Giriş
Nuklein kislotasyny çykarmak näme?
Iň ýönekeý söz bilen aýdylanda, nuklein kislotasyny çykarmak, RNK we / ýa-da DNK-ny bir nusgadan aýyrmak we zerur däl artykmaçlykdyr. Gazyp almak prosesi nuklein kislotalaryny bir nusgadan üzňe saklaýar we aşaky akymlara täsir edip biljek erginlerden we hapalaýjylardan azat konsentrirlenen eluat görnüşinde berýär.
Nuklein kislotasyny çykarmagyň goşundylary
Arassalanan nuklein kislotalary dürli pudaklarda dürli programmalarda ulanylýar. Saglygy goraýyş, belki-de, dürli synag maksatlary üçin zerur bolan arassalanan RNK we DNK bilen iň köp ulanylýan ýerdir.
Saglygy goraýyşda nuklein kislotasyny çykarmagyň goşundylary:
- Indiki nesil yzygiderliligi (NGS)
- Güýçlendirmek esasly SNP genotip görnüşi
- Array esasly genotip
- Çäklendiriji ferment siňdirişi
- Üýtgediji fermentleri ulanyp analiz edýär (mysal üçin Ligasiýa we klonlaşdyryş)
Saglygy goraýyşdan başga nuklein kislotasyny çykarmagyň beýleki ugurlary hem bar, şol sanda atalyk synagy, kazyýet işi we genomika.
Nuklein kislotasynyň çykarylyşynyň gysgaça taryhy
DNK çykarmakIlkinji belli izolýasiýa 1869-njy ýylda Fridrih Mişer atly Şweýsariýaly lukman tarapyndan amala aşyryldy. Mişer öýjükleriň himiki düzümini kesgitlemek arkaly durmuşyň esasy ýörelgelerini çözmäge umyt edýärdi. Limfositler bilen şowsuz bolansoň, taşlanan bandajlarda iriňden tapylan leýkositlerden DNK-nyň çökgünligini almagy başardy. Öýjügiň sitoplazmasyny terk etmek üçin öýjüge kislota, soň bolsa aşgar goşup, DNK-ny beýleki beloklardan aýyrmak üçin teswirnama düzdi.
Mişeriň düýbüni tutujy gözleglerden soň, başga-da köp alym DNK-ny izolirlemek we arassalamak usullaryny ösdürmäge we ösdürmäge dowam etdi. Belok alymy Edwin Jozef Kon 2-nji Jahan urşy döwründe belogy arassalamak üçin köp usullary oýlap tapdy. Gan damarlarynda osmotik basyşy saklamakda möhüm ähmiýete eýe bolan gan plazmasynyň serum albumin fraksiýasyny izolirlemek üçin jogapkärdi. Bu esgerleri diri saklamak üçin örän möhümdi.
1953-nji ýylda Frensis Krik Rosalind Franklin we Jeýms Watson bilen bilelikde DNK-nyň gurluşyny kesgitlediler we nuklein kislotasynyň nukleotidleriniň uzyn zynjyrlaryndan ybaratdygyny görkezdiler. Bu açyş, 1958-nji ýyldaky synag wagtynda DNK-nyň ýarym konserwatiw köpeldilişini görkezenlerinde, E.Koli bakteriýalaryndan DNK-ny izolirlemek üçin dykyzlyk gradient merkezden gaçyryş protokolyny işläp düzen Meselson we Stahl üçin ýol açdy.
Nuklein kislotasyny çykarmagyň usullary
DNK çykarmagyň 4 basgançagy haýsylar?
Gazyp almagyň ähli usullary şol bir esasy ädimlere gaýnadylýar.
Öýjükleriň bozulmagy. Öýjük lizisi diýlip hem atlandyrylýan bu etap, gyzyklanýan nuklein kislotalaryny öz içine alýan öýjükli suwuklyklary goýbermek üçin öýjük diwaryny we / ýa-da öýjük membranasyny döwmegi öz içine alýar.
Islenilmeýän galyndylary aýyrmak. Oňa aşaky akymlara päsgel berip biljek membranaly lipidler, beloklar we beýleki islenilmeýän nuklein kislotalar girýär.
Izolýasiýa. Gyzyklanýan nuklein kislotalaryny döreden esasy arassalanan lizatdan izolirlemegiň birnäçe dürli usuly bar: iki esasy kategoriýa bölünýär: çözgüt esasly ýa-da berk ýagdaý (indiki bölüme serediň).
Konsentrasiýa. Nuklein kislotalary beýleki hapalaýjylardan we erginlerden izolirlenenden soň, ýokary konsentrirlenen elýutda görkezilýär.
Gazyp almagyň iki görnüşi
Nuklein kislotasyny çykarmagyň iki görnüşi bar - çözgüt esasly usullar we berk döwlet usullary. Çözüw esasly usul, himiki çykarmak usuly hökmünde hem bellidir, sebäbi öýjügi döwmek we ýadro materialyna girmek üçin himiki serişdeleri ulanmagy öz içine alýar. Bu fenol we hloroform ýaly organiki birleşmeleri ýa-da az zyýanly we şonuň üçin Proteinase K ýa-da silisiýa jeli ýaly has köp maslahat berilýän organiki birleşmeleri ulanyp biler.
Öýjügi döwmek üçin dürli himiki gazyp almagyň usullaryna mysallar girýär:
- Membrananyň osmotik ýarylmagy
- Öýjük diwarynyň ferment siňdirişi
- Membrananyň erginleşmegi
- ýuwujy serişdeler bilen
- Alkogol bejergisi bilen
Gaty döwlet usullary, mehaniki usullar diýlip hem atlandyrylýar, DNK-nyň gaty substrat bilen özara täsirini ulanmagy öz içine alýar. DNK bilen baglanyşjak monjuk ýa-da molekulany saýlamak bilen, ýöne analitik bolmaz, ikisini aýyrmak mümkin. Silisiýa we magnit monjuklary ulanmak ýaly gaty fazaly gazyp almak usullarynyň mysallary.
Magnit monjuk çykarmak düşündirildi
Magnit monjuk çykarmak usuly
Magnit monjuklary ulanmak arkaly gazyp almak mümkinçiligi ilkinji gezek ABŞ-nyň Trevor Hawkins tarapyndan Waýthead institutynyň gözleg instituty tarapyndan berlen patentinde ykrar edildi. Bu patent, magnitli monjuk bolup bilýän berk goldaw göterijisine daňyp, genetiki materialy çykarmagyň mümkindigini tassyklady. Principleörelge, genetiki materialyň daňyljak ýokary derejede işleýän magnit monjugyny ulanmagyňyzdyr, soň bolsa nusgany saklaýan gäminiň daşyna magnit güýji ulanyp, adatdan daşary tebigatdan aýrylyp bilner.
Näme üçin Magnit monjuk çykarmak?
Magnit monjuk çykarmak tehnologiýasy, çalt we täsirli gazyp almak proseduralary üçin bar bolan potensialy sebäpli barha ýaýbaňlanýar. Soňky döwürde amatly bufer ulgamlary bolan ýokary derejede işleýän magnit monjuklaryň ösüşi bolup geçdi, bu nuklein kislotasyny çykarmagy mümkin awtomatlaşdyrmaga we gaty serişde ýeňil we tygşytly iş prosesini amala aşyrmaga mümkinçilik berdi. Şeýle hem, magnitli monjuk çykarmak usullary, DNK-nyň has uzyn böleklerini bölýän gyrkyjy güýçlere sebäp bolup biljek merkezden gaçyryş ädimlerini öz içine almaýar. Bu, genomika synagynda möhüm ähmiýete eýe bolan DNK-nyň uzyn hatarlarynyň üýtgemän galýandygyny aňladýar.
Iş wagty: Noýabr-25-2022