Pikeun réaksi amplifikasi anu suksés, komponén réaksi individu kedah aya dina konsentrasi anu leres dina unggal persiapan. Sajaba ti éta, penting yén euweuh kontaminasi lumangsung.
Utamana lamun loba réaksi kudu diatur-up, éta geus ngadegkeun keur nyiapkeun nu disebut master mix tinimbang pipetting unggal réagen misah kana unggal wadah. Campuran anu tos dikonpigurasi sayogi sacara komersil, dimana ngan ukur komponén khusus sampel (primer) sareng cai anu ditambahkeun. Alternatipna, campuran master tiasa disiapkeun ku anjeun nyalira. Dina duanana varian, campuran disebarkeun ka unggal wadah PCR tanpa citakan jeung sampel DNA individu ditambahkeun misah dina tungtungna.
Ngagunakeun campuran master boga sababaraha kaunggulan: Kahiji, jumlah léngkah pipetting tunggal diréduksi. Ku cara kieu, duanana résiko kasalahan pangguna nalika pipetting sareng résiko kontaminasi diminimalkeun sareng, tangtosna, waktos disimpen. Sacara prinsip, akurasi pipetting ogé leuwih luhur, saprak volume badag anu dosed. Ieu gampang kahartos nalika mariksa data téknis pipettes: The leutik volume dosed, nu leuwih luhur simpangan bisa jadi . Kanyataan yén sadaya olahan asalna tina wadah anu sami gaduh pangaruh positif kana homogénitas (upami dicampur ogé). Ieu ogé ngaronjatkeun reproducibility tina percobaan.
Nalika Nyiapkeun campuran master, sahenteuna 10% volume tambahan kudu ditambahkeun (misalna lamun 10 persiapan diperlukeun, ngitung dina dasar 11), ku kituna sanajan wadah panungtungan dieusian leres. Ku cara kieu, (saeutik) teu akurat pipetting, sarta pangaruh leungitna sampel nalika dosis solusi deterjen-ngandung bisa diimbuhan. Detergents dikandung dina leyuran énzim kayaning polymerases jeung master mixes, ngabalukarkeun formasi busa jeung résidu dina beungeut batin normal.tip pipet.
Gumantung kana aplikasi sareng jinis cairan anu dikaluarkeun, téknik pipetting anu leres (1) kedah dipilih sareng alat anu pas dipilih. Pikeun solusi anu ngandung detergents, dianjurkeun sistem kapindahan langsung atawa nu disebut "low retention" tip pipette salaku alternatif pikeun pipettes hawa-cushion. Pangaruh tinaACE PIPETTE tipdumasar kana permukaan utamana hidrofobik. Cairan nu ngandung detergents ulah ninggalkeun pilem résidu dina jero jeung luar, ku kituna leungitna solusi bisa minimal.
Di sagigireun dosis pasti sadaya komponén, penting ogé yén henteu aya kontaminasi tina persiapan. Teu cukup ngagunakeun consumables of purity tinggi, sabab prosés pipetting dina pipette cushion hawa bisa ngahasilkeun aerosol nu tetep dina pipette nu. DNA nu mungkin dikandung dina aerosol nu bisa ditransfer ti hiji sampel ka hareup dina hambalan pipetting handap sahingga ngakibatkeun kontaminasi. Sistem pamindahan langsung anu disebatkeun di luhur ogé tiasa ngaminimalkeun résiko ieu. Pikeun pipet bantalan hawa, masuk akal ngagunakeun tip saringan pikeun ngajagi congcot pipet ku cara nahan cipratan, aerosol, sareng biomolekul.
waktos pos: Dec-06-2022