ప్రక్రియల ప్రామాణీకరణలో వాటి ఆప్టిమైజేషన్ మరియు తదుపరి స్థాపన మరియు శ్రావ్యత ఉంటుంది, ఇది వినియోగదారుని బట్టి స్వతంత్రంగా దీర్ఘ-కాల సరైన పనితీరును అనుమతిస్తుంది. ప్రామాణీకరణ అధిక-నాణ్యత ఫలితాలను, అలాగే వాటి పునరుత్పత్తి మరియు పోలికను నిర్ధారిస్తుంది.
(క్లాసిక్) PCR యొక్క లక్ష్యం నమ్మదగిన మరియు పునరుత్పాదక ఫలితం యొక్క తరం. నిర్దిష్ట అనువర్తనాల కోసం, దిగుబడిPCR ఉత్పత్తిసంబంధితంగా కూడా ఉంది. ఈ ప్రతిచర్యల కోసం, నమూనాలు రాజీ పడకుండా మరియు PCR వర్క్ఫ్లో స్థిరంగా ఉండేలా జాగ్రత్త తీసుకోవాలి. ప్రత్యేకంగా, ఇది తప్పుడు సానుకూల లేదా తప్పుడు ప్రతికూల ఫలితాలకు దారితీసే లేదా PCR ప్రతిచర్యను నిరోధించే కాలుష్యాల ప్రవేశాన్ని తగ్గించడానికి అనువదిస్తుంది. ఇంకా, రన్లో ఉన్న ప్రతి వ్యక్తి నమూనాకు ప్రతిచర్య పరిస్థితులు వీలైనంత ఒకేలా ఉండాలి మరియు తదుపరి ప్రతిచర్యలకు (అదే పద్ధతిలో) కూడా బదిలీ చేయబడతాయి. ఇది ప్రతిచర్యల కూర్పును అలాగే సైక్లర్లోని ఉష్ణోగ్రత నియంత్రణ రకాన్ని సూచిస్తుంది. వినియోగదారు లోపాలు, వాస్తవానికి, వీలైనంత వరకు నివారించబడతాయి.
క్రింద, మేము PCR తయారీ సమయంలో మరియు అమలులో ఎదుర్కొనే సవాళ్లను ప్రదర్శిస్తాము - మరియు PCR వర్క్ఫ్లోల ప్రామాణీకరణ కోసం ఉపయోగించే సాధనాలు మరియు వినియోగ వస్తువులకు సంబంధించి పరిష్కారాల విధానాలను ప్రదర్శిస్తాము.
ప్రతిచర్య తయారీ
ప్రతిచర్య భాగాలను PCR-నాళాలు లేదా ప్లేట్లలోకి పంపిణీ చేయడం వరుసగా బహుళ సవాళ్లను కలిగి ఉంటుంది, వీటిని అధిగమించాలి:
ప్రతిచర్య పరిస్థితులు
సాధ్యమయ్యే అత్యంత సారూప్య ప్రతిచర్య పరిస్థితులను లక్ష్యంగా చేసుకున్నప్పుడు వ్యక్తిగత భాగాల యొక్క ఖచ్చితమైన మరియు ఖచ్చితమైన మోతాదు చాలా అవసరం. మంచి పైప్టింగ్ టెక్నిక్తో పాటు, సరైన సాధనాన్ని ఎంచుకోవడం చాలా కీలకం. PCR మాస్టర్-మిక్స్లు తరచుగా స్నిగ్ధతను పెంచే లేదా నురుగును ఉత్పత్తి చేసే పదార్థాలను కలిగి ఉంటాయి. పైపెటింగ్ ప్రక్రియలో, ఇవి గణనీయమైన చెమ్మగిల్లడానికి దారితీస్తాయిపైపెట్ చిట్కాలు, తద్వారా పైప్టింగ్ ఖచ్చితత్వం తగ్గుతుంది. డైరెక్ట్ డిస్పెన్సింగ్ సిస్టమ్స్ లేదా ప్రత్యామ్నాయ పైపెట్ చిట్కాలను ఉపయోగించడం వల్ల చెమ్మగిల్లడానికి తక్కువ అవకాశం ఉంటుంది, పైప్టింగ్ ప్రక్రియ యొక్క ఖచ్చితత్వం మరియు ఖచ్చితత్వాన్ని మెరుగుపరుస్తుంది.
కాలుష్యాలు
పంపిణీ ప్రక్రియలో, ఏరోసోల్లు ఉత్పత్తి చేయబడతాయి, ఇవి పైపెట్ లోపలికి చేరుకోవడానికి అనుమతించినట్లయితే, తదుపరి పైప్టింగ్ దశలో మరొక నమూనాను కలుషితం చేసే అవకాశం ఉంది. ఫిల్టర్ చిట్కాలు లేదా డైరెక్ట్ డిస్ప్లేస్మెంట్ సిస్టమ్లను ఉపయోగించడం ద్వారా దీనిని నివారించవచ్చు.
వంటి వినియోగ వస్తువులుచిట్కాలు, PCR వర్క్ఫ్లో ఉపయోగించే నాళాలు మరియు ప్లేట్లు నమూనాను రాజీ చేసే లేదా ఫలితాన్ని తప్పుదోవ పట్టించే పదార్థాలను కలిగి ఉండకూడదు. వీటిలో DNA, DNases, RNases మరియు PCR ఇన్హిబిటర్లు ఉన్నాయి, అలాగే ప్రతిచర్య సమయంలో పదార్థం నుండి సంభావ్యంగా లీచ్ అయ్యే భాగాలు - లీచబుల్స్ అని పిలువబడే పదార్థాలు.
వినియోగదారు లోపం
ఎక్కువ నమూనాలు ప్రాసెస్ చేయబడితే, లోపం ప్రమాదం ఎక్కువగా ఉంటుంది. ఒక నమూనా తప్పు పాత్రలోకి లేదా తప్పు బావిలోకి పంపడం సులభంగా జరగవచ్చు. బావుల యొక్క సులభంగా గుర్తించదగిన మార్కింగ్ ద్వారా ఈ ప్రమాదాన్ని గణనీయంగా తగ్గించవచ్చు. పంపిణీ దశల ఆటోమేషన్ ద్వారా, "మానవ కారకం", అంటే లోపాలు మరియు వినియోగదారు-సంబంధిత వైవిధ్యాలు తగ్గించబడతాయి, తద్వారా పునరుత్పత్తి పెరుగుతుంది, ముఖ్యంగా చిన్న ప్రతిచర్య వాల్యూమ్ల విషయంలో. దీనికి వర్క్స్టేషన్లో తగిన డైమెన్షనల్ స్టెబిలిటీ ఉన్న ప్లేట్లు అవసరం. జోడించిన బార్కోడ్లు అదనపు మెషీన్-రీడబిలిటీని అందిస్తాయి, ఇది మొత్తం ప్రక్రియ అంతటా నమూనా ట్రాకింగ్ను సులభతరం చేస్తుంది.
థర్మోసైక్లర్ యొక్క ప్రోగ్రామింగ్
ఒక పరికరాన్ని ప్రోగ్రామింగ్ చేయడం వల్ల సమయం తీసుకుంటుంది మరియు లోపం సంభవించవచ్చు. వివిధ PCR థర్మల్ సైక్లర్ ఫీచర్లు ఈ ప్రక్రియ దశను సులభతరం చేయడానికి మరియు ముఖ్యంగా దీన్ని సురక్షితంగా చేయడానికి కలిసి పని చేస్తాయి:
సులభమైన ఆపరేషన్ మరియు మంచి వినియోగదారు మార్గదర్శకత్వం సమర్థవంతమైన ప్రోగ్రామింగ్కు ఆధారం. ఈ పునాదిపై నిర్మించడం, పాస్వర్డ్-రక్షిత వినియోగదారు పరిపాలన ఒకరి స్వంత ప్రోగ్రామ్లను ఇతర వినియోగదారులు మార్చకుండా నిరోధిస్తుంది. బహుళ సైక్లర్లు (ఒకే రకం) ఉపయోగంలో ఉన్నట్లయితే, USB లేదా కనెక్టివిటీ ద్వారా ప్రోగ్రామ్ను నేరుగా ఒక పరికరం నుండి మరొక పరికరంకి బదిలీ చేయగలిగితే అది ప్రయోజనకరంగా ఉంటుంది. కంప్యూటర్ సాఫ్ట్వేర్ కంప్యూటర్లో ప్రోగ్రామ్లు, వినియోగదారు హక్కులు మరియు పత్రాల యొక్క కేంద్ర మరియు సురక్షిత నిర్వహణను అనుమతిస్తుంది.
PCR అమలు
రన్ సమయంలో, DNA ప్రతిచర్య పాత్రలో విస్తరించబడుతుంది, ఇక్కడ ప్రతి నమూనా ఒకేలా, స్థిరమైన ప్రతిచర్య పరిస్థితులకు లోబడి ఉండాలి. కింది అంశాలు ప్రక్రియకు సంబంధించినవి:
ఉష్ణోగ్రత నియంత్రణ
ఉష్ణోగ్రత నియంత్రణలో అద్భుతమైన ఖచ్చితత్వం మరియు సైక్లర్ బ్లాక్ యొక్క సజాతీయత అన్ని నమూనాల సమాన ఉష్ణోగ్రత కండిషనింగ్కు ఆధారం. హీటింగ్ మరియు కూలింగ్ ఎలిమెంట్స్ యొక్క అధిక నాణ్యత (పెల్టియర్ ఎలిమెంట్స్), అలాగే వీటిని బ్లాక్కి కనెక్ట్ చేసే విధానం, "ఎడ్జ్ ఎఫెక్ట్" అని పిలువబడే ఉష్ణోగ్రత వ్యత్యాసాల ప్రమాదాన్ని నిర్ణయించే నిర్ణయాత్మక కారకాలు.
బాష్పీభవనం
బాష్పీభవనం కారణంగా ప్రతిచర్య సమయంలో వ్యక్తిగత ప్రతిచర్య భాగాల సాంద్రతలు మారకూడదు. లేకపోతే, అది చాలా తక్కువ అవకాశం ఉందిPCR ఉత్పత్తిఉత్పత్తి చేయబడవచ్చు లేదా ఏదీ ఉండదు. అందువల్ల సురక్షితమైన ముద్రను నిర్ధారించడం ద్వారా బాష్పీభవనాన్ని తగ్గించడం చాలా కీలకం. ఈ సందర్భంలో, థర్మోసైక్లర్ యొక్క వేడిచేసిన మూత మరియు నౌక యొక్క సీల్ చేతితో పని చేస్తాయి. వివిధ సీలింగ్ ఎంపికలు అందుబాటులో ఉన్నాయిPCR ప్లేట్లు (లింక్: సీలింగ్ ఆర్టికల్), దీని ద్వారా హీట్ సీలింగ్ ద్వారా ఉత్తమ ముద్ర సాధించబడుతుంది. సైక్లర్ మూత యొక్క కాంటాక్ట్ ప్రెజర్ ఎంచుకున్న సీల్కు సర్దుబాటు చేయబడినంత వరకు ఇతర మూసివేతలు కూడా అనుకూలంగా ఉండవచ్చు.
దీర్ఘకాలంలో ఖచ్చితమైన మరియు పునరుత్పాదక ఫలితాలను కాపాడేందుకు ప్రక్రియ ప్రామాణీకరణ అమలులో ఉంది. ఇది ఎల్లప్పుడూ మంచి పని స్థితిలో ఉండేలా చూసుకోవడానికి పరికరాల యొక్క సాధారణ నిర్వహణను కలిగి ఉంటుంది. ఉత్పత్తి చేయబడిన అన్ని లాట్లలో అన్ని వినియోగ వస్తువులు స్థిరంగా అధిక నాణ్యత కలిగి ఉండాలి మరియు వాటి విశ్వసనీయ లభ్యతకు హామీ ఇవ్వాలి.
పోస్ట్ సమయం: నవంబర్-29-2022