Kwa athari za ukuzaji zilizofanikiwa, inahitajika kwamba sehemu za mmenyuko za kibinafsi ziwepo katika mkusanyiko sahihi katika kila maandalizi. Kwa kuongeza, ni muhimu kwamba hakuna uchafuzi hutokea.
Hasa wakati athari nyingi zinapaswa kuanzishwa, imeanzishwa ili kuandaa kinachojulikana mchanganyiko mkuu badala ya kupiga bomba kila reagent tofauti katika kila chombo. Michanganyiko iliyosanidiwa mapema inapatikana kibiashara, ambapo vipengele maalum vya sampuli pekee (primer) na maji huongezwa. Vinginevyo, mchanganyiko wa bwana unaweza kutayarishwa na wewe mwenyewe. Katika lahaja zote mbili, mchanganyiko husambazwa kwa kila chombo cha PCR bila kiolezo na sampuli ya DNA ya mtu binafsi huongezwa kando mwishoni.
Kutumia mchanganyiko wa bwana kuna faida kadhaa: Kwanza, idadi ya hatua za bomba moja imepunguzwa. Kwa njia hii, hatari zote za makosa ya mtumiaji wakati wa kupiga bomba na hatari ya uchafuzi hupunguzwa na, bila shaka, wakati umehifadhiwa. Kimsingi, usahihi wa bomba pia ni wa juu, kwani viwango vikubwa vinachukuliwa. Hii ni rahisi kuelewa wakati wa kuangalia data ya kiufundi ya pipettes: kiasi kidogo cha kipimo, kupotoka kunaweza kuwa juu. Ukweli kwamba maandalizi yote yanatoka kwenye chombo kimoja ina athari nzuri juu ya homogeneity (ikiwa imechanganywa vizuri). Hii pia inaboresha ujanibishaji wa majaribio.
Wakati wa kuandaa mchanganyiko mkuu, angalau 10% ya kiasi cha ziada kinapaswa kuongezwa (kwa mfano, ikiwa maandalizi 10 yanahitajika, hesabu kwa msingi wa 11), ili hata chombo cha mwisho kijazwe vizuri. Kwa njia hii, makosa (kidogo) ya upigaji bomba, na athari za upotezaji wa sampuli wakati wa kunyunyizia suluhisho zenye sabuni zinaweza kulipwa. Sabuni zimo katika suluhu za kimeng'enya kama vile polimasi na mchanganyiko mkuu, na kusababisha uundaji wa povu na mabaki kwenye uso wa ndani wa kawaida.vidokezo vya pipette.
Kulingana na maombi na aina ya kioevu kitakachotolewa, mbinu sahihi ya bomba (1) inapaswa kuchaguliwa na vifaa vinavyofaa kuchaguliwa. Kwa suluhisho zilizo na sabuni, mfumo wa uhamishaji wa moja kwa moja au vidokezo vya bomba vya "uhifadhi wa chini" kama njia mbadala ya bomba za mto wa hewa hupendekezwa. Athari yaKidokezo cha ACE PIPETTEinategemea uso wa haidrofobu. Vioevu vyenye sabuni haviacha filamu ya mabaki ndani na nje, ili upotevu wa ufumbuzi unaweza kupunguzwa.
Licha ya kipimo halisi cha vipengele vyote, ni muhimu pia kwamba hakuna uchafuzi wa maandalizi hutokea. Haitoshi kutumia matumizi ya usafi wa juu, kwa sababu mchakato wa kupiga bomba kwenye pipette ya mto wa hewa unaweza kuzalisha erosoli ambazo zinabaki kwenye pipette. DNA ambayo inaweza kuwa katika erosoli inaweza kuhamishwa kutoka sampuli moja hadi nyingine katika hatua ifuatayo ya bomba na hivyo kusababisha uchafuzi. Mifumo ya uhamishaji wa moja kwa moja iliyotajwa hapo juu inaweza pia kupunguza hatari hii. Kwa mabomba ya mto wa hewa ni mantiki kutumia vidokezo vya chujio kulinda koni ya pipette kwa kubakiza splashes, erosoli, na biomolecules.
Muda wa kutuma: Dec-06-2022