پی سی آر ورک فلوز (معیاری کے ذریعے معیار میں اضافہ)

عمل کی معیاری کاری میں ان کی اصلاح اور اس کے نتیجے میں اسٹیبلشمنٹ اور ہم آہنگی شامل ہے، جس سے طویل مدتی بہترین کارکردگی کی اجازت دی جاتی ہے – صارف سے آزاد۔ معیاری کاری اعلیٰ معیار کے نتائج کے ساتھ ساتھ ان کی تولیدی صلاحیت اور موازنہ کو یقینی بناتی ہے۔

(کلاسک) پی سی آر کا مقصد ایک قابل اعتماد اور تولیدی نتیجہ پیدا کرنا ہے۔ کچھ ایپلی کیشنز کے لیے، کی پیداوارپی سی آر پروڈکٹبھی متعلقہ ہے. ان ردعمل کے لیے، اس بات کو یقینی بنانے کے لیے احتیاط برتنی چاہیے کہ نمونوں سے سمجھوتہ نہ کیا جائے اور PCR ورک فلو مستحکم رہے۔ خاص طور پر، یہ آلودگیوں کے تعارف کو کم سے کم کرنے کا ترجمہ کرتا ہے جو غلط مثبت یا غلط منفی نتائج کا باعث بن سکتے ہیں یا PCR کے رد عمل کو روک سکتے ہیں۔ مزید برآں، رد عمل کی شرائط ہر ایک فرد کے نمونے کے لیے ہر ممکن حد تک یکساں ہونی چاہئیں اور بعد میں آنے والے رد عمل (اسی طریقہ کے) میں بھی قابل منتقلی ہونی چاہئیں۔ یہ رد عمل کی ساخت کے ساتھ ساتھ سائیکلر میں درجہ حرارت کے کنٹرول کی قسم کا حوالہ دیتا ہے۔ یقیناً صارف کی غلطیوں سے حتی الامکان بچنا چاہیے۔

ذیل میں، ہم ان چیلنجوں کا مظاہرہ کریں گے جن کا سامنا پی سی آر کی تیاری کے دوران اور اس کے دوران ہوتا ہے۔

رد عمل کی تیاری

پی سی آر برتنوں، یا پلیٹوں میں رد عمل کے اجزاء کی تقسیم بالترتیب متعدد چیلنجوں پر مشتمل ہے جن پر قابو پانا ضروری ہے:

رد عمل کے حالات

انفرادی اجزاء کی صحیح اور عین مطابق خوراک ناگزیر ہے جب ممکنہ طور پر سب سے زیادہ ایک جیسی رد عمل کی شرائط کا مقصد ہو۔ پائپنگ کی اچھی تکنیک کے علاوہ، صحیح ٹول کا انتخاب بھی اہم ہے۔ پی سی آر ماسٹر مکسز میں اکثر ایسے مادے ہوتے ہیں جو چپکنے کی صلاحیت کو بڑھاتے ہیں یا جھاگ پیدا کرتے ہیں۔ پائپٹنگ کے عمل کے دوران، یہ کافی گیلا ہونے کا باعث بنتے ہیں۔پائپیٹ کی تجاویز، اس طرح پائپٹنگ کی درستگی کو کم کرتا ہے۔ ڈائریکٹ ڈسپینسنگ سسٹمز یا متبادل پائپیٹ ٹپس کا استعمال جو گیلے ہونے کا کم خطرہ رکھتے ہیں پائپٹنگ کے عمل کی درستگی اور درستگی کو بہتر بنا سکتے ہیں۔

آلودگیاں

ڈسپنسنگ کے عمل کے دوران، ایروسول تیار کیے جاتے ہیں، جنہیں اگر پائپیٹ کے اندر تک پہنچنے کی اجازت دی جائے تو، اگلے پائپٹنگ مرحلے کے دوران ممکنہ طور پر دوسرے نمونے کو آلودہ کر سکتے ہیں۔ فلٹر ٹپس یا براہ راست نقل مکانی کے نظام کو استعمال کرکے اسے روکا جاسکتا ہے۔
استعمال کی اشیاء جیسےتجاویزپی سی آر ورک فلو میں استعمال ہونے والے برتنوں اور پلیٹوں میں ایسے مادے نہیں ہونے چاہئیں جو نمونے سے سمجھوتہ کرتے ہیں یا نتیجہ کو غلط بناتے ہیں۔ ان میں DNA، DNases، RNases اور PCR inhibitors کے ساتھ ساتھ ایسے اجزاء شامل ہیں جو ممکنہ طور پر رد عمل کے دوران مواد سے نکل سکتے ہیں - وہ مادے جنہیں leachables کہا جاتا ہے۔

صارف کی غلطی

جتنے زیادہ نمونوں پر کارروائی کی جائے گی، غلطی کا خطرہ اتنا ہی زیادہ ہوگا۔ یہ آسانی سے ہو سکتا ہے کہ نمونہ غلط برتن یا غلط کنویں میں ڈالا گیا ہو۔ کنوؤں کی آسانی سے قابل فہم نشان کاری سے اس خطرے کو کافی حد تک کم کیا جا سکتا ہے۔ ڈسپنسنگ کے اقدامات کے آٹومیشن کے ذریعے، "انسانی عنصر"، یعنی غلطیاں اور صارف سے متعلقہ تغیرات کو کم کیا جاتا ہے، اس طرح تولیدی صلاحیت میں اضافہ ہوتا ہے، خاص طور پر چھوٹے رد عمل کے حجم کی صورت میں۔ اس کے لیے ورک سٹیشن میں کام کرنے کے لیے کافی جہتی استحکام کی پلیٹوں کی ضرورت ہوتی ہے۔ منسلک بارکوڈز اضافی مشین پڑھنے کی اہلیت فراہم کرتے ہیں، جو پورے عمل میں نمونے سے باخبر رہنے کو آسان بناتا ہے۔

تھرمو سائکلر کی پروگرامنگ

کسی آلے کو پروگرام کرنا وقت گزارنے کے ساتھ ساتھ غلطی کا شکار بھی ثابت ہو سکتا ہے۔ مختلف پی سی آر تھرمل سائیکلر فیچرز اس عمل کو آسان بنانے کے لیے اور سب سے اہم بات، اسے محفوظ بنانے کے لیے مل کر کام کرتے ہیں:
آسان آپریشن اور صارف کی اچھی رہنمائی موثر پروگرامنگ کی بنیاد ہے۔ اس بنیاد پر تعمیر کرتے ہوئے، پاس ورڈ سے محفوظ صارف انتظامیہ کسی کے اپنے پروگراموں کو دوسرے صارفین کے ذریعے تبدیل کرنے سے روکے گی۔ اگر ایک سے زیادہ سائیکلرز (ایک ہی قسم کے) استعمال میں ہیں، تو یہ فائدہ مند ہے اگر کسی پروگرام کو براہ راست USB یا کنیکٹیویٹی کے ذریعے ایک آلے سے دوسرے میں منتقل کیا جا سکے۔ کمپیوٹر سافٹ ویئر کمپیوٹر پر پروگراموں، صارف کے حقوق اور دستاویزات کی مرکزی اور محفوظ انتظامیہ کو قابل بناتا ہے۔

پی سی آر چلائیں۔

دوڑ کے دوران، رد عمل کے برتن میں ڈی این اے کو بڑھایا جاتا ہے، جہاں ہر نمونے کو یکساں، مسلسل رد عمل کے حالات کا نشانہ بنایا جانا چاہیے۔ مندرجہ ذیل پہلو اس عمل سے متعلق ہیں:

درجہ حرارت کنٹرول

ٹمپریچر کنٹرول میں بہترین درستگی اور سائکلر بلاک کی یکسانیت تمام نمونوں کے درجہ حرارت کی کنڈیشنگ کی بنیاد ہے۔ حرارتی اور ٹھنڈا کرنے والے عناصر (پیلٹیر عناصر) کا اعلیٰ معیار، نیز جس طریقے سے یہ بلاک سے جڑے ہوئے ہیں، وہ فیصلہ کن عوامل ہیں جو درجہ حرارت میں تضادات کے خطرے کا تعین کریں گے جنہیں "ایج اثر" کہا جاتا ہے۔

بخارات

انفرادی ردعمل کے اجزاء کی ارتکاز بخارات کی وجہ سے رد عمل کے دوران تبدیل نہیں ہونا چاہئے۔ دوسری صورت میں، یہ بہت کم ممکن ہےپی سی آر پروڈکٹپیدا کیا جا سکتا ہے، یا کوئی بھی نہیں. اس لیے محفوظ مہر کو یقینی بنا کر بخارات کو کم سے کم کرنا بہت ضروری ہے۔ اس صورت میں، تھرمو سائکلر کا گرم ڈھکن اور برتن کی مہر ہاتھ میں کام کرتی ہے۔ سگ ماہی کے مختلف اختیارات دستیاب ہیں۔پی سی آر پلیٹس (لنک: سیلنگ آرٹیکل)، جس کے تحت ہیٹ سیلنگ کے ذریعے بہترین مہر حاصل کی جاتی ہے۔ دیگر بندشیں بھی موزوں ہو سکتی ہیں، جب تک کہ سائکلر کے ڈھکن کے رابطے کے دباؤ کو منتخب کردہ مہر میں ایڈجسٹ کیا جا سکے۔

طویل مدتی میں درست اور تولیدی نتائج کی حفاظت کے لیے عمل کی معیاری کاری موجود ہے۔ اس میں سامان کی باقاعدگی سے دیکھ بھال شامل ہے تاکہ یہ یقینی بنایا جا سکے کہ یہ ہمیشہ کام کرنے کی اچھی حالت میں ہے۔ تمام استعمال کی اشیاء کو تیار کردہ تمام لاٹوں میں مستقل طور پر اعلیٰ معیار کا ہونا چاہیے، اور ان کی قابل اعتماد دستیابی کی ضمانت ہونی چاہیے۔

 


پوسٹ ٹائم: نومبر-29-2022