Cryovialsодатан барои нигоҳдории криогении хатҳои ҳуҷайра ва дигар маводи муҳими биологӣ дар деварҳои пур аз нитрогени моеъ истифода мешаванд.

Барои бомуваффақият нигоҳ доштани ҳуҷайраҳо дар нитрогени моеъ якчанд марҳилаҳо мавҷуданд. Гарчанде ки принсипи асосӣ яхкунии суст аст, техникаи дақиқи истифодашуда аз намуди ҳуҷайра ва криопротектори истифодашаванда вобаста аст. Якчанд мулоҳизаҳои бехатарӣ ва таҷрибаҳои беҳтарин мавҷуданд, ки ҳангоми нигоҳ доштани ҳуҷайраҳо дар чунин ҳарорати паст ба назар гирифта мешаванд.

Ҳадафи ин мақола шарҳи мухтасари нигоҳ доштани криовиалҳо дар нитрогени моеъ мебошад.

Cryovials чист?

Криовиалҳо шишаҳои хурди сарпӯшдор мебошанд, ки барои нигоҳ доштани намунаҳои моеъ дар ҳарорати хеле паст пешбинӣ шудаанд. Онҳо кафолат медиҳанд, ки ҳуҷайраҳои дар криопротектор нигоҳ дошташуда бо нитрогени моеъ тамос нагиранд ва хатари шикастани ҳуҷайраҳоро кам мекунанд, дар ҳоле ки аз таъсири шадиди хунуккунии нитрогени моеъ баҳра мебаранд.

Флаконҳо одатан дар як қатор ҳаҷмҳо ва тарҳҳо мавҷуданд - онҳо метавонанд дар дохил ё берунӣ бо қаъри ҳамвор ё мудаввар ришта карда шаванд. Форматҳои стерилӣ ва ғайристерилӣ низ мавҷуданд.

Кӣ истифода мебарадCyrovialsбарои нигоҳ доштани ҳуҷайраҳо дар нитрогени моеъ

Як қатор лабораторияҳои NHS ва лабораторияҳои хусусӣ, инчунин муассисаҳои тадқиқотӣ, ки ба бонкдории хуни корд, биологияи ҳуҷайраҳои эпителиалӣ, иммунология ва биологияи ҳуҷайраҳои бунёдӣ тахассус доранд, криовиалҳоро барои криоконсерватсияи ҳуҷайраҳо истифода мебаранд.

Ҳуҷайраҳое, ки бо ин роҳ нигоҳ дошта мешаванд, ҳуҷайраҳои B ва T, ҳуҷайраҳои CHO, ҳуҷайраҳои гемопоэтикӣ ва авлодӣ, гибридомаҳо, ҳуҷайраҳои рӯда, макрофагҳо, ҳуҷайраҳои мезенхималӣ ва наслӣ, моноситҳо, миелома, ҳуҷайраҳои NK ва ҳуҷайраҳои плурипотентӣ мебошанд.

Баррасии чӣ гуна нигоҳ доштани криовиалҳо дар нитрогени моеъ

Криоконсерватсия равандест, ки ҳуҷайраҳо ва дигар сохторҳои биологиро тавассути хунук кардани онҳо то ҳарорати хеле паст нигоҳ медорад. Ҳуҷайраҳо метавонанд дар нитрогени моеъ тӯли солҳо бе талафоти қобилияти ҳуҷайра нигоҳ дошта шаванд. Ин тавсифи расмиёти истифодашаванда аст.

Омодасозии ҳуҷайра

Усули дақиқи тайёр кардани намунаҳо вобаста ба намуди ҳуҷайра фарқ мекунад, аммо дар маҷмӯъ, ҳуҷайраҳо ҷамъоварӣ ва центрифуга карда мешаванд, то як донаи аз ҳуҷайра бойро таҳия кунанд. Пас аз ин пеллет дар супернатант бо криопротектор ё муҳити криоконсерватсия омехта карда мешавад.

Миёнаи нигоҳдории крио

Ин муҳит барои нигоҳ доштани ҳуҷайраҳо дар муҳити пасти ҳарорат истифода мешавад, ки онҳо тавассути ҷилавгирӣ аз ташаккули кристаллҳои дохилӣ ва берун аз ҳуҷайра ва аз ин рӯ марги ҳуҷайраҳо дучор мешаванд. Нақши онҳо аз таъмини муҳити бехатар ва муҳофизатӣ барои ҳуҷайраҳо ва бофтаҳо дар ҷараёни яхкунӣ, нигоҳдорӣ ва обшавӣ иборат аст.

Муҳити ба монанди плазмаи тару тозаи яхкардашуда (FFP), маҳлули плазмалити гепариншуда ё маҳлулҳои бе зардоб, аз ҷузъҳои ҳайвонот бо криопротекторҳо ба монанди диметилсулфоксиди (DMSO) ё глицерин омехта карда мешаванд.

Пелети намунаи аз нав моеъшуда ба криовиалҳои полипропиленӣ тақсим карда мешавад, ба монандиШиркати биотиббии Suzhou Ace Cryogenic Storage Flakon.

Муҳим аст, ки криовиалҳоро аз ҳад зиёд пур накунед, зеро ин хатари шикастан ва паҳншавии эҳтимолии мундариҷаро зиёд мекунад (1).

Меъёри яхбандии назоратшаванда

Умуман, суръати яхбандии сусти назоратшаванда барои бомуваффақияти криоконсерватсияи ҳуҷайраҳо истифода мешавад.

Пас аз тақсим кардани намунаҳо ба шишаҳои криогенӣ, онҳо дар яхдони тар ё дар яхдони 4℃ ҷойгир карда мешаванд ва тартиби яхкунӣ дар давоми 5 дақиқа оғоз мешавад. Ҳамчун дастури умумӣ, ҳуҷайраҳо бо суръати аз -1 то -3 дар як дақиқа хунук карда мешаванд (2). Ин бо истифода аз сардтари барномарезишаванда ё ҷойгир кардани шишаҳо дар қуттии изолятсияшуда, ки дар яхдони танзимшавандаи аз -70 ° C то -90 ° C ҷойгиршуда ба даст меояд.

Интиқол ба нитрогени моеъ

Пас аз он, шишаҳои криогении яхкардашуда ба зарфи нитрогени моеъ ба муддати номуайян интиқол дода мешаванд, ба шарте ки ҳарорати камтар аз -135 ℃ нигоҳ дошта шавад.

Ин ҳарорати хеле пастро тавассути таъмид ба нитроген дар фазаи моеъ ё буғ ба даст овардан мумкин аст.

Фазаи моеъ ё буғ?

Нитроген дар марҳилаи моеъ нигоҳ доштани ҳарорати сардро бо мувофиқати мутлақ нигоҳ медорад, аммо аксар вақт бо сабабҳои зерин тавсия дода намешавад:

• Талабот ба миқдори зиёди (умқи) нитрогени моеъ, ки хатари эҳтимолӣ аст. Сӯхтан ё нафаскашӣ аз сабаби ин хатари воқеӣ аст.
• Ҳодисаҳои ифлосшавии байнисоҳавӣ аз ҷониби агентҳои сироятӣ ба монанди aspergillus, геп В ва паҳншавии вирусҳо тавассути муҳити нитрогени моеъ (2,3)
• Имконияти ба флаконҳо рехтани нитрогени моеъ ҳангоми таъмид. Вақте ки аз анбор хориҷ карда, то ҳарорати хонагӣ гарм карда мешавад, нитроген зуд васеъ мешавад. Дар натиҷа, шиша метавонад ҳангоми хориҷ шудан аз анбори нитрогени моеъ шикаста, ҳам аз партовҳои парвозкунанда ва ҳам дучор шудан ба мундариҷа хатар эҷод кунад (1, 4).

Бо ин сабабҳо, нигоҳдории ҳарорати ултра паст бештар дар нитрогени фазаи буғ аст. Вақте ки намунаҳо бояд дар марҳилаи моеъ нигоҳ дошта шаванд, қубурҳои махсуси криофлекс бояд истифода шаванд.

Камбудии марҳилаи буғ дар он аст, ки градиенти амудии ҳарорат метавонад ба амал ояд, ки боиси тағйирёбии ҳарорат дар байни -135 ℃ то -190 ℃ мегардад. Ин мониторинги бодиққат ва ҷиддии сатҳи нитрогени моеъ ва тағирёбии ҳароратро тақозо мекунад (5).

Бисёре аз истеҳсолкунандагон тавсия медиҳанд, ки криовиалҳо барои нигоҳдорӣ то -135 ℃ ё барои истифода танҳо дар марҳилаи буғ мувофиқанд.

Об кардани ҳуҷайраҳои криоконсервшудаи шумо

Тартиби обшавӣ барои фарҳанги яхкардашуда стресс аст ва коркард ва техникаи дуруст барои таъмини ҳаёт, барқароршавӣ ва фаъолияти беҳтарини ҳуҷайраҳо зарур аст. Протоколҳои дақиқи обшавӣ аз намудҳои мушаххаси ҳуҷайраҳо вобаста хоҳанд буд. Бо вуҷуди ин, обшавии босуръат стандартӣ барои:

• Ҳар гуна таъсирро ба барқарорсозии ҳуҷайра кам кунед
• Барои кам кардани вақти таъсир ба моддаҳои маҳлул, ки дар васоити яхкунӣ мавҷуданд, кӯмак кунед
• Ҳама гуна зарарро тавассути кристаллизатсияи ях кам кунед

Барои об кардани намунаҳо маъмулан ваннаҳои обӣ, ваннаҳо ё асбобҳои махсуси автоматӣ истифода мешаванд.

Аксар вақт 1 хати ҳуҷайра дар як вақт барои 1-2 дақиқа, бо нарм дар ванна об дар ҳарорати 37 ℃, то он даме, ки дар шиша каме ях боқӣ мемонад, пеш аз шустани онҳо дар муҳити парвариши пешакӣ гармшуда об мешавад.

Барои баъзе ҳуҷайраҳо, ба монанди ҷанинҳои ширхӯр, гармшавии суст барои зинда мондани онҳо муҳим аст.

Ҳуҷайраҳо ҳоло барои фарҳанги ҳуҷайра, ҷудокунии ҳуҷайра ё дар мавриди ҳуҷайраҳои гемопоэтикӣ - омӯзиши қобилиятнокӣ барои кафолат додани якпорчагии ҳуҷайраҳои бунёдии донор пеш аз табобати миелоаблативӣ омодаанд.

Гирифтани аликвотҳои хурди намунаи қаблан шусташуда, ки барои анҷом додани ҳисобкунии ҳуҷайраҳо барои муайян кардани консентратсияи ҳуҷайраҳо барои пластинка дар фарҳанг истифода мешавад, таҷрибаи муқаррарӣ аст. Пас шумо метавонед натиҷаҳои расмиёти ҷудокунии ҳуҷайраҳоро арзёбӣ кунед ва қобилияти мавҷудияти ҳуҷайраҳоро муайян кунед.

Таҷрибаҳои беҳтарин барои нигоҳдории Cryovials

Консерватсияи бомуваффақияти намунаҳои дар криовиалҳо нигоҳ дошташуда аз бисёр унсурҳои протокол вобаста аст, аз ҷумла нигоҳдории дуруст ва нигоҳдории сабт.

• Ҳуҷайраҳоро байни маконҳои нигоҳдорӣ тақсим кунед– Агар ҳаҷмҳо иҷозат диҳанд, ҳуҷайраҳоро байни шишаҳо тақсим кунед ва онҳоро дар ҷойҳои алоҳида нигоҳ доред, то хатари талафоти намунаро аз нокомии таҷҳизот коҳиш диҳед.
• Пешгирии сирояти байниҳамдигарӣ– Пеш аз истифодаи минбаъда, шишаҳои криогении стерилӣ ё автоклавро як маротиба истифода баред
• Барои ҳуҷайраҳои худ шишаҳои мувофиқро истифода баред- шишаҳо дар як қатор ҳаҷмҳо аз 1 то 5 мл меоянд. Аз пур кардани шишаҳо худдорӣ намоед, то хатари шикастани онро кам кунед.
• Флаконҳои криогении дохилӣ ё берунаро интихоб кунед– Флаконҳои дохили риштадор аз ҷониби баъзе донишгоҳҳо барои чораҳои бехатарӣ тавсия карда мешаванд – онҳо инчунин метавонанд ҳангоми пур кардан ё нигоҳ доштан дар нитрогени моеъ олудашавиро пешгирӣ кунанд.
• Пешгирӣ кардани ихроҷ- Барои пешгирӣ кардани ихроҷ ва ифлосшавӣ мӯҳрҳои ду-сӯзандоруеро, ки дар сарпӯши печдор ё ҳалқаҳо сохта шудаанд, истифода баред.
• Штрих-кодҳои 2D ва шишаҳои тамғакуниро истифода баред– барои таъмини пайгирӣ, шишаҳои дорои майдонҳои калони хаттӣ имкон медиҳанд, ки ҳар як шиша тамғагузории мувофиқ дошта бошад. Штрих-кодҳои 2D метавонанд дар идоракунии нигоҳдорӣ ва нигоҳдории сабтҳо кӯмак расонанд. Сарпӯшҳои рамзгузории рангӣ барои муайян кардани осонтар муфиданд.
• Нигоҳдории мувофиқи нигоҳдорӣ- Барои он ки ҳуҷайраҳо гум нашаванд, зарфҳои нигоҳдорӣ бояд доимо ҳарорати ва сатҳи нитрогени моеъро назорат кунанд. Ҳушдорҳо бояд насб карда шаванд, то истифодабарандагонро аз хатогиҳо огоҳ созанд.

Чорабиниҳои бехатарӣ

Нитрогени моеъ дар пажӯҳишҳои муосир таҷрибаи маъмулӣ шудааст, аммо дар сурати истифодаи нодуруст, хатари осеби ҷиддӣ дорад.

Барои кам кардани хатари сармозанӣ, сӯхтагӣ ва дигар ҳодисаҳои номатлуб ҳангоми коркарди нитрогени моеъ таҷҳизоти муҳофизати инфиродӣ (PPE) бояд истифода шавад. Пӯшидан

• Дастпӯшакҳои криогенӣ
• Либоси лабораторӣ
• Сипари пурраи рӯй ба зарба, ки гарданро низ мепӯшонад
• Пойафзолҳои пӯшида
• Пешдомани пластикии пошидан

Яхдонҳои нитрогени моеъ бояд дар ҷойҳои хуб шамол додашуда ҷойгир карда шаванд, то хатари асфиксияро ба ҳадди ақалл кам кунанд - нитрогени хориҷшуда бухор мешавад ва оксигени атмосфераро кӯч медиҳад. Мағозаҳои калонҳаҷм бояд системаҳои огоҳкунии оксигени кам дошта бошанд.

Ҳангоми коркарди нитрогени моеъ кор кардани ҷуфтҳо беҳтарин аст ва истифодаи он берун аз соатҳои муқаррарии корӣ бояд манъ карда шавад.

Cryovials барои дастгирии ҷараёни кори шумо

Ширкати Suzhou Ace Biomedical интихоби васеи маҳсулотро пешниҳод мекунад, ки ба ниёзҳои криоконсерватсияи шумо барои намудҳои гуногуни ҳуҷайраҳо ҷавобгӯ мебошанд. Портфолио як қатор қубурҳо ва инчунин як қатор криовиалҳои безарарро дар бар мегирад.

Криовиалҳои мо инҳоянд:

• Сарпӯши буриши лабораторӣ 0,5 мл 1,5 мл 2,0 мл флаконҳои криогении криовиалӣ криотуби конусии поёни бо протёмник

  ● 0,5 мл, 1,5 мл, 2,0 мл мушаххасот, бо доман ё бе доман
  ● Тарҳи конусӣ ё худ истода, стерилӣ ё ғайристерилӣ ҳарду дастрасанд
  ● Қубурҳои сарпӯш аз полипропилении дараҷаи тиббӣ сохта шудаанд
  ● Флаконҳои PP Cryotube-ро такроран ях кардан ва об кардан мумкин аст
  ●Тарҳрезии сарпӯши беруна метавонад эҳтимолияти ифлосшавиро ҳангоми коркарди намуна кам кунад.
  ● Сарпӯши винт найҳои криогенӣ Риштаҳои универсалӣ барои истифода
  ● Қубурҳо ба роторҳои маъмултарин мувофиқанд
  ● Қуттиҳои ҳалқаи криогении қубурҳо ба қуттиҳои яхдонҳои стандартии 1 дюйм ва 2 дюйм, 48 чӯб, 81 чоҳ, 96 чоҳ ва 100 чоҳ мувофиқанд.
  ● Автоклавшаванда то 121°С ва ях кардан то -86°С

  ҚИСМИ №	МАТЕРИАЛ	ҲАҶМ	CAPРАНГ	PCS/БАГ	САЛТХО/КОЛХО
  ACT05-BL-N	PP	0,5 мл	Сиёҳ, зард, кабуд, сурх, арғувон, сафед	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1,5 мл	Сиёҳ, зард, кабуд, сурх, арғувон, сафед	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1,5 мл	Сиёҳ, зард, кабуд, сурх, арғувон, сафед	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2,0 мл	Сиёҳ, зард, кабуд, сурх, арғувон, сафед	500	10