క్రయోవియల్స్ద్రవ నత్రజనితో నిండిన డెవార్లలో సెల్ లైన్లు మరియు ఇతర క్లిష్టమైన జీవ పదార్థాల క్రయోజెనిక్ నిల్వ కోసం సాధారణంగా ఉపయోగిస్తారు.

ద్రవ నత్రజనిలో కణాల విజయవంతమైన సంరక్షణలో అనేక దశలు ఉన్నాయి. ప్రాథమిక సూత్రం స్లో ఫ్రీజ్ అయితే, ఉపయోగించే ఖచ్చితమైన సాంకేతికత సెల్ రకం మరియు ఉపయోగించిన క్రియోప్రొటెక్టెంట్‌పై ఆధారపడి ఉంటుంది. అటువంటి తక్కువ ఉష్ణోగ్రతల వద్ద సెల్‌లను నిల్వ చేసేటప్పుడు పరిగణనలోకి తీసుకోవలసిన అనేక భద్రతా పరిగణనలు మరియు ఉత్తమ పద్ధతులు ఉన్నాయి.

ఈ పోస్ట్ క్రయోవియల్స్ ద్రవ నైట్రోజన్‌లో ఎలా నిల్వ చేయబడతాయో ఒక అవలోకనాన్ని అందించడం లక్ష్యంగా పెట్టుకుంది.

క్రయోవియల్స్ అంటే ఏమిటి

క్రయోవియల్స్ చాలా తక్కువ ఉష్ణోగ్రతల వద్ద ద్రవ నమూనాలను నిల్వ చేయడానికి రూపొందించబడిన చిన్న, క్యాప్డ్ వైల్స్. క్రియోప్రొటెక్టెంట్‌లో భద్రపరచబడిన కణాలు ద్రవ నైట్రోజన్‌తో ప్రత్యక్ష సంబంధంలోకి రాకుండా, సెల్యులార్ ఫ్రాక్చర్‌ల ప్రమాదాన్ని తగ్గిస్తాయి, అదే సమయంలో ద్రవ నత్రజని యొక్క విపరీతమైన శీతలీకరణ ప్రభావం నుండి ప్రయోజనం పొందుతాయి.

సీసాలు సాధారణంగా వాల్యూమ్‌లు మరియు డిజైన్‌ల పరిధిలో అందుబాటులో ఉంటాయి - అవి అంతర్గతంగా లేదా బాహ్యంగా ఫ్లాట్ లేదా గుండ్రని బాటమ్‌లతో థ్రెడ్ చేయబడతాయి. స్టెరైల్ మరియు నాన్-స్టెరైల్ ఫార్మాట్‌లు కూడా అందుబాటులో ఉన్నాయి.

ఎవరు ఉపయోగిస్తున్నారుసైరోవియల్స్లిక్విడ్ నైట్రోజన్‌లో కణాలను నిల్వ చేయడానికి

NHS మరియు ప్రైవేట్ లేబొరేటరీల శ్రేణి, అలాగే కార్డ్ బ్లడ్ బ్యాంకింగ్, ఎపిథీలియల్ సెల్ బయాలజీ, ఇమ్యునాలజీ మరియు స్టెమ్ సెల్ బయాలజీలో ప్రత్యేకత కలిగిన పరిశోధనా సంస్థలు కణాలను క్రియోప్రెజర్వ్ చేయడానికి క్రయోవియల్స్‌ను ఉపయోగిస్తాయి.

ఈ విధంగా భద్రపరచబడిన కణాలలో B మరియు T కణాలు, CHO కణాలు, హెమటోపోయిటిక్ స్టెమ్ మరియు ప్రొజెనిటర్ కణాలు, హైబ్రిడోమాస్, పేగు కణాలు, మాక్రోఫేజెస్, మెసెన్చైమల్ స్టెమ్ మరియు ప్రొజెనిటర్ సెల్స్, మోనోసైట్లు, మైలోమా, NK కణాలు మరియు ప్లూరిపోటెంట్ స్టెమ్ సెల్స్ ఉన్నాయి.

లిక్విడ్ నైట్రోజన్‌లో క్రయోవియల్స్‌ను ఎలా నిల్వ చేయాలి అనే దాని యొక్క అవలోకనం

క్రియోప్రెజర్వేషన్ అనేది కణాలు మరియు ఇతర జీవ నిర్మాణాలను అతి తక్కువ ఉష్ణోగ్రతలకు చల్లబరచడం ద్వారా వాటిని సంరక్షించే ప్రక్రియ. సెల్ ఎబిబిలిటీని కోల్పోకుండా కణాలను ద్రవ నత్రజనిలో సంవత్సరాలపాటు నిల్వ చేయవచ్చు. ఇది అమలు చేసే విధానాల సారాంశం.

సెల్ తయారీ

నమూనాలను సిద్ధం చేయడానికి ఖచ్చితమైన పద్ధతి సెల్ రకాన్ని బట్టి మారుతుంది, అయితే సాధారణంగా, సెల్-రిచ్ పెల్లెట్‌ను అభివృద్ధి చేయడానికి కణాలు సేకరించబడతాయి మరియు సెంట్రిఫ్యూజ్ చేయబడతాయి. ఈ గుళిక క్రియోప్రొటెక్టెంట్ లేదా క్రియోప్రెజర్వేషన్ మాధ్యమంతో కలిపిన సూపర్‌నాటెంట్‌లో మళ్లీ అమర్చబడుతుంది.

క్రయోప్రెజర్వేషన్ మీడియం

తక్కువ-ఉష్ణోగ్రత వాతావరణంలో కణాలను సంరక్షించడానికి ఈ మాధ్యమం ఉపయోగించబడుతుంది, అవి ఇంట్రా మరియు ఎక్స్‌ట్రాసెల్యులర్ స్ఫటికాలు ఏర్పడకుండా నిరోధించడం ద్వారా కణాల మరణానికి గురవుతాయి. గడ్డకట్టడం, నిల్వ చేయడం మరియు ద్రవీభవన ప్రక్రియల సమయంలో కణాలు మరియు కణజాలాలకు సురక్షితమైన, రక్షిత వాతావరణాన్ని అందించడం వారి పాత్ర.

తాజా ఘనీభవించిన ప్లాస్మా (FFP), హెపారినైజ్డ్ ప్లాస్మాలైట్ సొల్యూషన్ లేదా సీరం లేని, జంతు భాగాల రహిత సొల్యూషన్స్ వంటి మాధ్యమం డైమిథైల్ సల్ఫాక్సైడ్ (DMSO) లేదా గ్లిసరాల్ వంటి క్రయోప్రొటెక్టెంట్‌లతో మిళితం చేయబడింది.

రీ-లిక్విఫైడ్ నమూనా గుళిక వంటి పాలీప్రొఫైలిన్ క్రయోవియల్స్‌లో ఆల్కట్ చేయబడిందిసుజౌ ఏస్ బయోమెడికల్ కంపెనీ క్రయోజెనిక్ స్టోరేజ్ వైల్స్.

క్రయోవియల్స్‌ను ఓవర్‌ఫిల్ చేయకుండా ఉండటం చాలా ముఖ్యం ఎందుకంటే ఇది పగుళ్లు ఏర్పడే ప్రమాదాన్ని మరియు కంటెంట్‌ల విడుదలను పెంచుతుంది (1).

నియంత్రిత ఫ్రీజ్ రేట్

సాధారణంగా, కణాల విజయవంతమైన క్రియోప్రెజర్వేషన్ కోసం నెమ్మదిగా నియంత్రిత ఫ్రీజ్ రేట్ ఉపయోగించబడుతుంది.

నమూనాలను క్రయోజెనిక్ సీసాలలోకి మార్చిన తర్వాత, వాటిని తడి మంచు మీద లేదా 4℃ రిఫ్రిజిరేటర్‌లో ఉంచుతారు మరియు 5 నిమిషాల్లో గడ్డకట్టే ప్రక్రియ ప్రారంభమవుతుంది. సాధారణ గైడ్‌గా, కణాలు నిమిషానికి -1 నుండి -3 చొప్పున చల్లబడతాయి (2). ప్రోగ్రామబుల్ కూలర్‌ని ఉపయోగించి లేదా –70°C నుండి –90°C నియంత్రిత రేట్ ఫ్రీజర్‌లో ఉంచిన ఇన్సులేటెడ్ బాక్స్‌లో వైల్స్‌ను ఉంచడం ద్వారా ఇది సాధించబడుతుంది.

లిక్విడ్ నైట్రోజన్‌కి బదిలీ చేయండి

ఘనీభవించిన క్రయోజెనిక్ సీసాలు -135℃ కంటే తక్కువ ఉష్ణోగ్రత నిర్వహించబడితే నిరవధిక కాలానికి ద్రవ నైట్రోజన్ ట్యాంక్‌కు బదిలీ చేయబడతాయి.

ఈ అల్ట్రా-తక్కువ ఉష్ణోగ్రతలను ద్రవ లేదా ఆవిరి దశ నైట్రోజన్‌లో ఇమ్మర్షన్ చేయడం ద్వారా పొందవచ్చు.

ద్రవ లేదా ఆవిరి దశ?

లిక్విడ్ ఫేజ్ నైట్రోజన్‌లో నిల్వ చేయడం అనేది శీతల ఉష్ణోగ్రతను సంపూర్ణ స్థిరత్వంతో నిర్వహిస్తుంది, అయితే ఈ క్రింది కారణాల వల్ల తరచుగా సిఫార్సు చేయబడదు:

• సంభావ్య ప్రమాదం అయిన ద్రవ నత్రజని యొక్క పెద్ద వాల్యూమ్‌ల (లోతు) అవసరం. దీని వల్ల కాలిన గాయాలు లేదా ఊపిరి పీల్చుకోవడం నిజమైన ప్రమాదం.
• ద్రవ నత్రజని మాధ్యమం (2,3) ద్వారా అస్పర్‌గిల్లస్, హెప్ బి మరియు వైరల్ వ్యాప్తి వంటి ఇన్ఫెక్షియస్ ఏజెంట్ల ద్వారా క్రాస్-కాలుష్యం యొక్క డాక్యుమెంట్ కేసులు
• ఇమ్మర్షన్ సమయంలో ద్రవ నైట్రోజన్ సీసాలలోకి లీక్ అయ్యే అవకాశం. నిల్వ నుండి తీసివేసి గది ఉష్ణోగ్రతకు వేడెక్కినప్పుడు, నత్రజని వేగంగా విస్తరిస్తుంది. పర్యవసానంగా, ద్రవ నత్రజని నిల్వ నుండి తీసివేసినప్పుడు పగిలి పగిలిపోవచ్చు, ఎగిరే శిధిలాలు మరియు కంటెంట్‌లకు గురికావడం రెండింటి నుండి ప్రమాదాన్ని సృష్టిస్తుంది (1, 4).

ఈ కారణాల వల్ల, అతి తక్కువ ఉష్ణోగ్రత నిల్వ సాధారణంగా ఆవిరి దశ నైట్రోజన్‌లో ఉంటుంది. నమూనాలను ద్రవ దశలో నిల్వ చేయవలసి వచ్చినప్పుడు, ప్రత్యేకమైన క్రయోఫ్లెక్స్ గొట్టాలను ఉపయోగించాలి.

ఆవిరి దశకు ప్రతికూలత ఏమిటంటే -135℃ మరియు -190℃ మధ్య ఉష్ణోగ్రత హెచ్చుతగ్గుల ఫలితంగా నిలువు ఉష్ణోగ్రత ప్రవణత ఏర్పడుతుంది. ఇది ద్రవ నత్రజని స్థాయిలు మరియు ఉష్ణోగ్రత వైవిధ్యాలను జాగ్రత్తగా మరియు శ్రద్ధగా పర్యవేక్షించడం అవసరం (5).

చాలా మంది తయారీదారులు క్రయోవియల్‌లు -135℃ వరకు నిల్వ చేయడానికి లేదా ఆవిరి దశలో మాత్రమే ఉపయోగించేందుకు సరిపోతాయని సిఫార్సు చేస్తున్నారు.

మీ క్రియోప్రెజర్డ్ కణాలను కరిగించడం

ఘనీభవించిన సంస్కృతికి థావింగ్ విధానం ఒత్తిడిని కలిగిస్తుంది మరియు కణాల యొక్క సరైన సాధ్యత, పునరుద్ధరణ మరియు కార్యాచరణను నిర్ధారించడానికి సరైన నిర్వహణ మరియు సాంకేతికత అవసరం. ఖచ్చితమైన థావింగ్ ప్రోటోకాల్‌లు నిర్దిష్ట సెల్ రకాలపై ఆధారపడి ఉంటాయి. అయినప్పటికీ, వేగవంతమైన ద్రవీభవన ప్రమాణంగా పరిగణించబడుతుంది:

• సెల్యులార్ రికవరీపై ఏదైనా ప్రభావాన్ని తగ్గించండి
• ఘనీభవన మాధ్యమంలో ఉన్న ద్రావణాలకు బహిర్గతమయ్యే సమయాన్ని తగ్గించడంలో సహాయపడండి
• ఐస్ రీక్రిస్టలైజేషన్ ద్వారా ఏదైనా నష్టాన్ని తగ్గించండి

నీటి స్నానాలు, పూసల స్నానాలు లేదా ప్రత్యేక స్వయంచాలక సాధనాలు సాధారణంగా నమూనాలను కరిగించడానికి ఉపయోగిస్తారు.

చాలా తరచుగా, 1 సెల్ లైన్ 37℃ నీటి స్నానంలో మెల్లగా తిప్పడం ద్వారా 1-2 నిమిషాల పాటు కరిగిపోతుంది, ముందుగా వేడిచేసిన వృద్ధి మాధ్యమంలో వాటిని కడగడానికి ముందు సీసాలో కొంచెం మంచు మిగిలి ఉంటుంది.

క్షీరద పిండాల వంటి కొన్ని కణాలకు, వాటి మనుగడకు నెమ్మదిగా వేడెక్కడం అవసరం.

కణాలు ఇప్పుడు సెల్ కల్చర్, సెల్ ఐసోలేషన్ లేదా హెమటోపోయిటిక్ స్టెమ్ సెల్స్ విషయంలో సిద్ధంగా ఉన్నాయి - మైలోఅబ్లేటివ్ థెరపీకి ముందు దాత మూలకణాల సమగ్రతకు హామీ ఇవ్వడానికి సాధ్యత అధ్యయనాలు.

సంస్కృతిలో ప్లేటింగ్ కోసం సెల్ సాంద్రతలను నిర్ణయించడానికి సెల్ గణనను నిర్వహించడానికి ఉపయోగించే ముందుగా కడిగిన నమూనా యొక్క చిన్న ఆల్కాట్‌లను తీసుకోవడం సాధారణ పద్ధతి. మీరు సెల్ ఐసోలేషన్ విధానాల ఫలితాలను అంచనా వేయవచ్చు మరియు సెల్ ఎబిబిలిటీని నిర్ణయించవచ్చు.

క్రయోవియల్స్ నిల్వ కోసం ఉత్తమ పద్ధతులు

క్రయోవియల్స్‌లో నిల్వ చేయబడిన నమూనాల విజయవంతమైన క్రియోప్రెజర్వేషన్ సరైన నిల్వ మరియు రికార్డ్ కీపింగ్‌తో సహా ప్రోటోకాల్‌లోని అనేక అంశాలపై ఆధారపడి ఉంటుంది.

• నిల్వ స్థానాల మధ్య కణాలను విభజించండి– వాల్యూమ్‌లు అనుమతించినట్లయితే, పరికరాల వైఫల్యాల కారణంగా నమూనా నష్టపోయే ప్రమాదాన్ని తగ్గించడానికి, సెల్‌లను సీసాల మధ్య విభజించి, వాటిని ప్రత్యేక ప్రదేశాలలో నిల్వ చేయండి.
• క్రాస్ కాలుష్యాన్ని నిరోధించండి- తదుపరి వినియోగానికి ముందు సింగిల్-యూజ్ స్టెరైల్ క్రయోజెనిక్ వైల్స్ లేదా ఆటోక్లేవ్‌ను ఎంచుకోండి
• మీ కణాల కోసం తగిన పరిమాణపు కుండలను ఉపయోగించండి- vials 1 మరియు 5mls మధ్య వాల్యూమ్‌ల పరిధిలో వస్తాయి. పగుళ్లు ఏర్పడే ప్రమాదాన్ని తగ్గించడానికి సీసాలను ఓవర్‌ఫిల్ చేయడం మానుకోండి.
• అంతర్గత లేదా బాహ్యంగా థ్రెడ్ చేయబడిన క్రయోజెనిక్ వైల్స్‌ను ఎంచుకోండి- భద్రతా చర్యల కోసం అంతర్గతంగా థ్రెడ్ చేసిన కుండలను కొన్ని విశ్వవిద్యాలయాలు సిఫార్సు చేస్తాయి - అవి నింపే సమయంలో లేదా ద్రవ నత్రజనిలో నిల్వ చేయబడినప్పుడు కూడా కాలుష్యాన్ని నిరోధించవచ్చు.
• లీకేజీని అరికట్టండి- లీక్ మరియు కాలుష్యం నిరోధించడానికి స్క్రూ-క్యాప్ లేదా O-రింగ్స్‌లో అచ్చు వేయబడిన ద్వి-ఇంజెక్ట్ సీల్స్ ఉపయోగించండి.
• 2D బార్‌కోడ్‌లు మరియు లేబుల్ సీసాలను ఉపయోగించండి- ట్రేస్బిలిటీని నిర్ధారించడానికి, పెద్ద వ్రాత ప్రాంతాలతో కూడిన సీసాలు ప్రతి సీసాని తగినంతగా లేబుల్ చేయడానికి వీలు కల్పిస్తాయి. 2D బార్‌కోడ్‌లు నిల్వ నిర్వహణ మరియు రికార్డ్ కీపింగ్‌లో సహాయపడతాయి. సులభంగా గుర్తించడానికి కలర్ కోడెడ్ క్యాప్స్ ఉపయోగపడతాయి.
• తగినంత నిల్వ నిర్వహణ- కణాలు కోల్పోకుండా ఉండేలా, నిల్వ నాళాలు ఉష్ణోగ్రత మరియు ద్రవ నత్రజని స్థాయిలను నిరంతరం పర్యవేక్షించాలి. లోపాల గురించి వినియోగదారులను అప్రమత్తం చేయడానికి అలారాలు అమర్చాలి.

భద్రతా జాగ్రత్తలు

లిక్విడ్ నైట్రోజన్ అనేది ఆధునిక పరిశోధనలో సాధారణ పద్ధతిగా మారింది కానీ తప్పుగా ఉపయోగించినట్లయితే తీవ్రమైన గాయం అయ్యే ప్రమాదం ఉంది.

లిక్విడ్ నైట్రోజన్‌ను నిర్వహించేటప్పుడు ఫ్రాస్ట్‌బైట్, కాలిన గాయాలు మరియు ఇతర ప్రతికూల సంఘటనల ప్రమాదాన్ని తగ్గించడానికి సరైన వ్యక్తిగత రక్షణ పరికరాలు (PPE) ధరించాలి. ధరించండి

• క్రయోజెనిక్ చేతి తొడుగులు
• ప్రయోగశాల కోటు
• మెడను కూడా కప్పి ఉంచే ఇంపాక్ట్ రెసిస్టెంట్ ఫుల్ ఫేస్ షీల్డ్
• మూసిన కాలి బూట్లు
• స్ప్లాష్‌ప్రూఫ్ ప్లాస్టిక్ ఆప్రాన్

లిక్విడ్ నైట్రోజన్ రిఫ్రిజిరేటర్‌లను ఉక్కిరిబిక్కిరి చేసే ప్రమాదాన్ని తగ్గించడానికి బాగా వెంటిలేషన్ ఉన్న ప్రదేశాలలో ఉంచాలి - తప్పించుకున్న నైట్రోజన్ వాతావరణ ఆక్సిజన్‌ను ఆవిరి చేస్తుంది మరియు స్థానభ్రంశం చేస్తుంది. పెద్ద పరిమాణం గల దుకాణాలు తక్కువ ఆక్సిజన్ అలారం వ్యవస్థలను కలిగి ఉండాలి.

ద్రవ నత్రజనిని నిర్వహించేటప్పుడు జంటగా పనిచేయడం అనువైనది మరియు సాధారణ పని గంటల వెలుపల దాని ఉపయోగం నిషేధించబడాలి.

మీ వర్క్‌ఫ్లోకు మద్దతు ఇవ్వడానికి క్రియోవియల్స్

సుజౌ ఏస్ బయోమెడికల్ కంపెనీ వివిధ రకాల కణాల కోసం మీ క్రియోప్రెజర్వేషన్ అవసరాలను తీర్చే ఉత్పత్తుల యొక్క విస్తృత ఎంపికను అందిస్తుంది. పోర్ట్‌ఫోలియోలో అనేక రకాల ట్యూబుసాలు అలాగే స్టెరైల్ క్రయోవియల్స్ శ్రేణి ఉన్నాయి.

మా క్రయోవియల్స్:

• ల్యాబ్ స్క్రూ క్యాప్ 0.5mL 1.5mL 2.0mL క్రయోవియల్ క్రయోజెనిక్ వైల్స్ శంఖాకార బాటమ్ క్రయోట్యూబ్ విత్ గ్యాస్కెట్

  ● 0.5ml,1.5ml,2.0ml స్పెసిఫికేషన్, స్కర్ట్‌తో లేదా స్కర్ట్ లేకుండా
  ● కోనికల్ లేదా సెల్ఫ్ స్టాండింగ్ డిజైన్, స్టెరైల్ లేదా నాన్-స్టెరైల్ రెండూ అందుబాటులో ఉన్నాయి
  ● స్క్రూ క్యాప్ ట్యూబ్‌లు మెడికల్ గ్రేడ్ పాలీప్రొఫైలిన్‌తో తయారు చేయబడ్డాయి
  ● PP క్రయోట్యూబ్ వైల్స్‌ను పదే పదే స్తంభింపజేయవచ్చు మరియు కరిగించవచ్చు
  ●బాహ్య క్యాప్ డిజైన్ నమూనా చికిత్స సమయంలో కాలుష్య సంభావ్యతను తగ్గిస్తుంది.
  ● ఉపయోగం కోసం స్క్రూ క్యాప్ క్రయోజెనిక్ ట్యూబ్‌లు యూనివర్సల్ స్క్రూ థ్రెడ్‌లు
  ● ట్యూబ్‌లు అత్యంత సాధారణ రోటర్‌లకు సరిపోతాయి
  ● క్రయోజెనిక్ ట్యూబ్ ఓ-రింగ్ ట్యూబ్‌లు ప్రామాణిక 1-అంగుళాల మరియు 2-అంగుళాల, 48 బావి, 81 బావి, 96 బావి మరియు 100వెల్ ఫ్రీజర్ బాక్స్‌లకు సరిపోతాయి
  ● 121°Cకి ఆటోక్లేవబుల్ మరియు -86°C వరకు ఫ్రీజ్ చేయగలదు

  పార్ట్ నం	మెటీరియల్	వాల్యూమ్	CAPరంగు	PCS/బ్యాగ్	బ్యాగ్‌లు/కేసు
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	నలుపు, పసుపు, నీలం, ఎరుపు, ఊదా, తెలుపు	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5మి.లీ	నలుపు, పసుపు, నీలం, ఎరుపు, ఊదా, తెలుపు	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5మి.లీ	నలుపు, పసుపు, నీలం, ఎరుపు, ఊదా, తెలుపు	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	నలుపు, పసుపు, నీలం, ఎరుపు, ఊదా, తెలుపు	500	10