Introduktion
PCR-plattor, en stapelvara i laboratoriet i många år, blir ännu mer utbredd i den moderna miljön när laboratorier skalar upp sin genomströmning och i allt högre grad använder sig av automatisering i sina arbetsflöden. Att uppnå dessa mål samtidigt som experimentens noggrannhet och integritet bevaras kan vara svårt. Ett av de vanliga områdena där fel kan smyga sig på är med tätning avPCR-plattor, med dålig teknik som tillåter avdunstning av prover, förändrar pH och därför stör enzymatiska funktioner och inbjuder till kontaminering. Att lära sig att täta enPCR-plattaeliminerar dessa risker korrekt och säkerställer reproducerbara resultat.
Hitta rätt tätning för din PCR-platta
Plåtlock vs. filmtätningar vs. lock
Kepsarär ett bra sätt att försegla din tallrik med en tät försegling, samtidigt som du fortfarande ger dig flexibiliteten att mycket enkelt lossa och återförsluta plåten som du behöver utan slöseri. Men kepsar har ett par viktiga nackdelar.
För det första måste du köpa den specifika kepsen som är kompatibel, vilket gör dem inte mångsidiga. Du måste se till att locket du väljer passar plattan, vilket är beroende av dess tillverkare, och välja antingen kupolformad eller platt baserat på termocyklern du använder.
För det andra kan det vara mycket repetitivt och tråkigt att applicera locken på plattan, med risk för korskontaminering om du sätter fel lock på fel brunn.
Även om filmtätningar är mindre flexibla när det gäller att ta bort och byta ut, är de mycket mångsidiga eftersom de passar alla typer av PCR-plattor, utan hänsyn till vem tillverkaren är. De kan helt enkelt skäras till, vilket gör dem mycket effektiva.
Ett annat alternativ är ett plåtlock. Dessa ger mindre skydd än kapsyler och tätningar, och används huvudsakligen endast för kortvarig täckning för att förhindra kontaminering.
Optiska vs. foliefilmstätningar
Oavsett om du behöver en optisk, klar tätning eller enaluminiumfoliefilmatt försegla din tallrik bestäms av ditt experimentella format.Optiska tätningsfilmerär genomskinliga så att du kan observera prover, samtidigt som de skyddar dem och förhindrar avdunstning. De är också särskilt användbara i qPCR-experiment som innebär att man gör mycket exakta mätningar av fluorescens direkt från plattan, i vilket fall du behöver en tätningsfilm som filtrerar bort så lite fluorescens som möjligt. Det är viktigt att se till att tätningen eller locket du använder har en tillräckligt hög nivå av optisk klarhet för att säkerställa att avläsningarna är korrekta.
Foliefilmer är lämpliga för alla prover som är ljuskänsliga eller som ska förvaras under 80°C. Av denna anledning kommer de flesta prover avsedda för långtidslagring att kräva en foliefilm. Foliefilmer är också genomträngbara, vilket är användbart för att antingen undersöka enskilda brunnar eller för överföring av prover med nålar. Detta kan ske manuellt eller som en del av en robotplattform.
Tänk också på att aggressiva ämnen som innehåller syror, baser eller lösningsmedel kommer att kräva en tätning som tål dem, i vilket fall en folieförsegling sannolikt är lämpligare.
Självhäftande vs. värmeförseglingsfilm
Självhäftande filmtätningarär mycket enkla och lätta att applicera. Allt du behöver är att en användare applicerar förseglingen på plattan och använder ett enkelt applikatorverktyg för att trycka ner och bilda en tät försegling.
Värmeförseglingarna är mer avancerade och ger en längre hållbarhet som har minskat avdunstningshastigheten jämfört med en konventionell limförsegling. Det här alternativet är lämpligt om du vill lagra prover på lång sikt, även om detta kommer med ett ytterligare krav på plattförseglingsutrustning.
Hur man förseglar en PCR-platta
Plattförseglingsmetod
Självhäftande
1. Se till att du arbetar på en plan och stabil arbetsyta
2. Ta bort filmen ur förpackningen och ta bort baksidan
3. Placera försiktigt förseglingen på plattan, samtidigt som du ser till att alla brunnar är täckta
4. Använd ett applikatorverktyg för att applicera tryck över plattan. Börja från ena änden och arbeta dig över till den andra, tryck jämnt
5. Upprepa detta flera gånger
6. Kör applikatorn runt de yttre brunnarna för att se till att dessa också är ordentligt förseglade.
Värmeförseglingar
Värmeförslutningar fungerar genom att filmen smälter till kanten av varje brunn, med hjälp av en plattförseglare. För att använda en värmeförseglare, se instruktionerna från tillverkaren av utrustningen. Se till att tillverkaren du köper din utrustning från är ansedd, eftersom det är mycket viktigt att tätningen är korrekt, effektiv och vattentät.
Plåttätning Toppspetsar
a. När du trycker på tätningen, gå i både horisontell och vertikal riktning för att säkerställa en ordentlig tätning
b. Det är alltid bra att köra en testkörning av vad du än gör, och detta är inte annorlunda med plåttätning. Testa med en tom platta innan du använder en med prover.
c. När du testar, ta av tätningen och se efter att limmet fastnat ordentligt, utan mellanrum. Det finns en visuell representation av detta i det första referensdokumentet. Om du inte har tätat plattan ordentligt, när du tar bort tätningen kommer det att finnas luckor där limmet inte har fäst sig helt till plattan.
d. För frakt och transport av prover kan det vara bra att applicera en plastförsegling ovanpå folieförseglingen för extra skydd (särskilt från piercing).
e. Se alltid till att det inte finns några stötar eller rynkor när du applicerar filmen - dessa kommer att orsaka läckor och avdunstning
Posttid: 2022-nov-23