Барои бомуваффақияти реаксияҳои амплификация, зарур аст, ки ҷузъҳои инфиродии реаксия дар консентратсияи дуруст дар ҳар як дору мавҷуд бошанд. Илова бар ин, муҳим аст, ки ҳеҷ гуна ифлосшавӣ рух надиҳад.
Хусусан, вақте ки реаксияҳои зиёдеро ба кор андохтан лозим меояд, ба ҷои он ки ҳар як реагентро алоҳида ба ҳар як зарф кӯчондан, омехтаи ба истилоҳ усто омода карда шавад. Омехтаҳои пешакӣ танзимшуда дар тиҷорат дастрасанд, ки дар онҳо танҳо ҷузъҳои мушаххаси намуна (праймер) ва об илова карда мешаванд. Интихобан, омехтаи усторо худатон тайёр кардан мумкин аст. Дар ҳарду вариант, омехта ба ҳар як зарфи ПТР бе қолаб тақсим карда мешавад ва намунаи инфиродии ДНК дар охири алоҳида илова карда мешавад.
Истифодаи омехтаи мастер якчанд бартариҳо дорад: Якум, шумораи қадамҳои як пиптинг кам карда мешавад. Бо ин роҳ, ҳам хатари хатогиҳои корбар ҳангоми пиптинг ва ҳам хатари олудашавӣ ба ҳадди ақалл кам карда мешавад ва албатта вақт сарфа мешавад. Аслан, дақиқии пиптинг низ баландтар аст, зеро ҳаҷми калонтар водор карда мешавад. Ҳангоми тафтиши маълумоти техникии пипеткаҳо инро фаҳмидан осон аст: Ҳар қадаре ки ҳаҷми миқдор камтар бошад, инҳирофҳо ҳамон қадар зиёд мешаванд. Далели он, ки ҳама тайёрҳо аз як зарф гирифта мешаванд, ба якхела (агар хуб омехта шаванд) таъсири мусбӣ дорад. Ин инчунин такроршавандагии таҷрибаҳоро беҳтар мекунад.
Ҳангоми тайёр кардани омехтаи асосӣ, бояд ҳадди аққал 10% ҳаҷми иловагӣ илова карда шавад (масалан, агар 10 тайёрӣ лозим бошад, дар асоси 11 ҳисоб кунед), то ҳатто зарфи охирин дуруст пур карда шавад. Бо ин роҳ, (ночиз) нодурустии пиппинг ва таъсири талафоти намуна ҳангоми миқдори маҳлулҳои дорои шустушӯй ҷуброн карда мешавад. Модҳои шустушӯйӣ дар маҳлулҳои ферментӣ ба монанди полимеразҳо ва омехтаҳои мастер мавҷуданд, ки боиси пайдоиши кафк ва пасмондаҳо дар сатҳи ботинии муқаррарӣ мешаванд.маслиҳатҳои пипетка.
Вобаста ба истифода ва намуди моеъи тақсимшаванда, бояд техникаи дурусти пиптинг (1) ва таҷҳизоти мувофиқ интихоб карда шавад. Барои маҳлулҳое, ки дорои маводи шустушӯй доранд, системаи ҷобаҷогузории мустақим ё нӯги пипеткаҳои ба истилоҳ "нигоҳдории паст" ҳамчун алтернатива барои пипеткаҳои болини ҳаво тавсия карда мешаванд. ТаъсириНӯги ACE PIPETTEба сатҳи махсусан гидрофобӣ асос ёфтааст. Моеъҳои дорои маводи шустушӯй дар дарун ва берунӣ плёнкаи боқимонда намегузоранд, то талафи маҳлул ба ҳадди ақал расонида шавад.
Ба ғайр аз миқдори дақиқи ҳамаи ҷузъҳо, инчунин муҳим аст, ки ифлосшавии маводи мухаддир ба амал наояд. Истифодаи маводи масрафи дорои тозагии баланд кофӣ нест, зеро раванди пипетка дар пипеткаи болинеи ҳавоӣ метавонад аэрозолҳоеро ба вуҷуд орад, ки дар пипетка боқӣ мемонад. ДНК, ки дар аэрозол мавҷуд аст, метавонад аз як намуна ба намунаи дигар дар марҳилаи минбаъдаи пиптинг интиқол дода шавад ва ба ин васила ба ифлосшавӣ оварда расонад. Системаҳои ҷобаҷогузории мустақими дар боло зикршуда низ метавонанд ин хатарро кам кунанд. Барои пипеткаҳои болини ҳавоӣ истифода бурдани маслиҳатҳои филтр барои муҳофизат кардани конуси пипетка тавассути нигоҳ доштани лаппишҳо, аэрозолҳо ва биомолекулаҳо маъно дорад.
Вақти интишор: Декабри 06-2022