Cryovialshutumiwa kawaida kwa uhifadhi wa cryogenic wa mistari ya seli na vifaa vingine muhimu vya kibaolojia, katika dewars zilizojazwa na nitrojeni kioevu.

Kuna hatua kadhaa zinazohusika katika uhifadhi wa seli zilizofanikiwa katika nitrojeni kioevu. Wakati kanuni ya msingi ni kufungia polepole, mbinu halisi iliyoajiriwa inategemea aina ya seli na cryoprotectant inayotumika. Kuna mazingatio kadhaa ya usalama na mazoea bora ya kuzingatia wakati wa kuhifadhi seli kwa joto la chini.

Chapisho hili linalenga kutoa muhtasari wa jinsi cryovials huhifadhiwa katika nitrojeni kioevu.

Je! Ni nini cryovials

Cryovials ni ndogo, viini vilivyowekwa iliyoundwa iliyoundwa kwa kuhifadhi sampuli za kioevu kwa joto la chini sana. Wanahakikisha kuwa seli zilizohifadhiwa katika cryoprotectant haziwasiliani moja kwa moja na nitrojeni kioevu, kupunguza hatari ya kupunguka kwa seli wakati bado zinafaidika na athari ya baridi ya nitrojeni.

Viunga kawaida hupatikana katika anuwai ya miundo na miundo - zinaweza kuwekwa ndani au nje kwa nyuzi za gorofa au zilizo na mviringo. Fomati zenye kuzaa na zisizo za kuzaa zinapatikana pia.

Ambaye hutumiaWadauKuhifadhi seli katika nitrojeni kioevu

Anuwai ya NHS na maabara ya kibinafsi, pamoja na taasisi za utafiti zinazobobea katika benki ya damu, biolojia ya seli ya epithelial, chanjo na biolojia ya seli ya shina hutumia cryovials kwa seli za cryopreserve.

Seli zilizohifadhiwa kwa njia hii ni pamoja na seli za B na T, seli za CHO, shina la hematopoietic na seli za progenitor, mseto, seli za matumbo, macrophages, shina la mesenchymal na seli za progenitor, monocytes, myeloma, seli za NK na seli za shina.

Muhtasari wa jinsi ya kuhifadhi cryovials katika nitrojeni kioevu

Cryopreservation ni mchakato ambao huhifadhi seli na sehemu zingine za kibaolojia kwa kuziweka kwa joto la chini sana. Seli zinaweza kuhifadhiwa katika nitrojeni kioevu kwa miaka bila kupoteza uwezo wa seli. Hii ni muhtasari wa taratibu zilizotumiwa.

Maandalizi ya seli

Njia halisi ya kuandaa sampuli itatofautiana kulingana na aina ya seli, lakini kwa ujumla, seli zinakusanywa na kuwekwa katikati ili kukuza pellet yenye utajiri wa seli. Pellet hii basi imewekwa tena katika supernatant iliyochanganywa na cryoprotectant au kati ya cryopreservation.

Kati ya cryopreservation

Kati hii imeajiriwa kuhifadhi seli katika mazingira ya joto la chini watakayowekwa kwa kuzuia malezi ya fuwele za ndani na za nje na kwa hivyo kifo cha seli. Jukumu lao ni kutoa mazingira salama, ya kinga kwa seli na tishu wakati wa kufungia, uhifadhi, na michakato ya kuchafua.

Kati kama vile plasma iliyohifadhiwa safi (FFP), suluhisho la plasmalyte iliyosafishwa au suluhisho la bure la serum, sehemu ya wanyama huchanganywa na cryoprotectants kama dimethyl sulphoxide (DMSO) au glycerol.

Pellet ya sampuli iliyoorodheshwa upya imejumuishwa kwenye cryovials za polypropylene kama vileKampuni ya Suzhou Ace Biomedical Cryogenic Hifadhi.

Ni muhimu sio kuzidisha cryovials kwani hii itaongeza hatari ya kupasuka na kutolewa kwa yaliyomo (1).

Kiwango cha kufungia kilichodhibitiwa

Kwa ujumla, kiwango cha kufungia kinachodhibitiwa polepole huajiriwa kwa kufanikiwa kwa seli.

Baada ya sampuli kujumuishwa kwenye viini vya cryogenic, huwekwa kwenye barafu ya mvua au kwenye jokofu 4 ℃ na utaratibu wa kufungia umeanza ndani ya dakika 5. Kama mwongozo wa jumla, seli zimepozwa kwa kiwango cha -1 hadi -3 kwa dakika (2). Hii inafanikiwa kwa kutumia baridi inayoweza kupangwa au kwa kuweka viini kwenye sanduku la maboksi lililowekwa katika -70 ° C hadi -90 ° C iliyodhibitiwa kiwango cha kufungia.

Kuhamisha kwa nitrojeni kioevu

Viunga vya cryogenic waliohifadhiwa huhamishiwa kwa tank ya nitrojeni kioevu kwa vipindi visivyo vya kawaida ilitoa joto la chini ya -135 ℃ linatunzwa.

Joto hizi za chini zinaweza kupatikana kwa kuzamishwa katika nitrojeni ya kioevu au mvuke.

Awamu ya kioevu au mvuke?

Uhifadhi katika nitrojeni ya awamu ya kioevu inajulikana kudumisha joto baridi na msimamo kamili, lakini mara nyingi haifai kwa sababu zifuatazo:

• Haja ya kiasi kikubwa (kina) cha nitrojeni kioevu ambayo ni hatari inayowezekana. Burns au pumu kwa sababu ya hii ni hatari ya kweli.
• Kesi zilizoandikwa za uchafuzi wa msalaba na mawakala wa kuambukiza kama vile Aspergillus, HEP B na virusi vilivyoenea kupitia kioevu cha kati cha nitrojeni (2,3)
• Uwezo wa nitrojeni kioevu kuvuja ndani ya viini wakati wa kuzamishwa. Inapoondolewa kwenye uhifadhi na moto kwa joto la kawaida, nitrojeni hupanuka haraka. Kwa hivyo, vial inaweza kuvunjika wakati imeondolewa kutoka kwa uhifadhi wa nitrojeni kioevu, na kusababisha hatari kutoka kwa uchafu wa kuruka na mfiduo wa yaliyomo (1, 4).

Kwa sababu hizi, uhifadhi wa joto la chini ni kawaida katika nitrojeni ya awamu ya mvuke. Wakati sampuli lazima zihifadhiwe katika sehemu ya kioevu, neli maalum ya cryoflex inapaswa kutumika.

Upande wa chini kwa awamu ya mvuke ni kwamba gradient ya joto ya wima inaweza kutokea kusababisha kushuka kwa joto kati ya -135 ℃ na -190 ℃. Hii inahitajika ufuatiliaji wa uangalifu na bidii wa viwango vya nitrojeni kioevu na tofauti za joto (5).

Watengenezaji wengi wanapendekeza kwamba cryovials zinafaa kwa kuhifadhi hadi -135 ℃ au kwa matumizi katika awamu ya mvuke tu.

Kupunguza seli zako zilizohifadhiwa

Utaratibu wa kusumbua ni wa kusisitiza kwa tamaduni iliyohifadhiwa, na utunzaji sahihi na mbinu inahitajika ili kuhakikisha uwezekano mzuri, kupona, na utendaji wa seli. Itifaki halisi za kupunguka zitategemea aina maalum za seli. Walakini, uchungu wa haraka unachukuliwa kuwa wa kawaida kwa:

• Punguza athari yoyote kwa ahueni ya seli
• Saidia kupunguza wakati wa mfiduo kwa suluhisho zilizopo kwenye media ya kufungia
• Punguza uharibifu wowote kwa kuchakata tena barafu

Bafu za maji, bafu za bead, au vyombo maalum vya kiotomatiki hutumiwa kawaida kusampuli.

Mara kwa mara mstari wa seli 1 hupigwa kwa wakati kwa dakika 1-2, kwa kuteleza kwa upole katika umwagaji wa maji 37 hadi kuna barafu kidogo tu iliyobaki kwenye vial kabla ya kuoshwa kwa njia ya ukuaji wa mapema.

Kwa seli zingine kama vile embryos ya mamalia, joto polepole ni muhimu kwa kuishi kwao.

Seli sasa ziko tayari kwa tamaduni ya seli, kutengwa kwa seli, au kwa upande wa seli za shina za haematopoietic - masomo ya uwezekano wa kuhakikisha uadilifu wa seli za shina za wafadhili kabla ya tiba ya myeloablative.

Ni mazoezi ya kawaida kuchukua viunga vidogo vya sampuli iliyotumiwa iliyotumiwa kufanya hesabu ya seli kuamua viwango vya seli kwa upangaji katika utamaduni. Kisha unaweza kutathmini matokeo ya taratibu za kutengwa kwa seli na kuamua uwezekano wa seli.

Mazoea bora ya uhifadhi wa cryovials

Kufanikiwa kwa sampuli zilizohifadhiwa kwenye cryovials inategemea vitu vingi kwenye itifaki ikiwa ni pamoja na uhifadhi sahihi na utunzaji wa rekodi.

• Gawanya seli kati ya maeneo ya kuhifadhi- Ikiwa kiasi kinaruhusu, kugawanya seli kati ya viini na kuzihifadhi katika maeneo tofauti ili kupunguza hatari ya upotezaji wa sampuli kutokana na kushindwa kwa vifaa.
• Kuzuia uchafuzi wa msalaba-Chagua viini vya matumizi ya moja kwa moja ya cryogenic au autoclave kabla ya matumizi ya baadaye
• Tumia viini vya ukubwa wa seli zako- Vials huja katika anuwai ya viwango kati ya 1 na 5mls. Epuka kuzidisha mizani ili kupunguza hatari ya kupasuka.
• Chagua viini vya ndani au vya nje vya nyuzi za cryogenic- Viunga vya ndani vilivyopendekezwa hupendekezwa na vyuo vikuu kadhaa kwa hatua za usalama - zinaweza pia kuzuia uchafu wakati wa kujaza au wakati umehifadhiwa kwenye nitrojeni ya kioevu.
• Kuzuia kuvuja-Tumia mihuri iliyoingizwa bi iliyoundwa ndani ya screw-cap au pete za O kuzuia kuvuja na uchafu.
• Tumia barcode za 2D na viini vya lebo- Ili kuhakikisha kuwa ufuatiliaji, viini vilivyo na maeneo makubwa ya uandishi huwezesha kila vial kuwa na alama ya kutosha. Barcode za 2D zinaweza kusaidia na usimamizi wa uhifadhi na utunzaji wa rekodi. Kofia zilizo na alama za rangi ni muhimu kwa kitambulisho rahisi.
• Matengenezo ya kutosha ya kuhifadhi- Ili kuhakikisha kuwa seli hazipotea, vyombo vya kuhifadhia vinapaswa kufuatilia viwango vya joto na kioevu cha nitrojeni. Kengele zinapaswa kutoshea watumiaji wa tahadhari.

Tahadhari za usalama

Nitrojeni ya kioevu imekuwa mazoea ya kawaida katika utafiti wa kisasa lakini hubeba hatari ya kuumia vibaya ikiwa inatumiwa vibaya.

Vifaa vya kinga vya kibinafsi (PPE) vinapaswa kuvikwa ili kupunguza hatari ya baridi kali, kuchoma na matukio mengine mabaya wakati wa kushughulikia nitrojeni kioevu. Vaa

• Glavu za cryogenic
• Kanzu ya maabara
• Athari sugu ya uso kamili ambayo pia inashughulikia shingo
• Viatu vilivyofungwa
• Splashproof plastiki apron

Jokofu za nitrojeni za kioevu zinapaswa kuwekwa katika maeneo yenye hewa nzuri ili kupunguza hatari ya kupandikiza-nitrojeni iliyotoroka na kuhamisha oksijeni ya anga. Duka kubwa za kiasi zinapaswa kuwa na mifumo ya chini ya kengele ya oksijeni.

Kufanya kazi kwa jozi wakati wa kushughulikia nitrojeni kioevu ni bora na matumizi yake nje ya masaa ya kawaida ya kufanya kazi yanapaswa kupigwa marufuku.

Cryovials kusaidia mtiririko wako

Kampuni ya Suzhou Ace Biomedical inatoa uteuzi mpana wa bidhaa zinazokidhi mahitaji yako ya uhifadhi wa aina tofauti za seli. Kwingineko ni pamoja na anuwai ya tubesas na anuwai ya cryovials.

Cryovials zetu ni:

• Maabara screw cap 0.5ml 1.5ml 2.0ml cryovial cryogenic viini conical chini cryotube na gasket

  ● 0.5ml, 1.5ml, 2.0ml vipimo, na sketi au bila sketi
  ● Ubunifu wa kibinafsi au wa kibinafsi, kuzaa au kuzaa zote zinapatikana
  ● Mizizi ya kofia ya screw imetengenezwa na polypropylene ya kiwango cha matibabu
  ● Viini vya Cryotube vya PP vinaweza kugandishwa mara kwa mara na kupunguzwa
  ● Ubunifu wa nje wa cap unaweza kupunguza uwezekano wa uchafu wakati wa matibabu ya sampuli.
  ● screw cap cap cryogenic threads universal screw nyuzi kwa matumizi
  ● Mizizi inafaa rotors za kawaida
  ● Tube za cryogenic o-pete zilizopo sawa 1-inch na 2-inch, 48well, 81well, 96well na masanduku ya kufungia 100well
  ● Inaweza kusongeshwa hadi 121 ° C na kufungia hadi -86 ° C.

  Sehemu hapana	Nyenzo	Kiasi	CapRangi	Pcs/Begi	Mifuko/kesi
  ACT05-BL-N	PP	0.5ml	Nyeusi, manjano, bluu, nyekundu, zambarau, nyeupe	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ml	Nyeusi, manjano, bluu, nyekundu, zambarau, nyeupe	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ml	Nyeusi, manjano, bluu, nyekundu, zambarau, nyeupe	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ml	Nyeusi, manjano, bluu, nyekundu, zambarau, nyeupe	500	10