Cryovialskwa kawaida hutumika kwa ajili ya uhifadhi cryogenic wa mistari ya seli na nyenzo nyingine muhimu za kibayolojia, katika dewars kujazwa na nitrojeni kioevu.

Kuna hatua kadhaa zinazohusika katika kuhifadhi mafanikio ya seli katika nitrojeni kioevu. Ingawa kanuni ya msingi ni kugandisha polepole, mbinu kamili inayotumika inategemea aina ya seli na kinga-kinga inayotumika. Kuna masuala kadhaa ya usalama na mbinu bora za kuzingatia wakati wa kuhifadhi seli katika halijoto ya chini kama hiyo.

Chapisho hili linalenga kutoa muhtasari wa jinsi cryovials huhifadhiwa katika nitrojeni kioevu.

Cryovials ni nini

Cryovials ni bakuli ndogo, zilizofungwa zilizoundwa kwa ajili ya kuhifadhi sampuli za kioevu kwenye joto la chini sana. Zinahakikisha kwamba seli zilizohifadhiwa katika cryoprotectant hazigusani moja kwa moja na nitrojeni kioevu, hivyo kupunguza hatari ya kuvunjika kwa seli huku zikiendelea kufaidika na athari ya kupoeza sana ya nitrojeni kioevu.

Vipu kwa kawaida vinapatikana katika anuwai ya ujazo na miundo - vinaweza kuunganishwa ndani au nje na chini ya gorofa au mviringo. Miundo tasa na isiyo tasa zinapatikana pia.

Nani AnatumiaCyrovalsKuhifadhi Seli katika Nitrojeni Kioevu

Aina mbalimbali za NHS na maabara za kibinafsi, pamoja na taasisi za utafiti zinazobobea katika benki ya damu ya kamba, biolojia ya seli za epithelial, elimu ya kinga na biolojia ya seli shina hutumia cryovials kuhifadhi seli.

Seli zilizohifadhiwa kwa njia hii ni pamoja na Seli B na T, Seli CHO, Shina la Hematopoietic na Seli za Progenitor, Hybridomas, Seli za Utumbo, Macrophages, Shina la Mesenchymal na Seli za Progenitor, Monocytes, Myeloma, Seli za NK na Seli za Shina za Pluripotent.

Muhtasari wa Jinsi ya Kuhifadhi Cryovials katika Nitrojeni ya Kioevu

Cryopreservation ni mchakato ambao huhifadhi seli na miundo mingine ya kibayolojia kwa kuzipunguza kwa joto la chini sana. Seli zinaweza kuhifadhiwa katika nitrojeni kioevu kwa miaka bila kupoteza uwezo wa seli. Huu ni muhtasari wa taratibu zilizotumika.

Maandalizi ya seli

Njia halisi ya kuandaa sampuli itatofautiana kulingana na aina ya seli, lakini kwa ujumla, seli hukusanywa na kuwekwa katikati ili kuunda pellet yenye seli nyingi. Pellet hii basi hurejeshwa kwenye supernatant iliyochanganywa na cryoprotectant au kati ya cryopreservation.

Cryopreservation Kati

Njia hii inatumika kuhifadhi seli katika mazingira ya halijoto ya chini zitakazoathiriwa kwa kuzuia uundaji wa fuwele za ndani na nje ya seli na hivyo kufa kwa seli. Jukumu lao ni kutoa mazingira salama, ya ulinzi kwa seli na tishu wakati wa mchakato wa kufungia, kuhifadhi na kuyeyusha.

Miyeyusho kama vile plasma mpya iliyogandishwa (FFP), myeyusho wa plasmalyte iliyo na heparini au isiyo na seramu, miyeyusho isiyo na sehemu ya wanyama huchanganywa na kingamwili kama vile dimethyl sulphoxide (DMSO) au glycerol.

Sampuli ya sampuli iliyoyeyushwa tena imetolewa kwenye kriyovili za polipropen kama vileKampuni ya Suzhou Ace Biomedical Vibali vya Uhifadhi vya Cryogenic.

Ni muhimu kutojaza zaidi cryovials kwani hii itaongeza hatari ya kupasuka na uwezekano wa kutolewa kwa yaliyomo (1).

Kiwango cha Kugandisha Kinachodhibitiwa

Kwa ujumla, kiwango cha kufungia kinachodhibitiwa polepole kinatumika kwa uhifadhi mzuri wa seli.

Baada ya sampuli kuingizwa kwenye bakuli za cryogenic, huwekwa kwenye barafu yenye unyevunyevu au kwenye jokofu la 4℃ na utaratibu wa kugandisha huanza ndani ya dakika 5. Kama mwongozo wa jumla, seli hupozwa kwa kiwango cha -1 hadi -3 kwa dakika (2). Hili hufikiwa kwa kutumia kipozezi kinachoweza kupangwa au kwa kuweka viala kwenye kisanduku cha maboksi kilichowekwa kwenye freezer ya kiwango kinachodhibitiwa cha -70°C hadi -90°C.

Uhamishe kwa Nitrojeni ya Kioevu

Vipu vya cryogenic vilivyogandishwa huhamishiwa kwenye tanki ya nitrojeni kioevu kwa muda usiojulikana mradi halijoto ya chini ya -135℃ inadumishwa.

Viwango hivi vya chini vya joto vinaweza kupatikana kwa kuzamishwa kwenye nitrojeni ya kioevu au ya mvuke.

Kioevu au Awamu ya Mvuke?

Uhifadhi katika awamu ya nitrojeni ya kioevu inajulikana kudumisha joto la baridi na uthabiti kabisa, lakini mara nyingi haipendekezi kwa sababu zifuatazo:

• Haja ya kiasi kikubwa (kina) cha nitrojeni kioevu ambayo ni hatari inayoweza kutokea. Kuungua au kukosa hewa kutokana na hii ni hatari halisi.
• Kesi zilizorekodiwa za uchafuzi wa mtambuka na viini vya kuambukiza kama vile aspergillus, hep B na kuenea kwa virusi kupitia njia ya kioevu ya nitrojeni (2,3)
• Uwezo wa nitrojeni kioevu kuvuja ndani ya bakuli wakati wa kuzamishwa. Inapoondolewa kwenye hifadhi na kupashwa joto hadi joto la kawaida, nitrojeni hupanuka haraka. Kwa hivyo, bakuli inaweza kupasuka ikiondolewa kutoka kwa hifadhi ya nitrojeni kioevu, na kusababisha hatari kutoka kwa uchafu unaoruka na kufichuliwa kwa yaliyomo (1, 4).

Kwa sababu hizi, uhifadhi wa halijoto ya chini sana huwa katika nitrojeni ya awamu ya mvuke. Wakati sampuli lazima zihifadhiwe katika awamu ya kioevu, neli maalum ya cryoflex inapaswa kutumika.

Upande mbaya wa awamu ya mvuke ni kwamba kipenyo cha wima cha joto kinaweza kutokea na kusababisha mabadiliko ya halijoto kati ya -135℃ na -190℃. Hii inahitaji ufuatiliaji makini na wa bidii wa viwango vya nitrojeni kioevu na tofauti za joto (5).

Watengenezaji wengi wanapendekeza kwamba nyuki zinafaa kuhifadhiwa hadi -135℃ au kwa matumizi katika awamu ya mvuke pekee.

Kuyeyusha Seli Zako Zilizohifadhiwa

Utaratibu wa kuyeyusha ni mfadhaiko kwa utamaduni uliogandishwa, na utunzaji na mbinu ifaayo inahitajika ili kuhakikisha uwezekano, urejeshaji na utendakazi bora wa seli. Itifaki halisi za kuyeyusha zitategemea aina maalum za seli. Walakini, kuyeyusha haraka kunachukuliwa kuwa kiwango cha:

• Punguza athari yoyote kwenye urejeshaji wa seli
• Saidia kupunguza muda wa mfiduo kwa vimumunyisho vilivyopo kwenye midia ya kuganda
• Punguza uharibifu wowote kwa kufanya fuwele za barafu

Bafu za maji, bafu za shanga, au vyombo maalum vya kiotomatiki hutumiwa kuyeyusha sampuli.

Mara nyingi, laini 1 ya seli huyeyushwa kwa wakati mmoja kwa dakika 1-2, kwa kuzungusha kwa upole katika umwagaji wa maji wa 37℃ hadi iwe na barafu kidogo tu iliyobaki kwenye bakuli kabla ya kuoshwa kwa njia ya ukuaji iliyowashwa kabla.

Kwa seli zingine kama vile viinitete vya mamalia, ongezeko la joto polepole ni muhimu kwa maisha yao.

Seli hizo sasa ziko tayari kwa utamaduni wa seli, kutengwa kwa seli, au katika kesi ya seli shina za hematopoietic - tafiti za uwezekano ili kuhakikisha uadilifu wa seli shina wafadhili kabla ya matibabu ya myeloblative.

Ni mazoezi ya kawaida kuchukua aliquots ndogo za sampuli iliyosafishwa kabla ya kutumika kuhesabu hesabu ya seli ili kubainisha viwango vya seli kwa ajili ya kutandazwa katika utamaduni. Kisha unaweza kutathmini matokeo ya taratibu za kutengwa kwa seli na kuamua uwezekano wa seli.

Mbinu Bora za Uhifadhi wa Cryovials

Uhifadhi wa mafanikio wa sampuli zilizohifadhiwa kwenye cryovials hutegemea vipengele vingi katika itifaki ikiwa ni pamoja na uhifadhi sahihi na utunzaji wa kumbukumbu.

• Gawanya seli kati ya maeneo ya kuhifadhi- Ikiwa ujazo unaruhusu, gawanya seli kati ya bakuli na uzihifadhi katika maeneo tofauti ili kupunguza hatari ya upotezaji wa sampuli kutokana na hitilafu za vifaa.
• Zuia uchafuzi wa mtambuka- Chagua kwa matumizi ya mara moja bakuli za cryogenic au autoclave kabla ya matumizi ya baadaye
• Tumia bakuli za ukubwa unaofaa kwa seli zako- bakuli huja katika ujazo wa anuwai kati ya 1 na 5mls. Epuka kujaza bakuli kupita kiasi ili kupunguza hatari ya kupasuka.
• Chagua bakuli za cryogenic za ndani au nje– Vibakuli vyenye nyuzi ndani vinapendekezwa na baadhi ya vyuo vikuu kwa hatua za usalama – vinaweza pia kuzuia uchafuzi wakati wa kujazwa au kuhifadhiwa kwenye nitrojeni kioevu.
• Zuia Kuvuja- Tumia mihuri iliyodungwa mara mbili iliyofinyangwa kwenye kofia ya skrubu au pete za O ili kuzuia kuvuja na kuchafua.
• Tumia misimbopau ya 2D na weka bakuli lebo- ili kuhakikisha ufuatiliaji, bakuli zilizo na sehemu kubwa za kuandikia huwezesha kila bakuli kuwa na lebo ya kutosha. Misimbo pau ya 2D inaweza kusaidia katika usimamizi wa hifadhi na uhifadhi wa kumbukumbu. Kofia zenye msimbo wa rangi ni muhimu kwa utambulisho rahisi.
• Matengenezo ya kutosha ya kuhifadhi- Ili kuhakikisha seli hazipotei, vyombo vya kuhifadhi vinapaswa kufuatilia daima joto na viwango vya nitrojeni kioevu. Kengele zinapaswa kuwekwa ili kuwatahadharisha watumiaji kuhusu hitilafu.

Tahadhari za Usalama

Nitrojeni ya kioevu imekuwa mazoezi ya kawaida katika utafiti wa kisasa lakini ina hatari ya majeraha makubwa ikiwa itatumiwa vibaya.

Vifaa sahihi vya kinga ya kibinafsi (PPE) vinapaswa kuvaliwa ili kupunguza hatari ya baridi, kuchoma na matukio mengine mabaya wakati wa kushughulikia nitrojeni kioevu. Vaa

• Kinga za cryogenic
• Kanzu ya maabara
• Ngao kamili ya uso inayostahimili athari ambayo pia hufunika shingo
• Viatu vilivyofungwa
• Apron ya plastiki isiyo na maji

Jokofu za nitrojeni kioevu zinapaswa kuwekwa katika maeneo yenye uingizaji hewa mzuri ili kupunguza hatari ya kukosa hewa - nitrojeni iliyotoroka huyeyuka na kuhamisha oksijeni ya anga. Maduka ya kiasi kikubwa yanapaswa kuwa na mifumo ya kengele ya oksijeni ya chini.

Kufanya kazi kwa jozi wakati wa kushughulikia nitrojeni kioevu ni bora na matumizi yake nje ya saa za kawaida za kazi inapaswa kupigwa marufuku.

Cryovials Kusaidia Mtiririko wako wa Kazi

Kampuni ya Suzhou Ace Biomedical inatoa uteuzi mpana wa bidhaa zinazokidhi mahitaji yako ya uhifadhi kwa aina tofauti za seli. Kwingineko ni pamoja na anuwai ya mirija na anuwai ya cryovial tasa.

Cryovials zetu ni:

• Kifuniko cha Lab Screw 0.5mL 1.5mL 2.0mL Vikombe vya Cryogenic Cryogenic Conical Bottom Cryotube na Gasket

  ● vipimo vya 0.5ml, 1.5ml, 2.0ml, na sketi au bila sketi
  ● Muundo wa umbo mnene au unaojisimamia, tasa au usio tasa zote zinapatikana
  ● Mirija ya vifuniko vya screw imetengenezwa kwa polypropen ya daraja la matibabu
  ● Vikombe vya PP Cryotube vinaweza kugandishwa na kuyeyushwa mara kwa mara
  ●Muundo wa kikomo wa nje unaweza kupunguza uwezekano wa uchafuzi wakati wa matibabu ya sampuli.
  ● Vipuli vya mirija ya cryogenic. Nyuzi za skrubu za Universal za matumizi
  ● Mirija inafaa rota za kawaida
  ● Mirija ya Cryogenic tube o-ring inafaa kwa inchi 1 na inchi 2, 48well, 81well,96well na 100well visanduku vya kufungia.
  ● Huweka kiotomatiki hadi 121°C na inaweza kuganda hadi -86°C

  SEHEMU NO	NYENZO	JUZUU	CAPRANGI	PCS/MFUKO	MIFUKO/KESI
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	Nyeusi, Njano, Bluu, Nyekundu, Zambarau, Nyeupe	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	Nyeusi, Njano, Bluu, Nyekundu, Zambarau, Nyeupe	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	Nyeusi, Njano, Bluu, Nyekundu, Zambarau, Nyeupe	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Nyeusi, Njano, Bluu, Nyekundu, Zambarau, Nyeupe	500	10