வெற்றிகரமான பெருக்க எதிர்வினைகளுக்கு, ஒவ்வொரு தயாரிப்பிலும் தனிப்பட்ட எதிர்வினை கூறுகள் சரியான செறிவில் இருப்பது அவசியம். கூடுதலாக, எந்த மாசுபாடும் ஏற்படாமல் இருப்பது முக்கியம்.
குறிப்பாக பல எதிர்வினைகளை அமைக்க வேண்டியிருக்கும் போது, ஒவ்வொரு பாத்திரத்திலும் தனித்தனியாக ஒவ்வொரு ரியாஜெண்டையும் பைப்ட் செய்வதற்குப் பதிலாக, மாஸ்டர் கலவை என்று அழைக்கப்படுவதைத் தயாரிப்பது நிறுவப்பட்டுள்ளது. முன்-கட்டமைக்கப்பட்ட கலவைகள் வணிக ரீதியாக கிடைக்கின்றன, இதில் மாதிரி-குறிப்பிட்ட கூறுகள் (ப்ரைமர்) மற்றும் நீர் மட்டுமே சேர்க்கப்படும். மாற்றாக, மாஸ்டர் கலவையை நீங்களே தயார் செய்யலாம். இரண்டு வகைகளிலும், கலவையானது ஒவ்வொரு PCR பாத்திரத்திற்கும் டெம்ப்ளேட் இல்லாமல் விநியோகிக்கப்படுகிறது மற்றும் தனிப்பட்ட DNA மாதிரி இறுதியில் தனித்தனியாக சேர்க்கப்படும்.
மாஸ்டர் கலவையைப் பயன்படுத்துவது பல நன்மைகளைக் கொண்டுள்ளது: முதலாவதாக, ஒற்றை குழாய் படிகளின் எண்ணிக்கை குறைக்கப்படுகிறது. இந்த வழியில், குழாய் பதிக்கும் போது பயனர் பிழைகளின் ஆபத்து மற்றும் மாசுபாட்டின் ஆபத்து இரண்டும் குறைக்கப்பட்டு, நிச்சயமாக, நேரம் சேமிக்கப்படுகிறது. கொள்கையளவில், பைப்பெட்டிங் துல்லியம் அதிகமாக உள்ளது, ஏனெனில் பெரிய தொகுதிகள் அளவிடப்படுகின்றன. குழாய்களின் தொழில்நுட்பத் தரவைச் சரிபார்க்கும்போது இதைப் புரிந்துகொள்வது எளிது: சிறிய அளவு அளவு, அதிக விலகல்கள் இருக்கலாம். அனைத்து தயாரிப்புகளும் ஒரே பாத்திரத்தில் இருந்து வருகின்றன என்பது ஒருமைப்பாட்டின் மீது நேர்மறையான விளைவைக் கொண்டிருக்கிறது (நன்கு கலந்திருந்தால்). இது சோதனைகளின் மறுஉருவாக்கம் திறனையும் மேம்படுத்துகிறது.
மாஸ்டர் கலவையைத் தயாரிக்கும் போது, குறைந்தபட்சம் 10 % கூடுதல் அளவைச் சேர்க்க வேண்டும் (எ.கா. 10 தயாரிப்புகள் தேவைப்பட்டால், 11 இன் அடிப்படையில் கணக்கிடுங்கள்), இதனால் கடைசி பாத்திரம் கூட சரியாக நிரப்பப்படும். இந்த வழியில், (சிறிதளவு) குழாய் பிழைகள், மற்றும் சவர்க்காரம் கொண்ட தீர்வுகளை டோஸ் செய்யும் போது மாதிரி இழப்பின் விளைவை ஈடுசெய்ய முடியும். பாலிமரேஸ்கள் மற்றும் மாஸ்டர் கலவைகள் போன்ற நொதி கரைசல்களில் சவர்க்காரங்கள் உள்ளன, இதனால் நுரை உருவாக்கம் மற்றும் சாதாரண உட்புற மேற்பரப்பில் எச்சங்கள்குழாய் குறிப்புகள்.
பயன்பாடு மற்றும் விநியோகிக்கப்படும் திரவத்தின் வகையைப் பொறுத்து, சரியான குழாய் நுட்பம் (1) தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டு பொருத்தமான உபகரணங்களைத் தேர்ந்தெடுக்க வேண்டும். சவர்க்காரங்களைக் கொண்ட தீர்வுகளுக்கு, நேரடி இடப்பெயர்ச்சி அமைப்பு அல்லது காற்று-குஷன் பைப்பெட்டுகளுக்கு மாற்றாக "குறைந்த தக்கவைப்பு" குழாய் குறிப்புகள் பரிந்துரைக்கப்படுகின்றன. விளைவுACE PIPETTE முனைகுறிப்பாக ஹைட்ரோபோபிக் மேற்பரப்பை அடிப்படையாகக் கொண்டது. சவர்க்காரங்களைக் கொண்ட திரவங்கள் உள்ளேயும் வெளியேயும் ஒரு எச்சப் படத்தை விட்டுவிடாது, இதனால் கரைசலின் இழப்பைக் குறைக்கலாம்.
அனைத்து கூறுகளின் சரியான அளவைத் தவிர, தயாரிப்புகளில் எந்த மாசும் ஏற்படாமல் இருப்பதும் முக்கியம். அதிக தூய்மையான நுகர்பொருட்களைப் பயன்படுத்துவது போதுமானதாக இல்லை, ஏனெனில் காற்று குஷன் பைப்பெட்டில் குழாய் பதிக்கும் செயல்முறை குழாயில் இருக்கும் ஏரோசோல்களை உருவாக்க முடியும். ஏரோசோலில் இருக்கக்கூடிய டிஎன்ஏ பின்வரும் குழாய் படியில் ஒரு மாதிரியிலிருந்து அடுத்த மாதிரிக்கு மாற்றப்படலாம், இதனால் மாசுபடுவதற்கு வழிவகுக்கும். மேலே குறிப்பிட்டுள்ள நேரடி இடப்பெயர்ச்சி அமைப்புகளும் இந்த அபாயத்தைக் குறைக்கலாம். காற்று-குஷன் பைப்பெட்டுகளுக்கு, ஸ்பிளாஸ்கள், ஏரோசோல்கள் மற்றும் உயிர் மூலக்கூறுகளைத் தக்கவைத்து பைப்பெட் கோனைப் பாதுகாக்க வடிகட்டி குறிப்புகளைப் பயன்படுத்துவது அர்த்தமுள்ளதாக இருக்கிறது.
இடுகை நேரம்: டிசம்பர்-06-2022