పిసిఆర్ మిశ్రమాలను పైపెట్ చేసేటప్పుడు ఏమి పరిగణించాలి?

విజయవంతమైన యాంప్లిఫికేషన్ ప్రతిచర్యల కోసం, ప్రతి తయారీలో సరైన ఏకాగ్రతలో వ్యక్తిగత ప్రతిచర్య భాగాలు ఉండటం అవసరం. అదనంగా, కాలుష్యం జరగడం ముఖ్యం.

ప్రత్యేకించి చాలా ప్రతిచర్యలు సెటప్ చేయవలసి వచ్చినప్పుడు, ప్రతి కారకాన్ని ప్రతి నౌకలో విడిగా పైపుట్ చేయడానికి బదులుగా మాస్టర్ మిక్స్ అని పిలవబడేలా ఇది స్థాపించబడింది. ప్రీ-కాన్ఫిగర్ చేసిన మిశ్రమాలు వాణిజ్యపరంగా లభిస్తాయి, దీనిలో నమూనా-నిర్దిష్ట భాగాలు (ప్రైమర్) మరియు నీరు మాత్రమే జోడించబడతాయి. ప్రత్యామ్నాయంగా, మాస్టర్ మిశ్రమాన్ని మీరే తయారు చేసుకోవచ్చు. రెండు వేరియంట్లలో, ఈ మిశ్రమం ప్రతి పిసిఆర్ నౌకకు టెంప్లేట్ లేకుండా పంపిణీ చేయబడుతుంది మరియు వ్యక్తిగత DNA నమూనా చివరిలో విడిగా జోడించబడుతుంది.

మాస్టర్ మిశ్రమాన్ని ఉపయోగించడం చాలా ప్రయోజనాలను కలిగి ఉంది: మొదట, సింగిల్ పైపెటింగ్ దశల సంఖ్య తగ్గుతుంది. ఈ విధంగా, పైపెటింగ్ సమయంలో వినియోగదారు లోపాల ప్రమాదం మరియు కలుషిత ప్రమాదం రెండూ తగ్గించబడతాయి మరియు సమయం ఆదా అవుతుంది. సూత్రప్రాయంగా, పెద్ద వాల్యూమ్‌లు మోతాదులో ఉన్నందున పైపెటింగ్ ఖచ్చితత్వం కూడా ఎక్కువ. పైపెట్ల యొక్క సాంకేతిక డేటాను తనిఖీ చేసేటప్పుడు ఇది అర్థం చేసుకోవడం చాలా సులభం: చిన్న మోతాదు వాల్యూమ్, ఎక్కువ విచలనాలు ఉంటాయి. అన్ని సన్నాహాలు ఒకే నౌక నుండి వచ్చాయనే వాస్తవం సజాతీయతపై సానుకూల ప్రభావాన్ని చూపుతుంది (బాగా మిశ్రమంగా ఉంటే). ఇది ప్రయోగాల పునరుత్పత్తి సామర్థ్యాన్ని కూడా మెరుగుపరుస్తుంది.

మాస్టర్ మిశ్రమాన్ని సిద్ధం చేసేటప్పుడు, కనీసం 10 % అదనపు వాల్యూమ్ జోడించాలి (ఉదా. 10 సన్నాహాలు అవసరమైతే, 11 ఆధారంగా లెక్కించండి), తద్వారా చివరి నౌక కూడా సరిగ్గా నిండి ఉంటుంది. ఈ విధంగా, (స్వల్ప) పైపెటింగ్ దోషాలు మరియు డిటర్జెంట్ కలిగిన పరిష్కారాలను మోతాదు చేసేటప్పుడు నమూనా నష్టం యొక్క ప్రభావాన్ని భర్తీ చేయవచ్చు. డిటర్జెంట్లు పాలిమరేసెస్ మరియు మాస్టర్ మిక్స్‌లు వంటి ఎంజైమ్ పరిష్కారాలలో ఉంటాయి, దీనివల్ల నురుగు ఏర్పడటం మరియు సాధారణ లోపలి ఉపరితలంపై అవశేషాలుపైపెట్ చిట్కాలు.

అప్లికేషన్ మరియు పంపిణీ చేయవలసిన ద్రవ రకాన్ని బట్టి, సరైన పైపెటింగ్ టెక్నిక్ (1) ఎంచుకోవాలి మరియు తగిన పరికరాలను ఎంచుకోవాలి. డిటర్జెంట్లను కలిగి ఉన్న పరిష్కారాల కోసం, ప్రత్యక్ష స్థానభ్రంశం వ్యవస్థ లేదా "తక్కువ నిలుపుదల" పైపెట్ చిట్కాలు అని పిలవబడేవి ఎయిర్-కుషన్ పైపెట్లకు ప్రత్యామ్నాయంగా సిఫార్సు చేయబడతాయి. యొక్క ప్రభావంఏస్ పైపెట్ చిట్కాముఖ్యంగా హైడ్రోఫోబిక్ ఉపరితలం మీద ఆధారపడి ఉంటుంది. డిటర్జెంట్లను కలిగి ఉన్న ద్రవాలు లోపల మరియు వెలుపల అవశేషాలను వదిలివేయవు, తద్వారా ద్రావణం కోల్పోవడం తగ్గించబడుతుంది.

అన్ని భాగాల యొక్క ఖచ్చితమైన మోతాదుతో పాటు, సన్నాహాల యొక్క కలుషితం జరగడం కూడా ముఖ్యం. అధిక స్వచ్ఛత యొక్క వినియోగ వస్తువులను ఉపయోగించడం సరిపోదు, ఎందుకంటే ఎయిర్ కుషన్ పైపెట్‌లో పైపెటింగ్ ప్రక్రియ పైపెట్‌లో ఉండే ఏరోసోల్‌లను ఉత్పత్తి చేస్తుంది. ఏరోసోల్‌లో ఉన్న DNA ను ఒక నమూనా నుండి తరువాతి స్థాయికి కింది పైపెటింగ్ దశలో బదిలీ చేయవచ్చు మరియు తద్వారా కలుషితానికి దారితీస్తుంది. పైన పేర్కొన్న ప్రత్యక్ష స్థానభ్రంశం వ్యవస్థలు కూడా ఈ ప్రమాదాన్ని తగ్గించవచ్చు. ఎయిర్-క్యూషన్ పైపెట్ల కోసం స్ప్లాష్‌లు, ఏరోసోల్స్ మరియు బయోమోలిక్యులేస్‌లను నిలుపుకోవడం ద్వారా పైపెట్ కోన్‌ను రక్షించడానికి ఫిల్టర్ చిట్కాలను ఉపయోగించడం అర్ధమే.