Для успішних реакцій на ампліфікацію необхідно, щоб індивідуальні компоненти реакції були присутні у правильній концентрації в кожному препараті. Крім того, важливо, щоб забруднення не було.
Особливо, коли потрібно встановити багато реакцій, було встановлено, щоб підготувати так звану головну суміш замість того, щоб піпетувати кожен реагент окремо в кожну посудину. Попередньо налаштовані суміші є у продажу, в яких додаються лише специфічні для зразка компоненти (праймер) та воду. Крім того, головна суміш може бути підготовлена самостійно. В обох варіантах суміш розподіляється на кожну посудину ПЛР без шаблону, а окремий зразок ДНК додається окремо в кінці.
Використання головної суміші має кілька переваг: По -перше, кількість одиночних кроків піпетки зменшується. Таким чином, як ризик помилок користувачів під час піпетки, і ризик забруднення мінімізуються і, звичайно, заощаджується час. В принципі, точність піпетки також вища, оскільки більші обсяги дозували. Це легко зрозуміти при перевірці технічних даних піпетків: чим менший дозуючий об'єм, тим вище може бути відхилення. Той факт, що всі препарати походять з одного судна, позитивно впливає на однорідність (якщо добре змішана). Це також покращує відтворюваність експериментів.
Під час підготовки головної суміші слід додати щонайменше 10 % додаткового обсягу (наприклад, якщо потрібно 10 препаратів, обчисліть на основі 11), так що навіть останнє судно заповнене належним чином. Таким чином, (незначні) трубопровідні неточності та вплив втрати вибірки при дозуванні розчинів, що містять миючі засоби, можуть бути компенсовані. Миючі засоби містяться в ферментних розчинах, таких як полімерази та головні суміші, викликаючи утворення піни та залишки на внутрішній поверхні нормальноїПоради з піпетки.
Залежно від застосування та типу рідини, яку слід віддати, слід вибрати правильну техніку піпетки (1) та вибране відповідне обладнання. Для розчинів, що містять миючі засоби, система прямого переміщення або так звані підказки піпетки з низьким рівнем утримання як альтернатива для піпетки з повітряним подушком. ЕфектПорада з піпетки Aceбазується на особливо гідрофобній поверхні. Рідини, що містять миючі засоби, не залишають залишку плівки зсередини та зовні, щоб втрата розчину можна було звести до мінімуму.
Окрім точного дозування всіх компонентів, також важливо, щоб забруднення препаратів не було. Недостатньо використовувати витратні матеріали з високою чистотою, оскільки процес піпетки в піпетці з повітряною подушкою може виробляти аерозолі, які залишаються в піпетці. ДНК, яка може міститись в аерозолі, може бути перенесена з одного зразка на наступний на наступному етапі піпетки і, таким чином, призвести до забруднення. Згадані вище системи прямого переміщення також можуть мінімізувати цей ризик. Для трубопроводів з повітряним подушком є сенс використовувати кінчики фільтрів для захисту піпетки, зберігаючи бризки, аерозолі та біомолекули.
Час посади: грудень-06-2022