Boemo ba lits'ebetso bo kenyelletsa ntlafatso ea bona le ts'ebetso e latelang le tumellano, e lumellang ts'ebetso e nepahetseng ea nako e telele - ntle le mosebelisi. Tekanyetso e netefatsa liphetho tsa boleng bo holimo, hammoho le ho ikatisa le ho bapisoa ha tsona.
Sepheo sa (classic) PCR ke moloko oa sephetho se ka tšeptjoang le se ka hlahisoang hape. Bakeng sa likopo tse itseng, lihlahisoa tsaPCR sehlahisoae boetse e bohlokoa. Bakeng sa karabelo ena, tlhokomelo e tlameha ho nkuoa ho netefatsa hore lisampole ha li sekisetsoe le hore ts'ebetso ea PCR e lula e tsitsitse. Haholo-holo, sena se fetolela ho fokotsa tlhahiso ea tšilafalo e ka lebisang ho sephetho se fosahetseng kapa se fosahetseng kapa sa thibela karabelo ea PCR. Ho feta moo, maemo a karabelo a lokela ho ts'oana ka hohle kamoo ho ka khonehang bakeng sa sampole ka 'ngoe nakong ea ho matha hape a fetisetsoe ho liketso tse latelang (tsa mokhoa o ts'oanang). Sena se bolela sebopeho sa liketso hammoho le mofuta oa taolo ea mocheso ho baesekele. Liphoso tsa basebelisi, ehlile, li lokela ho qojoa ka hohle kamoo ho ka khonehang.
Ka tlase, re tla bonts'a liqholotso tseo re kopanang le tsona nakong ea ho lokisoa le nakong eohle ea ts'ebetso ea PCR - le mekhoa ea tharollo e teng mabapi le lisebelisoa le lisebelisoa tse sebelisoang bakeng sa ho emisa tšebetso ea PCR.
Boitokisetso ba ho arabela
Kabo ea likarolo tsa karabelo ka har'a likepe tsa PCR, kapa lipoleiti, ka ho latellana, e kenyelletsa mathata a mangata a lokelang ho hlōloa:
Maemo a ho itšoara
Tekanyetso e nepahetseng le e nepahetseng ea likarolo tsa motho ka mong ke ea bohlokoa haholo ha ho shejoa maemo a ts'oanang ka ho fetesisa a ka khonehang. Ntle le mokhoa o motle oa ho etsa lipeipi, ho bohlokoa ho khetha sesebelisoa se nepahetseng. PCR master-mixes hangata e na le lintho tse eketsang viscosity kapa tse hlahisang foam. Nakong ea ts'ebetso ea pipetting, tsena li lebisa ho metsi a mangatamalebela a pipette, kahoo ho fokotsa ho nepahala ha pipetting. Tšebeliso ea mekhoa e tobileng ea ho fana ka lisebelisoa kapa malebela a mang a pipette a sa tloaelehang haholo ho kolobisa a ka ntlafatsa ho nepahala le ho nepahala ha mokhoa oa pipetting.
Tšoaetso
Nakong ea ts'ebetso ea ho fana, li-aerosol li hlahisoa tseo, haeba li lumelloa ho fihla ka hare ho pipette, li ka silafatsa sampuli e 'ngoe nakong ea mohato o latelang oa pipetting. Sena se ka thijoa ka ho sebelisa malebela a sefa kapa mekhoa e tobileng ea ho falla.
Lintho tse ka sebelisoang tse kangmalebela, likepe le lipoleiti tse sebelisoang mosebetsing oa PCR ha lia lokela ho ba le lintho tse senyang sampuli kapa tsa bohata sephetho. Tsena li kenyelletsa DNA, DNases, RNases le PCR inhibitors, hammoho le likarolo tse ka 'nang tsa tsoa linthong nakong ea karabelo - lintho tse tsejoang e le lintho tse ka khonang.
Phoso ea mosebelisi
Ha lisampole tse ngata li ntse li sebetsoa, kotsi ea liphoso e phahame. Ho ka etsahala habonolo hore sampuli e kenngoe ka har'a sejana se fosahetseng kapa selibeng se fosahetseng. Kotsi ena e ka fokotsoa haholo ka ho tšoaea liliba habonolo. Ka boiketsetso ba mehato ea ho fana, "ntlha ea motho", ke hore, liphoso le mefuta e fapaneng e amanang le basebelisi, e fokotsehile, ka hona e eketsa ho ikatisa, haholo-holo tabeng ea li-volumes tse nyenyane tsa karabelo. Sena se hloka lipoleiti tsa botsitso bo lekaneng hore li sebelisoe setsing sa mosebetsi. Li-barcode tse hokelletsoeng li fana ka mokhoa o eketsehileng oa ho baloa ke mochini, o nolofatsang mohlala oa ho latedisa ts'ebetsong eohle.
Lenaneo la thermocycler
Ho hlophisa sesebelisoa ho ka ipaka ho ja nako ebile ho na le liphoso. Likarolo tse fapaneng tsa libaesekele tse futhumatsang tsa PCR li sebetsa 'moho ho nolofatsa mohato ona oa ts'ebetso, mme sa bohlokoa le ho feta, ho o etsa hore o bolokehe:
Ts'ebetso e bonolo le tataiso e ntle ea basebelisi ke motheo oa mananeo a sebetsang hantle. Ho theha motheong ona, tsamaiso ea mosebedisi e sirelelitsoeng ka password e tla thibela hore mananeo a hau a se ke a fetoloa ke basebelisi ba bang. Haeba libaesekele tse ngata (tsa mofuta o tšoanang) li sebelisoa, ho molemo haeba lenaneo le ka fetisoa ka kotloloho ho tloha sesebelisoa se seng ho ea ho se seng ka USB kapa khokahanyo. Software ea k'homphieutha e nolofalletsa tsamaiso e bohareng le e sireletsehileng ea mananeo, litokelo tsa mosebedisi le litokomane khomphuteng.
PCR e sebetsa
Nakong ea ho matha, DNA e holisoa ka sekepeng sa karabelo, moo sampole e 'ngoe le e 'ngoe e lokelang ho ba tlas'a maemo a ts'oanang a karabelo. Lintlha tse latelang li bohlokoa molemong oa ts'ebetso:
Taolo ea mocheso
Ho nepahala ho babatsehang ho laola mocheso le homogeneity ea block cycler ke motheo oa esita le mocheso oa mocheso oa mehlala eohle. Boleng bo phahameng ba lisebelisoa tsa ho futhumatsa le tse pholileng (li-peltier elements), hammoho le tsela eo li kopantsoeng ka eona thibela, ke lintlha tse etsang qeto tse tla khetholla kotsi ea ho se lumellane ha mocheso o tsejoang e le "phello ea bohale"
Moyafalo
Likarolo tsa likarolo tsa karabelo ka bomong ha lia lokela ho fetoha nakong ea karabelo ka lebaka la mouoane. Ho seng joalo, ho ka etsahala hore e nyane haholoPCR sehlahisoae ka hlahisoa, kapa ha e eo ho hang. Ka hona ho bohlokoa ho fokotsa moea oa mouoane ka ho netefatsa tiiso e sireletsehileng. Tabeng ena, sekoahelo se futhumetseng sa thermocycler le tiiso ea sekepe li sebetsa ka letsoho. Likhetho tse fapaneng tsa ho tiisa li fumaneha bakeng saLipoleiti tsa PCR (sehokelo: Sengoloa sa ho tiisa), moo tiiso e molemo ka ho fetisisa e finyelloang ka ho tiisa mocheso. Likoahelo tse ling le tsona li ka ba tse loketseng, ha feela khatello ea ho kopana ea sekoahelo sa cycler e ka fetoloa ho tiiso e khethiloeng.
Boemo ba ts'ebetso bo teng molemong oa ho sireletsa liphetho tse nepahetseng le tse ka hlahisoang nako e telele. Sena se kenyelletsa tlhokomelo ea kamehla ea thepa ho netefatsa hore e lula e le boemong bo botle ba ho sebetsa. Lisebelisoa tsohle li lokela ho ba tsa boleng bo holimo ka linako tsohle ho lotho eohle e hlahisoang, 'me ho fumaneha ha tsona ho tšepahalang ho tlameha ho netefatsoa.
Nako ea poso: Nov-29-2022