Як піпетувати невеликі об’єми за допомогою ручних ручних піпеток

Оскільки більше уваги приділяється зниженню реагентів і витрат, менші обсяги користуються високим попитом, наприклад, для приготування PCR Mastermix або ферментних реакцій. Але дозування невеликих об’ємів від 0,2 до 5 мкл ставить нові виклики для точності та точності дозування. Важливими є такі моменти:

1. Розмір піпетки та наконечника: завжди вибирайте піпетку з найменшим можливим номінальним об’ємом і найменшим наконечником, щоб повітряна подушка була якомога меншою. Наприклад, коли піпетуєте 1 мкл, виберіть піпетку 0,25–2,5 мкл із відповідним наконечником, а не піпетку 1–10 мкл.
2. Калібрування та технічне обслуговування: дуже важливо, щоб ваші піпетки були належним чином відкалібровані та обслуговувалися. Невеликі налаштування та зламані частини піпетки призводять до значного збільшення значень систематичної та випадкової похибки. Калібрування відповідно до ISO 8655 необхідно проводити раз на рік.
3. Об’ємні піпетки: перевірте, чи є у вашій лабораторії об’ємні піпетки з низьким діапазоном об’єму. Загалом, використання цього типу піпетки забезпечує кращий результат дозування з точки зору точності та точності, ніж класичні піпетки на повітряній подушці.
4. Спробуйте використовувати більші об’єми: Ви можете розглянути можливість розведення зразка, щоб піпетувати більші об’єми з тією самою кількістю в кінцевій реакції. Це може зменшити помилки піпетування з дуже малими об’ємами зразків.

Крім хорошого інструменту, дослідник повинен володіти дуже хорошою технікою піпетування. Зверніть особливу увагу на наступні кроки:

1. Кріплення наконечника: не затискайте піпетку на наконечнику, оскільки це може пошкодити тонкий кінець наконечника, спричинити перенаправлення променя рідини або пошкодження отвору. Застосовуйте легкий тиск під час приєднання наконечника та використовуйте піпетку з підпружиненим конусом наконечника.
2. Тримайте піпетку: не тримайте піпетку в руці, очікуючи на центрифугу, циклер тощо. Внутрішня частина піпетки нагріється, що призведе до розширення повітряної подушки, що призведе до відхилень від встановленого об’єму під час дозування.
3. Попереднє зволоження: зволоження повітря всередині наконечника та піпетки готує наконечник до зразка та запобігає випаровуванню під час аспірації об’єму для перенесення.
4. Вертикальна аспірація: це дуже важливо під час обробки невеликих об’ємів, щоб уникнути капілярного ефекту, який виникає, коли піпетку тримають під кутом.
5. Глибина занурення: занурюйте наконечник якомога менше, щоб запобігти потраплянню рідини через капілярний ефект. Емпіричне правило: чим менший кінчик і об’єм, тим менша глибина занурення. Ми рекомендуємо максимум 2 мм при піпетуванні невеликих об’ємів.
6. Дозування під кутом 45°: оптимальне витікання рідини гарантується, якщо піпетку тримати під кутом 45°.
7. Контакт зі стінкою посудини або поверхнею рідини: невеликі об’єми можна правильно дозувати, лише якщо наконечник притиснути до стінки посудини або занурити в рідину. Навіть останню краплю з наконечника можна акуратно розподілити.
8. Видування: видування є обов’язковим після дозування невеликих об’ємів, щоб випустити навіть останню краплю рідини, яка є в наконечнику. Продування також слід проводити проти стінки судини. Будьте обережні, щоб не потрапити в зразок бульбашки повітря, виконуючи видування поверхні рідини.