Paano Mag-pipette ng Maliit na Volume gamit ang Handheld Manual Pipettes

Dahil mas nakatuon ang pansin sa pagbabawas ng mga reagents at gastos, ang mas maliliit na volume ay mataas ang demand, halimbawa, para sa paghahanda ng PCR Mastermix o mga reaksyon ng enzyme. Ngunit ang pagpi-pipet ng maliliit na volume mula 0.2 – 5 µL ay nagtatakda ng mga bagong hamon para sa katumpakan at katumpakan ng pipetting. Ang mga sumusunod na punto ay mahalaga:

1. Pipette at laki ng tip: Palaging piliin ang pipette na may pinakamababang nominal na volume na posible at ang pinakamaliit na tip upang panatilihing maliit ang air cushion hangga't maaari. Kapag nagpi-pipet ng 1 µL hal, pumili ng 0.25 – 2.5 µL pipette at katugmang tip sa halip na isang 1 – 10 µL pipette.
2. Pag-calibrate at pagpapanatili: Mahalaga na ang iyong mga pipette ay maayos na na-calibrate at napanatili. Ang mga maliliit na pagsasaayos at mga sirang bahagi sa isang pipette ay humahantong sa isang napakalaking pagtaas sa sistematiko at random na mga halaga ng error. Ang isang pagkakalibrate ayon sa ISO 8655 ay dapat isagawa isang beses sa isang taon.
3. Mga positibong displacement pipette: Suriin kung mayroon kang positibong displacement pipette na may mababang hanay ng volume sa iyong lab. Sa pangkalahatan, ang paggamit ng ganitong uri ng pipette ay humahantong sa isang mas mahusay na resulta ng pipetting sa mga tuntunin ng katumpakan at katumpakan kaysa sa mga klasikong air-cushion pipette.
4. Subukang gumamit ng mas malalaking volume: Maaari mong isaalang-alang ang pagtunaw ng iyong sample upang mag-pipette ng mas malalaking volume na may parehong dami sa huling reaksyon. Maaari nitong bawasan ang mga error sa pipetting na may napakaliit na dami ng sample.

Bilang karagdagan sa isang mahusay na tool, ang mananaliksik ay dapat magkaroon ng isang napakahusay na pamamaraan ng pipetting. Bigyang-pansin ang mga sumusunod na hakbang:

1. Tip attachment: Huwag i-jam ang pipette papunta sa dulo dahil ito ay maaaring makapinsala sa pinong dulo ng tip na maging sanhi ng likidong sinag upang ma-redirect o makapinsala sa orifice. Maglagay lamang ng magaan na presyon kapag nakakabit ng tip at gumamit ng pipette na may spring-loaded tip cone.
2. Hawak ang pipette: Huwag hawakan ang pipette sa iyong kamay habang naghihintay ng centrifuge, cycler, atbp. Ang loob ng pipette ay mag-iinit at hahantong sa air cushion na lumawak na nagreresulta sa mga paglihis mula sa itinakdang dami kapag nagpi-pipet.
3. Pre-wetting: Ang humidification ng hangin sa loob ng tip at pipette ay naghahanda ng tip para sa sample at iniiwasan ang pagsingaw kapag hinihigop ang dami ng paglipat.
4. Vertical aspiration: Napakahalaga nito kapag humahawak ng maliliit na volume upang maiwasan ang epekto ng capillary na nangyayari kapag ang pipette ay nakahawak sa isang anggulo.
5. Lalim ng paglulubog: Ilubog ang dulo nang kaunti hangga't maaari upang maiwasan ang pagpasok ng likido sa dulo dahil sa epekto ng capillary. Rule of thumb: Kung mas maliit ang tip at volume, mas mababa ang lalim ng immersion. Inirerekomenda namin ang maximum na 2 mm kapag nagpi-pipet ng maliliit na volume.
6. Dispensing sa 45° angle: Ang pinakamainam na daloy-out ng likido ay ginagarantiyahan kapag ang pipette ay nakahawak sa 45° na anggulo.
7. Pagdikit sa pader ng sisidlan o likidong ibabaw: Ang maliliit na volume ay maaari lamang maibigay nang maayos kapag ang dulo ay nakadikit sa dingding ng sisidlan, o inilubog sa likido. Kahit na ang huling patak mula sa dulo ay maaaring maibigay nang tumpak.
8. Blow-out: Ang isang blow-out ay ipinag-uutos pagkatapos ibigay ang mababang volume upang mailabas kahit ang huling patak ng likidong nasa dulo. Ang blow-out ay dapat ding isagawa laban sa pader ng sisidlan. Mag-ingat na huwag magdala ng mga bula ng hangin sa sample kapag nagsasagawa ng blow-out sa ibabaw ng likido.