செயல்முறைகளின் தரப்படுத்தல், அவற்றின் தேர்வுமுறை மற்றும் அடுத்தடுத்த நிறுவல் மற்றும் ஒத்திசைவு ஆகியவற்றை உள்ளடக்கியது, இது நீண்ட கால உகந்த செயல்திறனை அனுமதிக்கிறது - பயனரைச் சார்ந்தது அல்ல. தரநிலைப்படுத்தல் உயர்தர முடிவுகளை உறுதி செய்கிறது, அத்துடன் அவற்றின் மறுஉற்பத்தி மற்றும் ஒப்பீடு.
(கிளாசிக்) PCR இன் குறிக்கோள் நம்பகமான மற்றும் மறுஉருவாக்கம் செய்யக்கூடிய முடிவை உருவாக்குவதாகும். சில பயன்பாடுகளுக்கு, விளைச்சல்PCR தயாரிப்புபொருத்தமானதும் ஆகும். இந்த எதிர்விளைவுகளுக்கு, மாதிரிகள் சமரசம் செய்யப்படாமல் இருப்பதையும், PCR பணிப்பாய்வு நிலையானதாக இருப்பதையும் உறுதி செய்ய வேண்டும். குறிப்பாக, இது தவறான நேர்மறை அல்லது தவறான எதிர்மறை முடிவுகளுக்கு வழிவகுக்கும் அல்லது PCR எதிர்வினையைத் தடுக்கக்கூடிய மாசுபாடுகளை அறிமுகப்படுத்துவதைக் குறைக்கிறது. மேலும், எதிர்வினை நிலைமைகள் ஒரு ஓட்டத்திற்குள் ஒவ்வொரு தனிப்பட்ட மாதிரிக்கும் முடிந்தவரை ஒரே மாதிரியாக இருக்க வேண்டும் மற்றும் அடுத்தடுத்த எதிர்வினைகளுக்கு (அதே முறை) மாற்றக்கூடியதாக இருக்க வேண்டும். இது எதிர்வினைகளின் கலவை மற்றும் சுழற்சியில் வெப்பநிலை கட்டுப்பாடு வகை ஆகியவற்றைக் குறிக்கிறது. பயனர் பிழைகள், நிச்சயமாக, முடிந்தவரை தவிர்க்கப்பட வேண்டும்.
கீழே, PCR தயாரிப்பின் போது எதிர்கொள்ளும் சவால்கள் மற்றும் PCR ரன் முழுவதும் - மற்றும் PCR பணிப்பாய்வுகளின் தரப்படுத்தலுக்குப் பயன்படுத்தப்படும் கருவிகள் மற்றும் நுகர்பொருட்கள் தொடர்பான தீர்வுகளுக்கான அணுகுமுறைகளை நாங்கள் விளக்குவோம்.
எதிர்வினை தயாரிப்பு
எதிர்வினைக் கூறுகளை முறையே பிசிஆர்-கலங்கள் அல்லது தட்டுகளில் விநியோகிப்பது, கடக்க வேண்டிய பல சவால்களை உள்ளடக்கியது:
எதிர்வினை நிலைமைகள்
சாத்தியமான மிகவும் ஒத்த எதிர்வினை நிலைமைகளை இலக்காகக் கொள்ளும்போது தனிப்பட்ட கூறுகளின் துல்லியமான மற்றும் துல்லியமான டோஸ் இன்றியமையாதது. ஒரு நல்ல குழாய் நுட்பத்துடன் கூடுதலாக, சரியான கருவியைத் தேர்ந்தெடுப்பது மிகவும் முக்கியமானது. பிசிஆர் மாஸ்டர்-கலவைகள் பாகுத்தன்மையை அதிகரிக்கும் அல்லது நுரை உருவாக்கும் பொருட்களைக் கொண்டிருக்கின்றன. குழாய் பதிக்கும் செயல்பாட்டின் போது, இவை கணிசமான ஈரப்பதத்திற்கு வழிவகுக்கும்குழாய் குறிப்புகள், இதனால் பைப்பெட்டிங் துல்லியம் குறைகிறது. நேரடி விநியோக முறைகள் அல்லது மாற்று குழாய் குறிப்புகள் ஈரமாவதற்கு வாய்ப்புகள் குறைவாக இருப்பதால் குழாய் பதிக்கும் செயல்முறையின் துல்லியம் மற்றும் துல்லியத்தை மேம்படுத்தலாம்.
அசுத்தங்கள்
விநியோகச் செயல்பாட்டின் போது, ஏரோசோல்கள் உருவாக்கப்படுகின்றன, அவை குழாயின் உட்புறத்தை அடைய அனுமதித்தால், அடுத்த பைப்பெட்டிங் படியின் போது மற்றொரு மாதிரியை மாசுபடுத்தலாம். வடிகட்டி குறிப்புகள் அல்லது நேரடி இடப்பெயர்ச்சி அமைப்புகளைப் பயன்படுத்தி இதைத் தடுக்கலாம்.
போன்ற நுகர்பொருட்கள்குறிப்புகள், PCR பணிப்பாய்வுகளில் பயன்படுத்தப்படும் பாத்திரங்கள் மற்றும் தட்டுகள் மாதிரியை சமரசம் செய்யும் அல்லது முடிவை பொய்யாக்கும் பொருட்கள் இருக்கக்கூடாது. DNA, DNases, RNases மற்றும் PCR இன்ஹிபிட்டர்கள், அத்துடன் எதிர்வினையின் போது பொருளில் இருந்து வெளியேறக்கூடிய கூறுகள் - லீச்சபிள்ஸ் எனப்படும் பொருட்கள்.
பயனர் பிழை
அதிக மாதிரிகள் செயலாக்கப்படுவதால், பிழை ஆபத்து அதிகமாகும். ஒரு மாதிரி தவறான பாத்திரத்திலோ அல்லது தவறான கிணற்றிலோ குழாய் போடப்படுவது எளிதாக நடக்கும். கிணறுகளை எளிதில் கண்டறியும் வகையில் குறிப்பதன் மூலம் இந்த ஆபத்தை கணிசமாகக் குறைக்கலாம். விநியோகிக்கும் படிகளின் தானியங்கு மூலம், "மனித காரணி", அதாவது, பிழைகள் மற்றும் பயனர் தொடர்பான மாறுபாடுகள் குறைக்கப்படுகின்றன, இதனால் இனப்பெருக்கம் அதிகரிக்கிறது, குறிப்பாக சிறிய எதிர்வினை அளவுகளில். இதற்கு ஒரு பணிநிலையத்தில் பணிபுரிய போதுமான அளவு நிலைத்தன்மை கொண்ட தட்டுகள் தேவை. இணைக்கப்பட்ட பார்கோடுகள் கூடுதல் இயந்திர-வாசிப்புத்தன்மையை வழங்குகின்றன, இது முழு செயல்முறையிலும் மாதிரி கண்காணிப்பை எளிதாக்குகிறது.
தெர்மோசைக்ளரின் நிரலாக்கம்
ஒரு கருவியை நிரலாக்குவது நேரத்தைச் செலவழிக்கும் மற்றும் பிழை ஏற்படக்கூடியதாக இருக்கும். வெவ்வேறு PCR வெப்ப சுழற்சி அம்சங்கள் இந்த செயல்முறையை எளிதாக்குவதற்கும், மிக முக்கியமாக, பாதுகாப்பானதாக்குவதற்கும் ஒன்றாக வேலை செய்கின்றன:
எளிதான செயல்பாடு மற்றும் நல்ல பயனர் வழிகாட்டுதல் ஆகியவை திறமையான நிரலாக்கத்தின் அடிப்படையாகும். இந்த அடித்தளத்தை உருவாக்குவது, கடவுச்சொல்-பாதுகாக்கப்பட்ட பயனர் நிர்வாகம் ஒருவரின் சொந்த நிரல்களை மற்ற பயனர்களால் மாற்றுவதைத் தடுக்கும். பல சைக்கிள்கள் (ஒரே வகை) பயன்பாட்டில் இருந்தால், ஒரு நிரலை நேரடியாக ஒரு கருவியில் இருந்து மற்றொரு கருவிக்கு USB அல்லது இணைப்பு வழியாக மாற்றினால் அது நன்மை பயக்கும். கணினி மென்பொருள் ஒரு கணினியில் நிரல்கள், பயனர் உரிமைகள் மற்றும் ஆவணங்களின் மைய மற்றும் பாதுகாப்பான நிர்வாகத்தை செயல்படுத்துகிறது.
PCR ரன்
ஓட்டத்தின் போது, டிஎன்ஏ எதிர்வினை பாத்திரத்தில் பெருக்கப்படுகிறது, அங்கு ஒவ்வொரு மாதிரியும் ஒரே மாதிரியான, நிலையான எதிர்வினை நிலைமைகளுக்கு உட்படுத்தப்பட வேண்டும். செயல்முறைக்கு பின்வரும் அம்சங்கள் பொருத்தமானவை:
வெப்பநிலை கட்டுப்பாடு
வெப்பநிலை கட்டுப்பாட்டில் சிறந்த துல்லியம் மற்றும் சைக்கிள் பிளாக்கின் ஒருமைப்பாடு ஆகியவை அனைத்து மாதிரிகளின் வெப்பநிலை சீரமைப்புக்கு அடிப்படையாகும். வெப்பமூட்டும் மற்றும் குளிரூட்டும் கூறுகளின் உயர் தரம் (பெல்டியர் கூறுகள்), அத்துடன் இவை தொகுதியுடன் இணைக்கப்பட்டுள்ள விதம் ஆகியவை "எட்ஜ் எஃபெக்ட்" எனப்படும் வெப்பநிலை வேறுபாடுகளின் அபாயத்தை தீர்மானிக்கும் காரணிகளாகும்.
ஆவியாதல்
ஆவியாதல் காரணமாக எதிர்வினையின் போது தனிப்பட்ட எதிர்வினை கூறுகளின் செறிவு மாறக்கூடாது. இல்லையெனில், அது மிகவும் குறைவாக சாத்தியமாகும்PCR தயாரிப்புஉருவாக்கப்படலாம் அல்லது எதுவும் இல்லை. எனவே பாதுகாப்பான முத்திரையை உறுதி செய்வதன் மூலம் ஆவியாவதைக் குறைப்பது மிகவும் முக்கியமானது. இந்த வழக்கில், தெர்மோசைக்லரின் சூடான மூடி மற்றும் கப்பலின் முத்திரை ஆகியவை கைகோர்த்து செயல்படுகின்றன. பல்வேறு சீல் விருப்பங்கள் உள்ளனPCR தட்டுகள் (இணைப்பு: சீல் கட்டுரை), இதன் மூலம் வெப்ப சீல் மூலம் சிறந்த முத்திரை அடையப்படுகிறது. தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட முத்திரையுடன் சைக்கிள் மூடியின் தொடர்பு அழுத்தத்தை சரிசெய்யும் வரை, பிற மூடல்களும் பொருத்தமானதாக இருக்கலாம்.
நீண்ட காலத்திற்கு துல்லியமான மற்றும் மறுஉருவாக்கம் செய்யக்கூடிய முடிவுகளைப் பாதுகாப்பதற்காக செயல்முறை தரநிலைப்படுத்தல் இடத்தில் உள்ளது. சாதனம் எப்போதும் நல்ல வேலை நிலையில் இருப்பதை உறுதி செய்வதற்காக வழக்கமான பராமரிப்பும் இதில் அடங்கும். அனைத்து நுகர்பொருட்களும் உற்பத்தி செய்யப்படும் அனைத்து இடங்களிலும் தொடர்ந்து உயர் தரத்தில் இருக்க வேண்டும், மேலும் அவற்றின் நம்பகமான கிடைக்கும் தன்மைக்கு உத்தரவாதம் அளிக்கப்பட வேண்டும்.
இடுகை நேரம்: நவம்பர்-29-2022