Bubuka
Naon Ekstraksi Asam Nukléat?
Dina istilah pangbasajanna, ékstraksi asam nukléat nyaéta ngaleupaskeun RNA jeung/atawa DNA tina sampel jeung sagala kaleuwihan nu teu perlu. Prosés ékstraksi ngasingkeun asam nukléat tina sampel sarta ngahasilkeun aranjeunna dina bentuk eluate kentel, bébas tina diluents jeung rereged nu bisa mangaruhan sagala aplikasi hilir.
Aplikasi Ekstraksi Asam Nukléat
Asam nukléat anu dimurnikeun dianggo dina seueur aplikasi anu béda-béda, dina sababaraha industri anu béda. Podomoro panginten mangrupikeun daérah anu paling dianggo, kalayan RNA sareng DNA anu dimurnikeun dipikabutuh pikeun sababaraha tujuan tés anu béda.
Aplikasi ékstraksi asam nukléat dina kasehatan ngawengku:
- Urutan Generasi Salajengna (NGS)
- Genotyping SNP basis amplifikasi
- Genotyping dumasar Array
- Pangwatesan Énzim Pencernaan
- Nganalisis ngagunakeun Énzim Modifikasi (contona Ligation sareng Kloning)
Aya ogé widang sanés di luar kasehatan dimana ékstraksi asam nukléat dianggo, kalebet tapi henteu dugi ka tés kabapakan, forensik sareng génomics.
Sajarah Singkat Ekstraksi Asam Nukléat
ékstraksi DNAtanggal balik jauh, jeung isolasi munggaran dipikawanoh geus dipigawé ku dokter Swiss ngaranna Friedrich Miescher dina 1869. Miescher ieu hoping pikeun ngajawab prinsip dasar kahirupan ku nangtukeun komposisi kimia sél. Saatos gagal kalayan limfosit, anjeunna tiasa nampi endapan kasar DNA tina leukosit anu aya dina nanah dina perban anu dipiceun. Anjeunna ngalakukeun ieu ku cara nambahkeun asam lajeng alkali kana sél pikeun ninggalkeun sitoplasma sél urang, lajeng ngembangkeun protokol pikeun misahkeun DNA tina protéin lianna.
Saatos panalungtikan terobosan Miescher, seueur élmuwan sanés anu maju sareng ngembangkeun téknik pikeun ngasingkeun sareng ngamurnikeun DNA. Edwin Joseph Cohn, élmuwan protéin ngembangkeun loba téhnik pikeun purifikasi protéin salila WW2. Anjeunna tanggung jawab pikeun ngasingkeun fraksi albumin sérum plasma getih, anu penting pikeun ngajaga tekanan osmotik dina pembuluh darah. Ieu krusial pikeun ngajaga prajurit hirup.
Dina 1953 Francis Crick, babarengan jeung Rosalind Franklin jeung James Watson, nangtukeun struktur DNA, némbongkeun yén éta diwangun ku dua untaian ranté panjang nukléotida asam nukléat. Panemuan terobosan ieu nyayogikeun jalan pikeun Meselson sareng Stahl, anu tiasa ngembangkeun protokol sentrifugasi gradién dénsitas pikeun ngasingkeun DNA tina baktéri E. Coli nalika aranjeunna nunjukkeun réplikasi DNA semi-konservatif nalika percobaan 1958.
Téhnik Ékstraksi Asam Nukléat
Naon 4 tahapan ékstraksi DNA?
Kabéh métode ékstraksi kulub handap ka hambalan dasar sarua.
Gangguan sél. Tahap ieu, ogé katelah lisis sél, ngalibatkeun ngarecah témbok sél jeung/atawa mémbran sél, dina raraga ngaleupaskeun cairan intra-sélular nu ngandung asam nukléat dipikaresep.
Ngaleungitkeun uing anu teu dihoyongkeun. Ieu kalebet lipid mémbran, protéin sareng asam nukléat sanés anu teu dipikahoyong anu tiasa ngaganggu aplikasi hilir.
Isolasi. Aya sababaraha cara pikeun ngasingkeun asam nukléat dipikaresep ti lysate diberesihan anjeun dijieun, nu digolongkeun antara dua kategori utama: solusi dumasar atawa kaayaan padet (tingali bagian salajengna).
Konsentrasi. Sanggeus asam nukléat geus diisolasi tina sagala rereged sejen tur éncér, aranjeunna dibere dina eluate kacida-konsentrasi.
Dua Jenis Ekstraksi
Aya dua jinis ékstraksi asam nukléat - metode dumasar solusi sareng metode kaayaan padet. Métode dumasar solusi ogé katelah métode ékstraksi kimiawi, sabab ngalibatkeun ngagunakeun bahan kimia pikeun ngarecah sél jeung ngakses bahan nukléat. Ieu tiasa nganggo sanyawa organik sapertos fénol sareng kloroform, atanapi sanyawa anorganik anu kirang ngabahayakeun sahingga langkung disarankeun sapertos Protéinase K atanapi silika gél.
Conto métode ékstraksi kimiawi béda pikeun ngarecah sél ngawengku:
- Osmotic rupture of mémbran
- Pencernaan énzimatik dinding sél
- Solubilisasi mémbran
- Kalayan detergents
- Kalayan perlakuan alkali
Téhnik kaayaan padet, ogé katelah métode mékanis, ngalibatkeun mangpaatkeun kumaha DNA berinteraksi sareng substrat padet. Ku milih hiji manik atawa molekul nu DNA bakal ngabeungkeut onto tapi analyte moal, kasebut nyaéta dimungkinkeun pikeun misahkeun dua. Conto téhnik ékstraksi fase padet kaasup ngagunakeun silika jeung manik magnét.
Ékstraksi Manik Magnét Dijelaskeun
Métode ékstraksi manik magnét
Poténsi ékstraksi ngagunakeun manik magnét munggaran dipikawanoh dina patén AS Filed ku Trevor Hawkins, pikeun lembaga panalungtikan Whitehead Institute. Patén ieu ngaku yén éta mungkin pikeun nimba bahan genetik ku cara ngabeungkeut kana pamawa dukungan anu padet, anu tiasa janten manik magnét. Prinsipna nyaéta yén anjeun ngagunakeun manik magnét anu difungsikeun pisan anu bahan genetikna bakal ngabeungkeut, anu teras tiasa dipisahkeun tina supernatan ku cara nerapkeun gaya magnét ka luar wadah anu nahan sampel.
Naha Paké Ékstrak Manik Magnét?
Téknologi ékstraksi manik magnét janten langkung kaprah, kusabab poténsialna pikeun prosedur ékstraksi anu gancang sareng éfisién. Dina jaman ayeuna aya kamajuan manik magnét anu difungsikeun pisan sareng sistem panyangga anu cocog, anu ngamungkinkeun otomatisasi ékstraksi asam nukléat sareng alur kerja anu sumber daya cahaya sareng hemat biaya. Ogé, métode ékstraksi manik magnét teu ngalibetkeun léngkah centrifugation nu bisa ngabalukarkeun gaya geser nu megatkeun potongan panjang DNA. Ieu ngandung harti yén untaian DNA nu leuwih panjang tetep gembleng, nu penting dina nguji génomics.
waktos pos: Nov-25-2022