Standarisasi prosés ngawengku optimasi maranéhanana sarta ngadegkeun salajengna jeung harmonisasi, sahingga kinerja optimal jangka panjang - bebas tina pamaké. Standardisasi mastikeun hasil kualitas luhur, kitu ogé reproducibility na comparability maranéhanana.
Tujuan PCR (klasik) nyaéta ngahasilkeun hasil anu tiasa dipercaya sareng tiasa diulang. Pikeun aplikasi nu tangtu, hasil tinaproduk PCRogé relevan. Pikeun réaksi ieu, ati-ati kedah dilakukeun pikeun mastikeun yén conto henteu kompromi sareng yén alur kerja PCR tetep stabil. Sacara husus, ieu ditarjamahkeun kana ngaminimalkeun bubuka kontaminasi anu bisa ngakibatkeun hasil positif atawa palsu négatip atawa malah ngahambat réaksi PCR. Saterusna, kaayaan réaksi kudu jadi idéntik sabisa pikeun tiap sampel individu dina ngajalankeun sarta ogé bisa mindahkeun kana réaksi saterusna (tina metoda nu sarua). Ieu nujul kana komposisi réaksi kitu ogé kana jenis kontrol suhu dina cycler nu. Kasalahan pangguna, tangtosna, kedah dihindari sabisa-bisa.
Di handap ieu, urang bakal nunjukkeun tangtangan anu disanghareupan nalika persiapan sareng sapanjang jalanna PCR - sareng pendekatan kana solusi anu aya hubunganana sareng instrumen sareng bahan konsumsi anu dianggo pikeun standarisasi alur kerja PCR.
Persiapan réaksi
Dispensing komponén réaksi kana PCR-bejana, atawa pelat, masing-masing ngandung sababaraha tantangan nu kudu diatasi:
Kaayaan réaksi
Dosis anu tepat sareng tepat pikeun komponén individu penting pisan nalika narékahan pikeun kaayaan réaksi anu paling idéntik. Salian téhnik pipetting alus, milih alat katuhu mangrupa kritik. Campuran master PCR sering ngandung zat anu ningkatkeun viskositas atanapi ngahasilkeun busa. Salila prosés pipetting, ieu ngakibatkeun wetting badag tinatip pipet, sahingga ngurangan akurasi pipetting. Pamakéan sistem dispensing langsung atanapi tips pipette alternatif anu kirang rawan wetting bisa ngaronjatkeun akurasi sarta precision tina prosés pipetting.
Kontaminasi
Salila prosés dispensing, aerosol dihasilkeun anu, upami diidinan dugi ka jero pipette, tiasa berpotensi ngotorkeun conto sanés salami léngkah pipetting salajengna. Ieu bisa dicegah ku ngagunakeun tips filter atawa sistem kapindahan langsung.
Consumables kayaningtips, kapal sareng pelat anu dianggo dina alur kerja PCR henteu kedah ngandung zat anu ngaganggu sampel atanapi ngapalkeun hasilna. Ieu kalebet DNA, DNases, RNases sareng sambetan PCR, kitu ogé komponén anu berpotensi leach tina bahan nalika réaksi - zat anu katelah leachables.
Kasalahan pamaké
Langkung seueur conto anu diolah, langkung luhur résiko kasalahan. Ieu bisa kalayan gampang lumangsung sampel anu pipetted kana wadah salah atawa sumur salah. Résiko ieu tiasa dikirangan sacara signifikan ku cara nyirian sumur anu gampang ditingali. Ngaliwatan automation léngkah dispensing, "faktor manusa", ie, kasalahan jeung variasi nu patali pamaké, anu minimal, sahingga ngaronjatkeun reproducibility, utamana dina kasus volume réaksi leutik. Ieu merlukeun pelat stabilitas diménsi cukup keur padamelan di workstation a. Barcode napel nyadiakeun mesin-readability tambahan, nu simplifies tracking sampel sapanjang sakabéh prosés.
Programming tina thermocycler
Pemrograman hiji alat tiasa ngabuktikeun janten waktos-consuming ogé rawan kasalahan. Fitur siklus termal PCR anu béda-béda gawé bareng pikeun nyederhanakeun léngkah prosés ieu sareng, anu paling penting, ngajantenkeun aman:
Operasi anu gampang sareng pituduh pangguna anu saé mangrupikeun dasar pamrograman anu éfisién. Ngawangun yayasan ieu, administrasi pamaké nu ditangtayungan sandi bakal nyegah program sorangan tina dirobah ku pamaké séjén. Lamun sababaraha cyclers (ti tipe sarua) keur dipake, éta mangpaat lamun program bisa ditransfer langsung ti hiji alat ka sejen via USB atawa konektipitas. Parangkat lunak komputer ngamungkinkeun administrasi pusat sareng aman pikeun program, hak pangguna sareng dokumén dina komputer.
PCR ngajalankeun
Salila ngajalankeun, DNA ieu amplified dina wadah réaksi, dimana unggal sampel kudu subjected ka idéntik, kondisi réaksi konsisten. Aspék di handap ieu relevan pikeun prosés:
Kontrol suhu
Akurasi anu saé dina kontrol suhu sareng homogenitas blok cycler mangrupikeun dasar pikeun udar suhu sadaya sampel. Kualitas luhur elemen pemanasan sareng penyejukan (elemen peltier), ogé cara nyambungkeun ieu kana blok, mangrupikeun faktor anu mutuskeun anu bakal nangtukeun résiko panyimpangan suhu anu katelah "efek tepi".
Évaporasi
Konsentrasi komponén réaksi individu teu kedah robih salami réaksi kusabab évaporasi. Upami teu kitu, mungkin pisan saeutikproduk PCRbisa dihasilkeun, atawa euweuh pisan. Éta kituna krusial pikeun ngaleutikan évaporasi ku mastikeun hiji segel aman. Dina hal ieu, tutup dipanaskeun tina thermocycler jeung segel bejana gawé bareng dina leungeun. pilihan sealing béda sadia pikeunPiring PCR (link: artikel Sealing), whereby segel pangalusna kahontal ngaliwatan sealing panas. closures séjén ogé bisa jadi cocog, salami tekanan kontak tina tutup cycler bisa disaluyukeun jeung segel dipilih.
Standarisasi prosés dilaksanakeun pikeun ngajagaan hasil anu akurat sareng tiasa diulang dina jangka panjang. Ieu kalebet pangropéa rutin parangkat pikeun mastikeun yén éta salawasna dina kaayaan kerja anu saé. Sadaya bahan konsumsi kedah konsisten kualitas luhur di sadaya tempat anu diproduksi, sareng kasadiaan anu dipercaya kedah dijamin.
waktos pos: Nov-29-2022