Hacimler 0.2 ila 5 uL arasında pipetleme yaparken, pipetleme doğruluğu ve hassasiyeti son derece önemlidir, iyi bir pipetleme tekniği esastır, çünkü hatalar küçük hacimlerle daha açıktır.
Reaktiflerin ve maliyetlerin azaltılmasına daha fazla odaklanıldığından, PCR mastermix veya enzim reaksiyonlarının hazırlanması için daha küçük hacimler yüksek talep görüyor. Ancak 0.2 - 5 uL'den küçük hacimlerin pipetlenmesi, doğruluk ve hassasiyet için pipetleme için yeni zorluklar oluşturur. Aşağıdaki noktalar önemlidir:
- Pipet ve ucu boyutu: Hava yastığını olabildiğince küçük tutmak için her zaman mümkün olan en düşük nominal hacmi ve en küçük ucu ile pipeti seçin. 1 uL örneğin pipetlenirken, 1 - 10 uL pipet yerine 0.25 - 2.5 uL pipet ve eşleşen ucu seçin.
- Kalibrasyon ve Bakım: Pipetlerinizin uygun şekilde kalibre edilmesi ve bakımı yapılması önemlidir. Bir pipet üzerindeki küçük ayarlamalar ve kırık parçalar, sistematik ve rastgele hata değerlerinde büyük bir artışa yol açar. ISO 8655'e göre bir kalibrasyon yılda bir kez yapılmalıdır.
- Pozitif Deplasman Pipetleri: Laboratuarınızda düşük hacimli bir aralığa sahip pozitif bir yer değiştirme pipetinizin olup olmadığını kontrol edin. Genel olarak, bu tip pipetlerin kullanılması, doğruluk ve hassasiyet açısından klasik hava yastık pipetlerinden daha iyi bir pipetleme sonucuna yol açar.
- Daha büyük hacimler kullanmaya çalışın: Numunenizi son reaksiyonda aynı miktarda daha büyük hacimlere pipette seyreltmeyi düşünebilirsiniz. Bu, çok küçük örnek hacimleri ile pipetleme hatalarını azaltabilir.
İyi bir araca ek olarak, araştırmacının çok iyi bir pipetleme tekniğine sahip olması gerekir. Aşağıdaki adımlara özel dikkat edin:
- Uç bağlantı: Pipeti ucuna sıkıştırmayın, çünkü bu ince uç ucuna zarar verebilir, sıvı ışının yeniden yönlendirilmesine veya deliğe zarar vermesine neden olur. Sadece bir uç takarken ışık basıncı uygulayın ve yaylı uç konisi olan bir pipet kullanın.
- Pipeti tutarak: Santrifüj, bisikletçi vb. Beklerken pipeti elinizde tutmayın. Pipetin içi ısınır ve hava yastığını genişletir ve pipetleme sırasında set haciminden sapmalara neden olur.
- Ön ıslatma: Havanın uç içinde nemlendirilmesi ve pipet, ucu numune için hazırlar ve transfer hacmini aspire ederken buharlaşmayı önler.
- Dikey aspirasyon: Bu, pipet bir açıda tutulduğunda ortaya çıkan kılcal etkiyi önlemek için küçük hacimleri kullanırken çok önemlidir.
- Daldırma Derinliği: Kılcal etki nedeniyle ucu sıvının girilmesini önlemek için ucu mümkün olduğunca az daldırın. Temel Kural: Uç ve hacim ne kadar küçük olursa, daldırma derinliği o kadar düşük olur. Küçük hacimleri pipetlerken maksimum 2 mm öneririz.
- 45 ° açıda dağıtım: Pipet 45 ° açıyla tutulduğunda sıvının optimal akışı garanti edilir.
- Gemi duvarına veya sıvı yüzeye temas: Küçük hacimler, sadece uç duvarına karşı tutulduğunda veya sıvıya daldırıldığında uygun şekilde dağıtılabilir. Uçtan son damla bile doğru bir şekilde dağıtılabilir.
- Blow-Out: Uçta bulunan son sıvı damlasını bile dağıtmak için düşük hacimleri dağıttıktan sonra bir patlama zorunludur. Blow-out da gemi duvarına karşı yapılmalıdır. Sıvı yüzeyde bir patlama yaparken hava kabarcıklarını numuneye getirmemeye dikkat edin.
Gönderme Zamanı: 18-2021 Şubat