విజయవంతమైన యాంప్లిఫికేషన్ ప్రతిచర్యల కోసం, ప్రతి తయారీలో వ్యక్తిగత ప్రతిచర్య భాగాలు సరైన ఏకాగ్రతలో ఉండటం అవసరం. అదనంగా, ఎటువంటి కాలుష్యం జరగకుండా ఉండటం ముఖ్యం.
ప్రత్యేకించి అనేక రియాక్షన్‌లను సెటప్ చేయవలసి వచ్చినప్పుడు, ఒక్కో పాత్రలో ఒక్కో రియాజెంట్‌ని విడివిడిగా పైప్‌ట్ చేయడానికి బదులుగా మాస్టర్ మిక్స్ అని పిలవబడే దానిని సిద్ధం చేయడానికి ఏర్పాటు చేయబడింది. ముందుగా కాన్ఫిగర్ చేయబడిన మిశ్రమాలు వాణిజ్యపరంగా అందుబాటులో ఉన్నాయి, ఇందులో నమూనా-నిర్దిష్ట భాగాలు (ప్రైమర్) మరియు నీరు మాత్రమే జోడించబడతాయి. ప్రత్యామ్నాయంగా, మాస్టర్ మిక్స్‌ను మీరే తయారు చేసుకోవచ్చు. రెండు వేరియంట్‌లలో, మిశ్రమం ప్రతి PCR పాత్రకు టెంప్లేట్ లేకుండా పంపిణీ చేయబడుతుంది మరియు వ్యక్తిగత DNA నమూనా చివరిలో విడిగా జోడించబడుతుంది.
మాస్టర్ మిక్స్‌ను ఉపయోగించడం వల్ల అనేక ప్రయోజనాలు ఉన్నాయి: మొదట, సింగిల్ పైప్టింగ్ దశల సంఖ్య తగ్గించబడుతుంది. ఈ విధంగా, పైప్టింగ్ సమయంలో వినియోగదారు లోపాల ప్రమాదం మరియు కాలుష్యం యొక్క ప్రమాదం రెండూ తగ్గించబడతాయి మరియు, వాస్తవానికి, సమయం ఆదా అవుతుంది. సూత్రప్రాయంగా, పైపెటింగ్ ఖచ్చితత్వం కూడా ఎక్కువగా ఉంటుంది, ఎందుకంటే పెద్ద వాల్యూమ్‌లు మోతాదులో ఉంటాయి. పైపెట్‌ల యొక్క సాంకేతిక డేటాను తనిఖీ చేసేటప్పుడు ఇది అర్థం చేసుకోవడం సులభం: డోస్డ్ వాల్యూమ్ చిన్నది, విచలనాలు ఎక్కువ కావచ్చు. అన్ని సన్నాహాలు ఒకే నౌక నుండి వచ్చిన వాస్తవం సజాతీయతపై సానుకూల ప్రభావాన్ని కలిగి ఉంటుంది (బాగా మిశ్రమంగా ఉంటే). ఇది ప్రయోగాల పునరుత్పత్తి సామర్థ్యాన్ని కూడా మెరుగుపరుస్తుంది.
మాస్టర్ మిక్స్‌ను సిద్ధం చేసేటప్పుడు, కనీసం 10 % అదనపు వాల్యూమ్‌ను జోడించాలి (ఉదా. 10 సన్నాహాలు అవసరమైతే, 11 ఆధారంగా లెక్కించండి), తద్వారా చివరి పాత్ర కూడా సరిగ్గా నిండి ఉంటుంది. ఈ విధంగా, (కొద్దిగా) పైప్టింగ్ తప్పులు మరియు డిటర్జెంట్ కలిగిన సొల్యూషన్‌లను డోస్ చేసేటప్పుడు నమూనా నష్టం యొక్క ప్రభావాన్ని భర్తీ చేయవచ్చు. డిటర్జెంట్లు పాలీమరేసెస్ మరియు మాస్టర్ మిక్స్ వంటి ఎంజైమ్ సొల్యూషన్స్‌లో ఉంటాయి, దీని వలన సాధారణ లోపలి ఉపరితలంపై నురుగు ఏర్పడటానికి మరియు అవశేషాలు ఏర్పడతాయి.పైపెట్ చిట్కాలు.
అప్లికేషన్ మరియు పంపిణీ చేయవలసిన ద్రవ రకాన్ని బట్టి, సరైన పైప్టింగ్ టెక్నిక్ (1)ని ఎంచుకోవాలి మరియు తగిన పరికరాలను ఎంచుకోవాలి. డిటర్జెంట్‌లను కలిగి ఉన్న పరిష్కారాల కోసం, డైరెక్ట్ డిస్‌ప్లేస్‌మెంట్ సిస్టమ్ లేదా ఎయిర్-కుషన్ పైపెట్‌లకు ప్రత్యామ్నాయంగా "తక్కువ నిలుపుదల" పైపెట్ చిట్కాలు సిఫార్సు చేయబడ్డాయి. యొక్క ప్రభావంACE పైపెట్ చిట్కాప్రత్యేకంగా హైడ్రోఫోబిక్ ఉపరితలంపై ఆధారపడి ఉంటుంది. డిటర్జెంట్లు కలిగిన ద్రవాలు లోపల మరియు వెలుపల ఒక అవశేష ఫిల్మ్‌ను వదిలివేయవు, తద్వారా ద్రావణం యొక్క నష్టాన్ని తగ్గించవచ్చు.
అన్ని భాగాల యొక్క ఖచ్చితమైన మోతాదుతో పాటు, సన్నాహాల్లో ఎటువంటి కాలుష్యం జరగకుండా ఉండటం కూడా ముఖ్యం. అధిక స్వచ్ఛత కలిగిన వినియోగ వస్తువులను ఉపయోగించడం సరిపోదు, ఎందుకంటే గాలి కుషన్ పైపెట్‌లో పైప్టింగ్ ప్రక్రియ పైపెట్‌లో ఉండే ఏరోసోల్‌లను ఉత్పత్తి చేస్తుంది. ఏరోసోల్‌లో ఉండే DNA క్రింది పైప్టింగ్ దశలో ఒక నమూనా నుండి మరొకదానికి బదిలీ చేయబడుతుంది మరియు తద్వారా కాలుష్యానికి దారి తీస్తుంది. పైన పేర్కొన్న ప్రత్యక్ష స్థానభ్రంశం వ్యవస్థలు కూడా ఈ ప్రమాదాన్ని తగ్గించవచ్చు. గాలి-కుషన్ పైపెట్‌ల కోసం స్ప్లాష్‌లు, ఏరోసోల్‌లు మరియు జీవఅణువులను నిలుపుకోవడం ద్వారా పైపెట్ కోన్‌ను రక్షించడానికి ఫిల్టర్ చిట్కాలను ఉపయోగించడం అర్ధమే.
పోస్ట్ సమయం: డిసెంబర్-06-2022