Стандартизатсияи равандҳо оптимизатсияи онҳо ва минбаъд таъсис ва ҳамоҳангсозии онҳоро дар бар мегирад, ки имкон медиҳад, ки иҷрои оптималии дарозмуддат - новобаста аз истифодабаранда. Стандартизатсия натиҷаҳои баландсифат, инчунин такроршавандагӣ ва муқоисаи онҳоро таъмин мекунад.
Ҳадафи (классикӣ) PCR тавлиди натиҷаи боэътимод ва такроршаванда мебошад. Барои барномаҳои муайян, ҳосилиМаҳсулоти PCRниз дахл дорад. Барои ин аксуламалҳо, бояд ғамхорӣ кард, ки намунаҳо осеб набинанд ва ҷараёни кори PCR устувор боқӣ монад. Махсусан, ин ба ҳадди ақал расонидани воридшавии ифлосшавӣ, ки метавонад ба натиҷаҳои мусбат ё манфии бардурӯғ оварда расонад ё ҳатто реаксияи PCR-ро боздорад, тарҷума мешавад. Ғайр аз он, шароити реаксия бояд то ҳадди имкон барои ҳар як намунаи инфиродӣ дар давоми як давр якхела бошад ва инчунин ба реаксияҳои минбаъда (бо ҳамон усул) интиқол дода шавад. Ин ба таркиби реаксияҳо ва инчунин ба намуди назорати ҳарорат дар циклер дахл дорад. Хатогиҳои корбар, албатта, бояд то ҳадди имкон пешгирӣ карда шаванд.
Дар зер, мо мушкилотҳоеро, ки дар ҷараёни омодагӣ ва дар тӯли як ПЗР дучор мешаванд ва равишҳои ҳалли масъалаҳоеро, ки нисбат ба асбобҳо ва масолеҳи масрафӣ барои стандартизатсияи равандҳои PCR истифода мешаванд, нишон медиҳем.
Омодасозии реаксия
Додани ҷузъҳои реаксия ба зарфҳои PCR ё плитаҳо, мутаносибан як қатор мушкилотро дар бар мегирад, ки бояд бартараф карда шаванд:
Шароити реаксия
Миқдори дақиқ ва дақиқи ҷузъҳои инфиродӣ ҳангоме ки ба шароити реаксияҳои шабеҳи имконпазир ноил шудан лозим аст. Илова ба техникаи хуби пиптинг, интихоби асбоби дуруст муҳим аст. Мастер-омехтаҳои PCR аксар вақт дорои моддаҳое мебошанд, ки часпакро зиёд мекунанд ё кафк тавлид мекунанд. Дар ҷараёни пиптинг, инҳо боиси нам шудани ҷиддии об мешавандмаслиҳатҳои пипетка, ҳамин тавр кам кардани дақиқии пиптинг. Истифодаи системаҳои тақсимоти мустақим ё нӯгҳои пипеткаҳои алтернативӣ, ки ба намшавӣ камтар майл доранд, метавонанд дақиқ ва дақиқи раванди пипеткаро беҳтар кунанд.
Заҳролудшавӣ
Дар ҷараёни тақсимкунӣ, аэрозолҳо тавлид мешаванд, ки дар сурати ба дохили пипетка расидан мумкин аст, дар марҳилаи навбатии пипетка метавонад намунаи дигарро олуда кунад. Инро бо истифода аз маслиҳатҳои филтр ё системаҳои ҷойгиркунии мустақим пешгирӣ кардан мумкин аст.
Маводхои сермасриф ба монандимаслиҳатҳо, зарфҳо ва плитаҳое, ки дар ҷараёни кории PCR истифода мешаванд, набояд дорои моддаҳое бошанд, ки намунаро вайрон мекунанд ё натиҷаро тақаллуб мекунанд. Ба инҳо ДНК, ДНазҳо, РНазҳо ва ингибиторҳои ПТР, инчунин ҷузъҳое дохил мешаванд, ки метавонанд ҳангоми реаксия аз мавод шуста шаванд - моддаҳое, ки бо номи шусташаванда маълуманд.
Хатогии корбар
Чӣ қадаре ки намунаҳо коркард шаванд, хатари хатогиҳо ҳамон қадар зиёдтар мешавад. Ин метавонад ба осонӣ рӯй диҳад, ки намуна ба зарфи нодуруст ё чоҳи нодуруст пипета дода мешавад. Ин хатарро тавассути аломатгузории ба осонӣ намоёни чоҳҳо хеле кам кардан мумкин аст. Тавассути автоматикунонии марҳилаҳои тақсимкунӣ, «омили инсонӣ», яъне хатогиҳо ва вариантҳои вобаста ба корбар ба ҳадди ақалл кам карда мешаванд ва ба ин васила такрористеҳсолкуниро, махсусан дар сурати ҳаҷми хурди реаксия зиёд мекунанд. Ин талаб мекунад, ки лавҳаҳои устувории андозаи кофӣ дар як истгоҳи корӣ истифода шаванд. Штрих-кодҳои замимашуда хониши иловагии мошинро таъмин мекунанд, ки пайгирии намунаро дар тамоми раванд осон мекунад.
Барномасозии термоцикл
Барномасозии асбоб метавонад вақти зиёдро талаб кунад ва инчунин ба хатогиҳо дучор шавад. Хусусиятҳои гуногуни сикли гармии PCR якҷоя кор мекунанд, то ин қадами равандро соддатар кунанд ва муҳимтар аз ҳама, бехатарии он:
Амали осон ва роҳнамоии хуби корбар асоси барномасозии муассир мебошанд. Бар асоси ин таҳкурсӣ, маъмурияти корбар, ки бо парол муҳофизат шудааст, аз тағир додани барномаҳои шахсии худ аз ҷониби корбарони дигар пешгирӣ мекунад. Агар якчанд cyclers (як навъ) дар истифода бошад, фоидаовар аст, агар барнома тавассути USB ё пайвастшавӣ мустақиман аз як асбоб ба асбоби дигар интиқол дода шавад. Нармафзори компютерӣ ба идоракунии марказӣ ва бехатари барномаҳо, ҳуқуқҳои корбарон ва ҳуҷҷатҳо дар компютер имкон медиҳад.
Кори PCR
Дар давоми давидан, ДНК дар зарфи реаксия тақвият дода мешавад, ки дар он ҳар як намуна бояд ба шароити реаксияи якхела ва пайгирона дучор шавад. Ҷанбаҳои зерин барои раванд алоқаманданд:
Назорати ҳарорат
Дақиқии аъло дар назорати ҳарорат ва якхела будани блоки циклер асоси кондитсионерии ҳарорат дар ҳама намунаҳо мебошад. Сифати баланди элементҳои гармидиҳӣ ва хунуккунӣ (элементҳои пельтиер), инчунин тарзи пайваст кардани онҳо ба блок омилҳои ҳалкунанда мебошанд, ки хатари номутобиқатии ҳароратро бо номи “эффекти канор” муайян мекунанд.
Бухоршавӣ
Консентратсияи ҷузъҳои алоҳидаи реаксия набояд дар давоми реаксия аз сабаби бухоршавӣ тағйир ёбад. Дар акси ҳол, мумкин аст, ки хеле камМаҳсулоти PCRметавонад тавлид шавад, ё тамоман нест. Аз ин рӯ, барои кам кардани бухоршавӣ тавассути таъмини мӯҳри бехатар муҳим аст. Дар ин сурат сарпуши гармшудаи термоцикл ва пломбаи зарф даст ба даст кор мекунанд. Вариантҳои гуногуни мӯҳр барои онҳо дастрасандПлитаҳои PCR (пайванд: мақолаи мӯҳр), ки тавассути он мӯҳри беҳтарин тавассути мӯҳри гармӣ ба даст оварда мешавад. Дигар бастаҳо низ метавонанд мувофиқ бошанд, ба шарте ки фишори тамоси сарпӯши сиклиро ба мӯҳри интихобшуда танзим кардан мумкин аст.
Стандартизатсияи равандҳо бо мақсади ҳифзи натиҷаҳои дақиқ ва такроршаванда дар дарозмуддат мавҷуд аст. Ба ин нигохубини мунтазами тачхизотро дар бар мегирад, то ки он хамеша дар холати хуби кор бошад. Ҳама маводи истеъмолӣ бояд дар тамоми лотҳои истеҳсолшуда сифати доимӣ дошта бошанд ва дастрасии боэътимоди онҳо бояд кафолат дода шавад.
Вақти фиристодан: Ноябр-29-2022