Стандартизація процесів включає їх оптимізацію та подальше встановлення та гармонізацію, що дозволяє довгострокову оптимальну продуктивність-незалежну від користувача. Стандартизація забезпечує високоякісні результати, а також їх відтворюваність та порівнянність.
Мета (класичної) ПЛР - це генерація надійного та відтворюваного результату. Для певних застосувань вихідПЛР -продукттакож є актуальним. Для цих реакцій необхідно бути обережним, щоб забезпечити порушення зразків і що робочий процес ПЛР залишається стабільним. Зокрема, це означає мінімізацію запровадження забруднень, що може призвести до помилкових позитивних або помилкових негативних результатів або навіть пригнічувати реакцію ПЛР. Крім того, умови реакції повинні бути максимально однаковими для кожного окремого зразка в межах пробігу, а також переноситись до наступних реакцій (того ж методу). Це стосується складу реакцій, а також до типу контролю температури в циклері. Помилки користувача, звичайно, слід уникати якомога більше.
Нижче ми продемонструємо проблеми, які виникають під час підготовки, і протягом усього запуску ПЛР - та підходи до рішень, що існують щодо інструментів та витратних матеріалів, що використовуються для стандартизації робочих процесів ПЛР.
Підготовка реакції
Розподіл компонентів реакцій на ПЛР-судини або таблички, відповідно, включає кілька викликів, які необхідно подолати:
Умови реакції
Точне та точне дозування окремих компонентів є незамінним, коли націлюється на найбільш однакові можливі умови реакції. Окрім хорошої техніки піпетки, вибір правильного інструменту є критичним. Основні суміші ПЛР часто містять речовини, які збільшують в'язкість або генерують піну. Під час процесу піпетки вони призводять до значного змочуванняПоради з піпетки, таким чином зниження точності піпетки. Використання систем прямого розподілу або альтернативних піпеткових кінчиків, які менш схильні до змочування, може підвищити точність та точність процесу піпетування.
Забруднення
Під час процесу дозування генеруються аерозолі, які, якщо дозволено дістатися до внутрішньої частини піпетки, потенційно може забруднити інший зразок під час наступного етапу піпетки. Це можна запобігти за допомогою підказок фільтра або систем прямого переміщення.
Витратні матеріали, такі якпідказки, судна та пластини, які використовуються в робочому процесі ПЛР, не повинні містити речовини, які компрометують зразок або фальсифікацію результату. До них відносяться ДНК, ДНКази, РНКази та інгібітори ПЛР, а також компоненти, які потенційно можуть вилуговуватися з матеріалу під час реакції - речовини, відомі як вилуговування.
Помилка користувача
Чим більше зразків обробляються, тим вище ризик помилок. Це може легко трапитися, що зразок потрапляє в неправильне судно або неправильне колодязь. Цей ризик може бути значно зменшений шляхом легко помітного маркування свердловин. Завдяки автоматизації кроків видачі, "людський фактор", тобто помилки та зміни користувача, мінімізовані, тим самим збільшуючи відтворюваність, особливо у випадку невеликих обсягів реакцій. Для цього потрібні таблички достатньої вимірної стабільності для використання на робочій станції. Прикріплені штрих-коди забезпечують додаткову машинну читати, що спрощує відстеження зразків протягом усього процесу.
Програмування термоциклера
Програмування інструменту може виявитися трудомістким, а також схильним до помилок. Різні функції термічного циклера PCR працюють разом, щоб спростити цей крок процесу і, що найголовніше, щоб зробити його безпечним:
Легка експлуатація та хороші рекомендації користувачів - це основа ефективного програмування. Спираючись на цю основу, захищене паролем адміністрація користувачів не дозволить змінити власні програми іншими користувачами. Якщо використовуються декілька велосипедистів (одного типу), це корисно, якщо програму можна перенести безпосередньо з одного інструменту в інший через USB або підключення. Комп'ютерне програмне забезпечення забезпечує центральне та безпечне адміністрування програм, прав користувачів та документів на комп’ютері.
PCR Run
Під час пробігу ДНК амплізується в реакційній судині, де кожен зразок повинен піддаватися однаковим, послідовним умовам реакції. Для процесу є актуальні такі аспекти:
Контроль температури
Відмінна точність контролю температури та однорідності блоку циклерів є основою для рівномірного кондиціонування всіх зразків. Висока якість елементів опалення та охолодження (елементи Пельтьє), а також спосіб, яким вони з'єднані з блоком, є вирішальними факторами, які визначатимуть ризик температурних розбіжностей, відомих як «ефект краю»
Випаровування
Концентрація індивідуальних компонентів реакції не повинна змінюватися протягом реакції через випаровування. В іншому випадку можливо, що дуже малоПЛР -продуктможе бути генерується або взагалі жодного. Тому важливо мінімізувати випаровування, забезпечивши захищене ущільнення. У цьому випадку нагріта кришка термоциклера та ущільнення судна працюють рука об руку. Різні варіанти ущільнення доступні дляПЛР -пластини (посилання: герметична стаття), завдяки чому найкраща печатка досягається за допомогою герметизації тепла. Інші закриття також можуть бути придатними, доки контактний тиск кришки циклера може бути відрегульований до вибраного ущільнення.
Стандартизація процесів існує для забезпечення точних та відтворюваних результатів у довгостроковій перспективі. Сюди входить регулярне обслуговування обладнання, щоб переконатися, що воно завжди в хорошому робочому стані. Усі витратні матеріали повинні мати стабільно якісну для всіх вироблених лотів, і їх надійна доступність повинна бути гарантована.
Час посади: 29-2022 листопада