Cryovialilaharna dipaké pikeun neundeun cryogenic garis sél jeung bahan biologis kritis lianna, dina dewar ngeusi nitrogén cair.

Aya sababaraha tahap aub dina suksés pelestarian sél dina nitrogén cair. Sanaos prinsip dasarna nyaéta beku lambat, téknik pasti anu dianggo gumantung kana jinis sél sareng cryoprotectant anu dianggo. Aya sababaraha pertimbangan kaamanan sareng prakték pangsaéna anu kedah diperhatoskeun nalika nyimpen sél dina suhu anu handap.

Tulisan ieu boga tujuan pikeun masihan tinjauan kumaha cryovial disimpen dina nitrogén cair.

Naon Cryovials

Cryovials mangrupakeun vials leutik, capped dirancang pikeun nyimpen sampel cair dina suhu pisan low. Aranjeunna mastikeun yén sél dilestarikan dina cryoprotectant teu datang kana kontak langsung jeung nitrogén cair, ngaminimalkeun résiko fractures sélular bari tetep benefiting ti éfék cooling ekstrim nitrogén cair.

The vials biasana sadia dina sauntuyan volume sarta desain - aranjeunna tiasa internal atanapi externally threaded kalawan handap datar atawa rounded. Format steril sareng non-steril ogé sayogi.

Anu NgagunakeunCyrovialspikeun Nyimpen Sél dina Nitrogén Cair

Sauntuyan NHS sareng laboratorium swasta, kitu ogé lembaga panalungtikan anu khusus dina perbankan getih tali, biologi sél épitél, imunologi sareng biologi sél stém nganggo cryovials pikeun cryopreserve sél.

Sél anu dilestarikan ku cara ieu kalebet Sél B sareng T, Sél CHO, Batang Hematopoietik sareng Sél Progenitor, Hibridomas, Sél Usus, Makrofag, Sél Batang Mesenkim sareng Sél Progenitor, Monosit, Myeloma, Sél NK sareng Sél Batang Pluripotent.

Tinjauan Kumaha Nyimpen Cryovials dina Nitrogén Cair

Cryopreservation mangrupikeun prosés anu ngawétkeun sél sareng konstruk biologis sanés ku cara niiskeun kana suhu anu handap pisan. Sél bisa disimpen dina nitrogén cair mangtaun-taun tanpa kaleungitan viability sél. Ieu mangrupikeun outline tina prosedur anu dianggo.

Nyiapkeun sél

Metodeu pasti pikeun Nyiapkeun sampel bakal rupa-rupa gumantung kana jenis sél, tapi sacara umum, sél dikumpulkeun sarta centrifuged pikeun ngembangkeun pellet-euyeub sél. Pelet ieu teras digantungkeun deui dina supernatan anu dicampur sareng cryoprotectant atanapi medium cryopreservation.

Cryopreservation Medium

Médium ieu dianggo pikeun ngawétkeun sél-sél dina lingkungan suhu-rendah anu bakal ditimbulkeun ku cara ngahambat pembentukan kristal intrasélular sareng ekstrasélular sareng ku kituna maot sél. Peranna nyaéta nyayogikeun lingkungan anu aman, pelindung pikeun sél sareng jaringan salami prosés katirisan, neundeun, sareng pencairan.

Médium sapertos plasma beku seger (FFP), larutan plasmalyte heparinised atanapi bebas sérum, solusi bébas komponén sato dicampur sareng cryoprotectants sapertos dimétil sulfoksida (DMSO) atanapi gliserol.

The re-liquified sample pellet ieu aliquoted kana cryovials polipropilén kayaningPerusahaan Biomédis Suzhou Ace Cryogenic Storage Vials.

Kadé teu overfill cryovials sakumaha ieu bakal nambahan résiko cracking sarta mungkin ngaleupaskeun eusi (1).

Laju beku dikawasa

Sacara umum, laju beku anu dikontrol laun dianggo pikeun kriopreservasi sél anu suksés.

Saatos sampel diasupkeun kana vials cryogenic, aranjeunna disimpen dina és baseuh atawa dina kulkas 4 ℃ jeung prosedur katirisan dimimitian dina 5 menit. Salaku pituduh umum, sél anu leuwih tiis dina laju -1 nepi ka -3 per menit (2). Hal ieu dihontal ngagunakeun cooler programmable atanapi ku cara nempatkeun vials dina kotak insulated disimpen dina -70 ° C nepi ka -90 ° C freezer laju dikawasa.

Mindahkeun ka Nitrogén Cair

Vials cryogenic beku lajeng dialihkeun ka tanki nitrogén cair pikeun période teu katangtu disadiakeun suhu kirang ti -135 ℃ dijaga.

Suhu ultra-rendah ieu tiasa didapet ku immersion dina nitrogén fase cair atanapi uap.

Fase Cairan atanapi Uap?

Panyimpenan dina nitrogén fase cair dipikanyaho ngajaga suhu tiis kalayan konsistensi mutlak, tapi sering henteu disarankeun pikeun alesan ieu:

• Kabutuhan pikeun volume ageung (jero) nitrogén cair anu tiasa bahaya. Kaduruk atanapi sesak napas kusabab ieu mangrupikeun résiko nyata.
• Kasus kontaminasi silang anu didokumentasikeun ku agén tepa sapertos aspergillus, hép B sareng panyebaran virus ngalangkungan medium nitrogén cair (2,3)
• Potensi nitrogén cair bocor kana vials nalika immersion. Nalika dikaluarkeun tina panyimpenan sareng dipanaskeun kana suhu kamar, nitrogén gancang ngembang. Akibatna, vial bisa meupeuskeun lamun dikaluarkeun tina gudang nitrogén cair, nyieun bahya ti duanana lebu ngalayang sarta paparan ka eusina (1, 4).

Ku sabab kitu, panyimpen suhu ultra-rendah biasana dina nitrogén fase uap. Nalika sampel kedah disimpen dina fase cair, pipa cryoflex khusus kedah dianggo.

The downside kana fase uap nyaeta gradién hawa nangtung bisa lumangsung hasilna fluctuations hawa antara -135 ℃ jeung -190 ℃. Ieu peryogi ngawaskeun ati-ati sareng rajin tingkat nitrogén cair sareng variasi suhu (5).

Seueur pabrik nyarankeun yén cryovial cocog pikeun neundeun dugi ka -135 ℃ atanapi kanggo dianggo dina fase uap wungkul.

Ngalebur Sél Cryopreserved Anjeun

Prosedur thawing stres pikeun budaya beku, sarta penanganan ditangtoskeun jeung téhnik diperlukeun pikeun mastikeun viability optimal, recovery, sarta fungsionalitas sél. Protokol thawing pasti bakal gumantung kana jenis sél husus. Nanging, pencairan gancang dianggap standar pikeun:

• Turunkeun sagala dampak dina recovery sélular
• Ngabantosan ngirangan waktos paparan ka solute anu aya dina média beku
• Ngaleutikan karuksakan ku rekristalisasi és

Mandi cai, mandi manik, atanapi alat otomatis khusus biasana dianggo pikeun ngalembereh sampel.

Paling sering 1 garis sél ieu thawed dina hiji waktu pikeun 1-2 menit, ku gently swirling dina mandi cai 37 ℃ nepi ka aya ngan saeutik saeutik és ditinggalkeun dina vial saméméh maranéhanana dikumbah dina medium pertumbuhan prewarmed.

Pikeun sababaraha sél sapertos émbrio mamalia, pemanasan laun penting pisan pikeun kasalametanna.

Sél ayeuna siap pikeun kultur sél, isolasi sél, atanapi dina kasus sél stém hématopoietik - studi viability pikeun ngajamin integritas sél stém donor sateuacan terapi myeloablative.

Éta prakték normal nyandak aliquots leutik tina sampel prewashed dipaké pikeun ngalakukeun count sél nangtukeun konsentrasi sél pikeun plating dina budaya. Anjeun teras tiasa meunteun hasil prosedur isolasi sél sareng nangtukeun viability sél.

Praktek Pangalusna pikeun Panyimpenan Cryovials

Kasuksésan cryopreservation sampel disimpen dina cryovials gumantung kana loba elemen dina protokol kaasup gudang ditangtoskeun jeung neundeun catetan.

• Sél pamisah antara lokasi neundeun– Lamun volume ngidinan, pamisah sél antara vials jeung nyimpen eta di lokasi misah pikeun ngurangan résiko leungitna sampel alatan gagalna alat.
• Nyegah kontaminasi silang- Pilih vials kriogenik steril pamakean tunggal atanapi autoclave sateuacan dianggo salajengna
• Paké vials ukuran appropriately pikeun sél Anjeun- vials datangna dina rentang volume antara 1 jeung 5mls. Hindarkeun overfilling vials pikeun ngirangan résiko retakan.
• Pilih vials cryogenic internal atanapi externally threaded- vials threaded internal dianjurkeun ku sababaraha universitas pikeun ukuran kaamanan - aranjeunna ogé bisa nyegah kontaminasi salila ngeusian atawa lamun disimpen dina nitrogén cair.
• Nyegah Leakage- Paké anjing laut bi-nyuntik dijieun kana screw-cap atawa O-cingcin pikeun nyegah bocor na kontaminasi.
• Anggo barcode 2D sareng botol labél- pikeun mastikeun traceability, vials kalawan wewengkon nulis badag ngamungkinkeun unggal vial bisa dilabélan nyukupan. Barcode 2D tiasa ngabantosan manajemén panyimpenan sareng nyimpen catetan. Caps kode warna mangpaat pikeun idéntifikasi gampang.
• Pangropéa gudang nyukupan- Pikeun mastikeun sél henteu leungit, wadah panyimpen kedah terus-terusan ngawas suhu sareng tingkat nitrogén cair. Alarm kedah dipasang pikeun ngingetkeun pangguna ngeunaan kasalahan.

Precautions Kasalametan

Nitrogén cair geus jadi prakték umum dina panalungtikan modern tapi mawa résiko tatu serius lamun dipaké teu bener.

Alat pelindung pribadi (PPE) anu leres kedah dianggo pikeun ngaminimalkeun résiko frostbite, kaduruk sareng kajadian ngarugikeun anu sanés nalika nanganan nitrogén cair. Maké

• Sarung tangan cryogenic
• Jas laboratorium
• Tameng muka pinuh tahan dampak anu ogé nutupan beuheung
• Sapatu katutup
• apron plastik anti splashproof

Kulkas nitrogén cair kudu ditempatkeun di wewengkon well-ventilated pikeun ngaleutikan résiko sesak - nitrogén lolos vaporizes sarta displaces oksigén atmosfir. Toko volume ageung kedah gaduh sistem alarem oksigén anu rendah.

Gawé duaan nalika nanganan nitrogén cair idéal sareng panggunaanana di luar jam kerja normal kedah dilarang.

Cryovials pikeun Ngarojong Workflow Anjeun

Pausahaan Suzhou Ace Biomedical nawarkeun rupa-rupa pilihan produk nu minuhan kabutuhan cryopreservation anjeun pikeun tipena béda sél. Portofolio ngawengku sauntuyan tubesas ogé sauntuyan cryovial steril.

cryovials kami nyaéta:

• Tutup Screw Lab 0.5mL 1.5mL 2.0mL Cryovial Cryogenic Vials Conical Bottom Cryotube sareng Gasket

  ● 0.5ml, 1.5ml, spésifikasi 2.0ml, kalawan rok atawa tanpa rok
  ● Desain kerucut atawa timer ngadeg, steril atawa non-steril duanana aya
  ● tabung cap screw dijieunna tina polipropilén kelas médis
  ● PP Cryotube Vials bisa sababaraha kali beku sarta thawed
  ●The design cap éksternal bisa ngurangan kamungkinan kontaminasi salila perlakuan sampel.
  ● screw cap cryogenic tubes Universal screw threads pikeun pamakéan
  ● tabung cocog rotors paling umum
  ● Cryogenic tube o-ring tabung pas standar 1 inci sarta 2 inci, 48well, 81well，96well jeung 100well freezer buleud
  ● Autoclavable mun 121 ° C jeung freezable mun -86 ° C

  BAGIAN NO	BAHAN	VOLUME	CAPWARNA	PCS/TAS	TAS / KASUNG
  ACT05-BL-N	PP	0.5ML	Hideung, Konéng, Biru, Beureum, Ungu, Bodas	500	10
  ACT15-BL-N	PP	1.5ML	Hideung, Konéng, Biru, Beureum, Ungu, Bodas	500	10
  ACT15-BL-NW	PP	1.5ML	Hideung, Konéng, Biru, Beureum, Ungu, Bodas	500	10
  ACT20-BL-N	PP	2.0ML	Hideung, Konéng, Biru, Beureum, Ungu, Bodas	500	10