Mga cryovialay karaniwang ginagamit para sa cryogenic na pag-iimbak ng mga linya ng cell at iba pang kritikal na biological na materyales, sa dewar na puno ng likidong nitrogen.

Mayroong ilang mga yugto na kasangkot sa matagumpay na pangangalaga ng mga selula sa likidong nitrogen. Habang ang pangunahing prinsipyo ay isang mabagal na pag-freeze, ang eksaktong pamamaraan na ginagamit ay nakasalalay sa uri ng cell at cryoprotectant na ginamit. Mayroong ilang mga pagsasaalang-alang sa kaligtasan at pinakamahusay na kagawian na dapat isaalang-alang kapag nag-iimbak ng mga cell sa mababang temperatura.

Nilalayon ng post na ito na magbigay ng pangkalahatang-ideya kung paano iniimbak ang mga cryovial sa likidong nitrogen.

Ano ang Cryovials

Ang mga cryovial ay maliliit at nakatakip na mga vial na idinisenyo para sa pag-imbak ng mga sample ng likido sa napakababang temperatura. Tinitiyak nila na ang mga cell na napreserba sa cryoprotectant ay hindi direktang nakikipag-ugnayan sa likidong nitrogen, na pinapaliit ang panganib ng mga cellular fracture habang nakikinabang pa rin mula sa matinding epekto ng paglamig ng likidong nitrogen.

Ang mga vial ay karaniwang magagamit sa isang hanay ng mga volume at disenyo - maaari silang panloob o panlabas na sinulid na may patag o bilugan na ilalim. Available din ang mga sterile at non-sterile na format.

Sino ang GumagamitMga Cyrovialpara Mag-imbak ng Mga Cell sa Liquid Nitrogen

Ang isang hanay ng mga NHS at pribadong laboratoryo, pati na rin ang mga institusyong pananaliksik na nagdadalubhasa sa cord blood banking, epithelial cell biology, immunology at stem cell biology ay gumagamit ng mga cryovial upang mag-cryopreserve ng mga cell.

Kasama sa mga cell na napreserba sa ganitong paraan ang B at T Cells, CHO Cells, Hematopoietic Stem at Progenitor Cells, Hybridomas, Intestinal Cells, Macrophage, Mesenchymal Stem at Progenitor Cells, Monocytes, Myeloma, NK Cells at Pluripotent Stem Cells.

Pangkalahatang-ideya ng Paano Mag-imbak ng Mga Cryovial sa Liquid Nitrogen

Ang cryopreservation ay isang proseso na nagpapanatili ng mga cell at iba pang biological na konstruksyon sa pamamagitan ng paglamig sa kanila sa napakababang temperatura. Ang mga cell ay maaaring maimbak sa likidong nitrogen sa loob ng maraming taon nang hindi nawawala ang kakayahang mabuhay ng cell. Ito ay isang balangkas ng mga pamamaraang ginamit.

Paghahanda ng Cell

Ang eksaktong paraan para sa paghahanda ng mga sample ay mag-iiba-iba depende sa uri ng cell, ngunit sa pangkalahatan, ang mga cell ay kinokolekta at centrifuged upang bumuo ng isang cell-rich pellet. Ang pellet na ito ay muling sinuspinde sa supernatant na may halong cryoprotectant o isang cryopreservation medium.

Cryopreservation Medium

Ang daluyan na ito ay ginagamit upang mapanatili ang mga cell sa mababang temperatura na mga kapaligiran na sila ay sasailalim sa pamamagitan ng pagpigil sa pagbuo ng mga intra at extracellular na kristal at samakatuwid ay pagkamatay ng cell. Ang kanilang tungkulin ay magbigay ng ligtas, proteksiyon na kapaligiran para sa mga selula at tisyu sa panahon ng mga proseso ng pagyeyelo, pag-iimbak, at pagtunaw.

Ang medium gaya ng fresh frozen plasma (FFP), heparinised plasmalyte solution o serum-free, animal component-free solution ay hinahalo sa cryoprotectants gaya ng dimethyl sulphoxide (DMSO) o glycerol.

Ang re-liquified sample na pellet ay na-aliquote sa polypropylene cryovials gaya ngSuzhou Ace Biomedical kumpanya Cryogenic Storage Vials.

Mahalagang huwag punuin nang labis ang mga cryovial dahil madaragdagan nito ang panganib ng pag-crack at ang posibleng paglabas ng mga nilalaman (1).

Kinokontrol na Freeze Rate

Sa pangkalahatan, ang isang mabagal na kinokontrol na rate ng pag-freeze ay ginagamit para sa matagumpay na cryopreservation ng mga cell.

Pagkatapos mailagay ang mga sample sa mga cryogenic vial, inilalagay ang mga ito sa basang yelo o sa isang 4 ℃ na refrigerator at ang proseso ng pagyeyelo ay magsisimula sa loob ng 5 minuto. Bilang pangkalahatang gabay, ang mga cell ay pinapalamig sa bilis na -1 hanggang -3 bawat minuto (2). Ito ay nakakamit gamit ang isang programmable cooler o sa pamamagitan ng paglalagay ng mga vial sa isang insulated box na inilagay sa isang –70°C hanggang –90°C controlled rate freezer.

Ilipat sa Liquid Nitrogen

Ang mga nakapirming cryogenic vial ay inililipat sa isang likidong tangke ng nitrogen para sa hindi tiyak na mga panahon kung ang temperatura ay mas mababa sa -135 ℃ ay pinananatili.

Ang mga napakababang temperatura na ito ay maaaring makuha sa pamamagitan ng paglubog sa likido o vapor phase nitrogen.

Liquid o Vapor Phase?

Ang pag-iimbak sa liquid phase nitrogen ay kilala upang mapanatili ang malamig na temperatura na may ganap na pagkakapare-pareho, ngunit kadalasan ay hindi inirerekomenda para sa mga sumusunod na dahilan:

• Ang pangangailangan para sa malalaking volume (depth) ng likidong nitrogen na isang potensyal na panganib. Ang mga paso o asphyxiation dahil dito ay isang tunay na panganib.
• Ang mga dokumentadong kaso ng cross-contamination ng mga nakakahawang ahente tulad ng aspergillus, hep B at pagkalat ng viral sa pamamagitan ng liquid nitrogen medium (2,3)
• Ang potensyal para sa likidong nitrogen na tumagas sa mga vial sa panahon ng paglulubog. Kapag inalis mula sa imbakan at pinainit sa temperatura ng silid, mabilis na lumalawak ang nitrogen. Dahil dito, ang vial ay maaaring mabasag kapag inalis mula sa likidong imbakan ng nitrogen, na lumilikha ng panganib mula sa parehong lumilipad na mga labi at pagkakalantad sa mga nilalaman (1, 4).

Para sa mga kadahilanang ito, ang napakababang temperatura na imbakan ay pinaka-karaniwan sa vapor phase nitrogen. Kapag ang mga sample ay dapat na nakaimbak sa likidong bahagi, dapat gamitin ang espesyal na cryoflex tubing.

Ang downside sa vapor phase ay ang vertical temperature gradient ay maaaring mangyari na nagreresulta sa mga pagbabago sa temperatura sa pagitan ng -135℃ at -190℃. Nangangailangan ito ng maingat at masigasig na pagsubaybay sa mga antas ng likidong nitrogen at mga pagkakaiba-iba ng temperatura (5).

Inirerekomenda ng maraming mga tagagawa na ang mga cryovial ay angkop para sa pag-iimbak hanggang -135 ℃ o para sa paggamit sa yugto ng singaw lamang.

Pagtunaw ng Iyong Mga Cryopreserved Cell

Ang pamamaraan ng pagtunaw ay nakaka-stress para sa isang nakapirming kultura, at ang wastong paghawak at pamamaraan ay kinakailangan upang matiyak ang pinakamainam na posibilidad na mabuhay, pagbawi, at paggana ng mga cell. Ang eksaktong mga protocol ng lasaw ay depende sa mga partikular na uri ng cell. Gayunpaman, ang mabilis na pagtunaw ay itinuturing na pamantayan sa:

• Bawasan ang anumang epekto sa pagbawi ng cellular
• Tumulong na bawasan ang oras ng pagkakalantad sa mga solute na nasa nagyeyelong media
• I-minimize ang anumang pinsala sa pamamagitan ng ice recrystallization

Ang mga water bath, bead bath, o mga espesyal na automated na instrumento ay karaniwang ginagamit sa pagtunaw ng mga sample.

Kadalasan, ang 1 cell line ay natunaw nang sabay-sabay sa loob ng 1-2 minuto, sa pamamagitan ng dahan-dahang pag-ikot sa isang 37 ℃ na paliguan ng tubig hanggang sa may kaunting yelo na lamang na natitira sa vial bago ang mga ito ay hugasan sa isang prewarmed growth medium.

Para sa ilang mga cell tulad ng mammalian embryo, ang mabagal na pag-init ay mahalaga para sa kanilang kaligtasan.

Ang mga cell ay handa na ngayon para sa cell culture, cell isolation, o sa kaso ng haematopoietic stem cells – viability studies upang magarantiya ang integridad ng donor stem cell bago ang myeloablative therapy.

Normal na kasanayan na kumuha ng maliliit na aliquot ng prewashed sample na ginamit upang magsagawa ng cell count upang matukoy ang mga konsentrasyon ng cell para sa plating sa kultura. Pagkatapos ay maaari mong tasahin ang mga resulta ng mga pamamaraan sa paghihiwalay ng cell at matukoy ang kakayahang kumita ng cell.

Pinakamahuhusay na Kasanayan para sa Pag-iimbak ng Mga Cryovial

Ang matagumpay na cryopreservation ng mga sample na nakaimbak sa cryovial ay nakasalalay sa maraming elemento sa protocol kabilang ang wastong pag-iimbak at pag-iingat ng tala.

• Hatiin ang mga cell sa pagitan ng mga lokasyon ng imbakan– Kung pinapayagan ang dami, hatiin ang mga cell sa pagitan ng mga vial at itabi ang mga ito sa magkahiwalay na lokasyon upang mabawasan ang panganib ng pagkawala ng sample dahil sa mga pagkabigo ng kagamitan.
• Pigilan ang cross-contamination– Mag-opt para sa single-use sterile cryogenic vial o autoclave bago ang kasunod na paggamit
• Gumamit ng naaangkop na laki ng mga vial para sa iyong mga cell– Ang mga vial ay nasa hanay ng mga volume sa pagitan ng 1 at 5mls. Iwasan ang labis na pagpuno ng mga vial upang mabawasan ang panganib ng pag-crack.
• Pumili ng panloob o panlabas na sinulid na mga cryogenic na vial– Ang mga panloob na sinulid na vial ay inirerekomenda ng ilang unibersidad para sa mga hakbang sa kaligtasan – maaari din nilang maiwasan ang kontaminasyon habang pinupuno o kapag nakaimbak sa likidong nitrogen.
• Pigilan ang Leakage- Gumamit ng bi-injected seal na hinulma sa screw-cap o O-ring para maiwasan ang pagtulo at kontaminasyon.
• Gumamit ng mga 2D barcode at label na vial– para matiyak ang traceability, ang mga vial na may malalaking writing area ay nagbibigay-daan sa bawat vial na maging sapat na may label. Makakatulong ang mga 2D barcode sa pamamahala ng storage at pag-iingat ng rekord. Ang mga color coded cap ay kapaki-pakinabang para sa mas madaling pagkilala.
• Sapat na pagpapanatili ng imbakan- Upang matiyak na ang mga cell ay hindi mawawala, ang mga sisidlan ng imbakan ay dapat na patuloy na subaybayan ang temperatura at mga antas ng likidong nitrogen. Dapat na magkabit ang mga alarm upang alertuhan ang mga gumagamit ng mga error.

Mga Pag-iingat sa Kaligtasan

Ang likidong nitrogen ay naging karaniwang kasanayan sa modernong pananaliksik ngunit nagdadala ng panganib ng malubhang pinsala kung ginamit nang hindi tama.

Dapat na magsuot ng wastong personal protective equipment (PPE) upang mabawasan ang panganib ng frostbite, paso at iba pang masamang insidente kapag humahawak ng liquid nitrogen. Magsuot

• Mga cryogenic na guwantes
• Laboratory coat
• Buong face shield na lumalaban sa epekto na tumatakip din sa leeg
• Nakasaradong sapatos
• Splashproof na plastic na apron

Ang mga refrigerator ng likidong nitrogen ay dapat ilagay sa mga lugar na may mahusay na bentilasyon upang mabawasan ang panganib ng asphyxiation – ang tumakas na nitrogen ay sumisingaw at inilipat ang atmospheric oxygen. Ang malalaking volume na tindahan ay dapat na may mababang oxygen alarm system.

Ang pagtatrabaho nang magkapares kapag humahawak ng likidong nitrogen ay mainam at ang paggamit nito sa labas ng normal na oras ng pagtatrabaho ay dapat na ipinagbabawal.

Mga Cryovial para Suportahan ang Iyong Daloy ng Trabaho

Ang kumpanya ng Suzhou Ace Biomedical ay nag-aalok ng malawak na seleksyon ng mga produkto na tumutugon sa iyong mga pangangailangan sa cryopreservation para sa iba't ibang uri ng mga cell. Kasama sa portfolio ang isang hanay ng mga tubesa pati na rin ang isang hanay ng mga sterile cryovial.

Ang aming mga cryovial ay:

• Lab Screw Cap 0.5mL 1.5mL 2.0mL Cryovial Cryogenic Vials Conical Bottom Cryotube na may Gasket

  ● 0.5ml,1.5ml,2.0ml na detalye, may palda o walang palda
  ● Conical o self standing na disenyo, sterile o non-sterile ay parehong available
  ● Ang mga tubo ng takip ng tornilyo ay gawa sa medikal na grade polypropylene
  ● Ang PP Cryotube Vials ay maaaring paulit-ulit na i-freeze at lasaw
  ●Ang disenyo ng panlabas na takip ay maaaring mabawasan ang posibilidad ng kontaminasyon sa panahon ng sample na paggamot.
  ● Screw cap cryogenic tubes Mga universal screw thread para gamitin
  ● Ang mga tubo ay umaangkop sa pinakakaraniwang rotor
  ● Ang mga cryogenic tube o-ring tube ay magkasya sa karaniwang 1-inch at 2-inch, 48well, 81well，96well at 100well na mga freezer box
  ● Autoclavable sa 121°C at freezable sa -86°C

  BAHAGI BLG	MATERYAL	VOLUME	CAPKULAY	PCS/BAG	BAG/KASO
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	Itim, Dilaw, Asul, Pula, Lila, Puti	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	Itim, Dilaw, Asul, Pula, Lila, Puti	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	Itim, Dilaw, Asul, Pula, Lila, Puti	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Itim, Dilaw, Asul, Pula, Lila, Puti	500	10