیشی بکھر سکتی ہے ، جس سے اڑنے والے ملبے اور مشمولات (1 ، 4) کی نمائش دونوں سے خطرہ پیدا ہوتا ہے۔

ان وجوہات کی بناء پر ، انتہائی کم درجہ حرارت کا ذخیرہ عام طور پر بخارات کے مرحلے نائٹروجن میں ہوتا ہے۔ جب نمونے مائع مرحلے میں محفوظ کیے جائیں تو ، خصوصی کریفلیکس نلیاں استعمال کی جائیں۔

بخارات کے مرحلے کا منفی پہلو یہ ہے کہ عمودی درجہ حرارت کا میلان ہوسکتا ہے جس کے نتیجے میں درجہ حرارت میں -135 ℃ اور -190 ℃ کے درمیان درجہ حرارت میں اتار چڑھاؤ آتا ہے۔ اس کے لئے مائع نائٹروجن کی سطح اور درجہ حرارت کی مختلف حالتوں (5) کی محتاط اور مستعد نگرانی کی ضرورت ہے۔

بہت سے مینوفیکچررز تجویز کرتے ہیں کہ کریویوئل اسٹوریج کے لئے -135 ℃ یا صرف بخارات کے مرحلے میں استعمال کے ل suitable موزوں ہیں۔

اپنے Cryopresered خلیوں کو پگھلا دینا

پگھلنے کا طریقہ کار منجمد ثقافت کے لئے دباؤ کا باعث ہے ، اور خلیوں کی زیادہ سے زیادہ اہلیت ، بحالی اور فعالیت کو یقینی بنانے کے لئے مناسب ہینڈلنگ اور تکنیک کی ضرورت ہے۔ عین مطابق پگھلنے والے پروٹوکول کا انحصار مخصوص سیل کی اقسام پر ہوگا۔ تاہم ، تیزی سے پگھلنا معیاری سمجھا جاتا ہے:

• سیلولر بحالی پر کسی بھی اثرات کو کم کریں
• منجمد میڈیا میں موجود محلولوں کی نمائش کے وقت کو کم کرنے میں مدد کریں
• برف کی بحالی کے ذریعہ کسی بھی نقصان کو کم سے کم کریں

پانی کے حمام ، مالا کے حمام ، یا خصوصی خودکار آلات عام طور پر نمونے پگھلنے کے لئے استعمال ہوتے ہیں۔

زیادہ تر کثرت سے 1 سیل لائن کو 1-2 منٹ کے لئے ایک وقت میں پگھلایا جاتا ہے ، جب تک کہ وہ پانی کے غسل میں آہستہ سے گھومتے ہو جب تک کہ شیشی میں صرف تھوڑا سا برف باقی نہ ہو اس سے پہلے کہ وہ پہلے سے تیار شدہ نشوونما کے وسط میں دھوئے جائیں۔

کچھ خلیوں جیسے ستنداریوں کے برانن کے لئے ، ان کی بقا کے لئے سست وارمنگ ضروری ہے۔

خلیات اب سیل کلچر ، سیل تنہائی ، یا ہیماتوپوائٹک اسٹیم سیلز کی صورت میں تیار ہیں - مائیلو ایبلویٹو تھراپی سے پہلے ڈونر اسٹیم سیلز کی سالمیت کی ضمانت کے لئے عملی مطالعات۔

ثقافت میں چڑھانا کے ل cell سیل کی تعداد کا تعین کرنے کے لئے سیل کی گنتی کے لئے استعمال ہونے والے پری واشڈ نمونے کے چھوٹے چھوٹے حصوں کو لینا معمول کی بات ہے۔ اس کے بعد آپ سیل تنہائی کے طریقہ کار کے نتائج کا جائزہ لے سکتے ہیں اور سیل کی اہلیت کا تعین کرسکتے ہیں۔

کریویوئلز کے ذخیرہ کرنے کے لئے بہترین عمل

کریووئلز میں ذخیرہ شدہ نمونوں کی کامیاب کریوپریژرویشن کا انحصار پروٹوکول کے بہت سے عناصر پر ہے جس میں مناسب اسٹوریج اور ریکارڈ رکھنا بھی شامل ہے۔

• اسٹوریج کے مقامات کے مابین خلیوں کو تقسیم کریں- اگر حجم کی اجازت ہے تو ، شیشیوں کے مابین خلیوں کو تقسیم کریں اور سامان کی ناکامیوں کی وجہ سے نمونے کے نقصان کے خطرے کو کم کرنے کے لئے ان کو الگ الگ مقامات پر محفوظ کریں۔
• کراس آلودگی کو روکیں-بعد کے استعمال سے پہلے سنگل استعمال جراثیم سے پاک کریوجینک شیشیوں یا آٹوکلیو کا انتخاب کریں
• اپنے خلیوں کے لئے مناسب سائز کے شیشوں کا استعمال کریں- شیشے 1 اور 5 ملی لیس کے درمیان حجم کی ایک حد میں آتے ہیں۔ کریکنگ کے خطرے کو کم کرنے کے لئے زیادہ سے زیادہ شیشیوں سے پرہیز کریں۔
• اندرونی یا بیرونی تھریڈڈ کریوجینک شیشیوں کو منتخب کریں- کچھ یونیورسٹیوں کے ذریعہ اندرونی طور پر تھریڈڈ شیشیوں کی سفارش کی جاتی ہے تاکہ وہ حفاظتی اقدامات کے ل. - وہ بھرنے کے دوران آلودگی کو بھی روک سکتے ہیں یا مائع نائٹروجن میں ذخیرہ کرتے وقت۔
• رساو کو روکیں-رساو اور آلودگی کو روکنے کے لئے سکرو کیپ یا او رنگس میں ڈھالے ہوئے دو انجکشن والے مہروں کا استعمال کریں۔
• 2D بارکوڈس اور لیبل شیشیوں کا استعمال کریں- سراغ لگانے کو یقینی بنانے کے لئے ، بڑے تحریری علاقوں والے شیشے ہر شیشی کو مناسب لیبل لگانے کے قابل بناتے ہیں۔ 2D بارکوڈس اسٹوریج مینجمنٹ اور ریکارڈ کیپنگ میں مدد کرسکتے ہیں۔ رنگین کوڈڈ ٹوپیاں آسان شناخت کے ل useful مفید ہیں۔
• ذخیرہ کرنے کی مناسب بحالی- یہ یقینی بنانے کے لئے کہ خلیوں کو ضائع نہیں کیا جاتا ہے ، اسٹوریج برتنوں کو درجہ حرارت اور مائع نائٹروجن کی سطح کی مستقل نگرانی کرنی چاہئے۔ غلطیوں سے متعلق صارفین کو آگاہ کرنے کے لئے الارم لگائے جائیں۔

حفاظتی احتیاطی تدابیر

مائع نائٹروجن جدید تحقیق میں عام رواج بن گیا ہے لیکن اگر غلط استعمال کیا گیا تو سنگین چوٹ کا خطرہ ہے۔

مائع نائٹروجن کو سنبھالتے وقت فراسٹ بائٹ ، جلانے اور دیگر منفی واقعات کے خطرے کو کم سے کم کرنے کے لئے مناسب ذاتی حفاظتی سازوسامان (پی پی ای) پہننا چاہئے۔ پہنیں

• کریوجینک دستانے
• لیبارٹری کوٹ
• اثر مزاحم مکمل چہرے کی ڈھال جو گردن کا احاطہ بھی کرتا ہے
• بند پیر کے جوتے
• اسپلش پروف پلاسٹک کا تہبند

مائع نائٹروجن ریفریجریٹرز کو اچھی طرح سے ہوادار علاقوں میں رکھنا چاہئے تاکہ وہ اسفکسٹیشن کے خطرے کو کم سے کم کرسکیں۔ بڑے حجم اسٹورز میں آکسیجن کے الارم کے نظام میں کم ہونا چاہئے۔

مائع نائٹروجن کو سنبھالتے وقت جوڑے میں کام کرنا مثالی ہے اور عام کام کے اوقات سے باہر اس کا استعمال ممنوع ہونا چاہئے۔

آپ کے ورک فلو کی حمایت کرنے کے لئے کریوئلز

سوزہو اکیس بایومیڈیکل کمپنی مصنوعات کا ایک وسیع انتخاب پیش کرتی ہے جو مختلف قسم کے خلیوں کے لئے آپ کی کریوپریژریشن کی ضروریات کو پورا کرتی ہے۔ پورٹ فولیو میں ٹیوبس کی ایک رینج کے ساتھ ساتھ جراثیم سے پاک کریویوئلز کی ایک رینج بھی شامل ہے۔

ہمارے کریویوئلز یہ ہیں:

• لیب سکرو کیپ 0.5 ملی لٹر 1.5 ملی لٹر 2.0 ملی لٹر کریوویئل کریوجینک شیشی مخروطی نیچے کریوٹوب گاسکیٹ کے ساتھ

  sk 0.5 ملی لٹر ، 1.5 ملی لٹر ، 2.0 ملی لٹر تفصیلات ، اسکرٹ کے ساتھ یا بغیر اسکرٹ کے
  ● مخروط یا خود اسٹینڈنگ ڈیزائن ، جراثیم سے پاک یا غیر سٹرائل دونوں دستیاب ہیں
  ● سکرو کیپ ٹیوبیں میڈیکل گریڈ پولی پروپلین سے بنی ہیں
  ● پی پی کریوٹوب شیشیوں کو بار بار منجمد اور پگھلایا جاسکتا ہے
  external بیرونی ٹوپی ڈیزائن نمونے کے علاج کے دوران آلودگی کے امکان کو کم کرسکتا ہے۔
  use استعمال کے لئے سکرو کیپ کریوجینک ٹیوبیں یونیورسل سکرو تھریڈز
  ● نلیاں سب سے عام روٹرز پر فٹ ہیں
  ● کریوجینک ٹیوب او رنگنگ ٹیوبیں معیاری 1 انچ اور 2 انچ ، 48 ویل ، 81 ویل ， 96 ویل اور 100 ویل فریزر بکس فٹ ہیں
  ● 121 ° C پر آٹوکلاو ایبل اور -86 ° C سے منجمد

  حصہ نمبر	مواد	حجم	ٹوپیرنگ	پی سی/بیگ	بیگ/کیس
  ACT05-BL-N	PP	0.5 ملی لٹر	سیاہ ، پیلا ، نیلے ، سرخ ، جامنی ، سفید	500	10
  ایکٹ 15-بل-این	PP	1.5 ملی لٹر	سیاہ ، پیلا ، نیلے ، سرخ ، جامنی ، سفید	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5 ملی لٹر	سیاہ ، پیلا ، نیلے ، سرخ ، جامنی ، سفید	500	10
  ایکٹ 20-بل-این	PP	2.0 ملی لٹر	سیاہ ، پیلا ، نیلے ، سرخ ، جامنی ، سفید	500	10