วิธีการปิเปตปริมาณน้อยด้วยปิเปตแบบแมนนวลแบบมือถือ

เนื่องจากมีการให้ความสำคัญกับการลดรีเอเจนต์และต้นทุนมากขึ้น ปริมาณที่น้อยลงจึงเป็นที่ต้องการสูง เช่น สำหรับการเตรียม PCR Mastermix หรือปฏิกิริยาของเอนไซม์ แต่การปิเปตในปริมาณน้อยตั้งแต่ 0.2 – 5 µL ได้สร้างความท้าทายใหม่ด้านความแม่นยำและความเที่ยงตรงในการปิเปต ประเด็นต่อไปนี้มีความสำคัญ:

1. ขนาดปิเปตและทิป: เลือกปิเปตที่มีปริมาตรระบุต่ำที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้และทิปที่เล็กที่สุดเสมอเพื่อให้เบาะลมมีขนาดเล็กที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้ เมื่อทำการปิเปต 1 µL เช่น ให้เลือกปิเปต 0.25 – 2.5 µL และทิปที่ตรงกัน แทนที่จะเลือกปิเปตขนาด 1 – 10 µL
2. การสอบเทียบและการบำรุงรักษา: ปิเปตของคุณจะต้องได้รับการสอบเทียบและบำรุงรักษาอย่างเหมาะสมเป็นสิ่งสำคัญ การปรับเปลี่ยนเล็กน้อยและชิ้นส่วนที่แตกหักบนปิเปต ส่งผลให้ค่าความผิดพลาดแบบสุ่มและเป็นระบบเพิ่มขึ้นอย่างมาก ต้องทำการสอบเทียบตามมาตรฐาน ISO 8655 ปีละครั้ง
3. ปิเปตดิสเพลสเมนต์เชิงบวก: ตรวจสอบว่าคุณมีปิเปตดิสเพลสเมนต์เชิงบวกที่มีช่วงปริมาตรต่ำในห้องปฏิบัติการของคุณหรือไม่ โดยทั่วไป การใช้ปิเปตประเภทนี้จะทำให้ได้ผลลัพธ์การปิเปตที่ดีขึ้นในแง่ของความแม่นยำและความแม่นยำมากกว่าปิเปตแบบเบาะลมแบบคลาสสิก
4. พยายามใช้ปริมาตรมากขึ้น: คุณอาจพิจารณาเจือจางตัวอย่างของคุณให้เป็นปิเปตที่มีปริมาตรมากขึ้นด้วยปริมาณเท่ากันในปฏิกิริยาสุดท้าย วิธีนี้จะช่วยลดข้อผิดพลาดในการปิเปตเมื่อมีตัวอย่างปริมาณน้อยมาก

นอกจากเครื่องมือที่ดีแล้ว ผู้วิจัยจะต้องมีเทคนิคการปิเปตที่ดีมากด้วย ให้ความสนใจเป็นพิเศษกับขั้นตอนต่อไปนี้:

1. การติดทิป: อย่าให้ปิเปตติดบนทิป เนื่องจากอาจสร้างความเสียหายให้กับปลายทิปแบบละเอียด และทำให้ลำแสงของเหลวถูกเปลี่ยนเส้นทางหรือทำให้ช่องเปิดเสียหาย ใช้แรงกดเบาๆ เท่านั้นเมื่อติดทิป และใช้ปิเปตที่มีกรวยทิปแบบสปริง
2. การจับปิเปต: อย่าถือปิเปตไว้ในมือขณะรอเครื่องหมุนเหวี่ยง ตัวหมุน ฯลฯ ด้านในของปิเปตจะร้อนขึ้นและทำให้เบาะลมขยายตัว ส่งผลให้เกิดการเบี่ยงเบนไปจากปริมาตรที่ตั้งไว้เมื่อทำการปิเปต
3. การทำให้เปียกล่วงหน้า: การทำความชื้นของอากาศภายในทิปและปิเปตจะเตรียมทิปสำหรับตัวอย่าง และหลีกเลี่ยงการระเหยเมื่อดูดปริมาตรการถ่ายโอน
4. ความทะเยอทะยานในแนวตั้ง: สิ่งนี้สำคัญมากเมื่อต้องจัดการกับปริมาตรน้อย เพื่อหลีกเลี่ยงผลกระทบจากเส้นเลือดฝอยที่เกิดขึ้นเมื่อถือปิเปตในมุมหนึ่ง
5. ความลึกในการแช่: จุ่มทิปให้น้อยที่สุดเพื่อป้องกันไม่ให้ของเหลวเข้าไปในทิปเนื่องจากผลของเส้นเลือดฝอย หลักปฏิบัติ: ยิ่งปลายและปริมาตรเล็กลง ความลึกในการจุ่มก็จะยิ่งลดลง เราขอแนะนำสูงสุด 2 มม. เมื่อทำการปิเปตในปริมาณน้อย
6. การจ่ายที่มุม 45°: รับประกันการไหลออกของของเหลวอย่างเหมาะสมที่สุดเมื่อถือปิเปตไว้ที่มุม 45°
7. สัมผัสกับผนังหลอดเลือดหรือพื้นผิวของเหลว: สามารถจ่ายปริมาตรเล็กน้อยได้อย่างเหมาะสมเมื่อปลายติดอยู่กับผนังหลอดเลือดหรือจุ่มลงในของเหลวเท่านั้น แม้แต่หยดสุดท้ายจากปลายก็สามารถจ่ายได้อย่างแม่นยำ
8. เป่าออก: จำเป็นต้องเป่าออกหลังจากจ่ายของเหลวในปริมาณน้อยเพื่อจ่ายของเหลวหยดสุดท้ายที่ยังอยู่ในทิป ควรทำการระเบิดกับผนังภาชนะด้วย ระวังอย่าให้ฟองอากาศเข้าไปในตัวอย่างเมื่อเป่าออกที่พื้นผิวของเหลว