За успешне реакције појачања потребно је да појединачне реакционе компоненте буду присутне у исправној концентрацији у свакој припреми. Поред тога, важно је да се не догоди контаминација.
Поготово када се морају поставити многе реакције, основана је да припреми такозвану мастер мешавину уместо да се свако реагенс пипе за одвојено у сваку посуду. Претходно конфигурисане мешавине су комерцијално доступне, у којима се додају само компоненте специфичне за узорке (прајмер) и вода. Алтернативно, мастер микс можете припремити сами. У обе варијанте смеша се дистрибуира на сваком ПЦР броду без предлошка и појединачни ДНК узорак се додаје посебно на крају.
Коришћење главног микса има неколико предности: Прво, број појединачних корака пипетије се смањује. На овај начин, и ризик грешака корисника током пипе и ризика од контаминације, наравно, уштеде се време. У принципу, тачност пипетирања је такође већа, јер су дозиране веће количине. Ово је лако разумети приликом провере техничких података пипета: мањи дозирани јачини, то је већа одступања. Чињеница да сви препарати потичу из истог пловила имају позитиван утицај на хомогеност (ако је добро мешовити). Ово такође побољшава репродуктивност експеримената.
Приликом припрема главног микса треба се додати најмање 10% додатне запремине (нпр. Ако је потребно 10 препарата, израчунава на основу 11), тако да је чак и последња пловила правилно испунила правилно. На овај начин, (благи) нетачности и ефекат губитка узорка приликом дозирања раствора које садрже детерџент могу се надокнадити. Детерџенти су садржани у ензимским решењима као што су полимеразе и мастер мешавине, узрокујући формирање пена и остаци на унутрашњој површини нормалногСавети за пипете.
У зависности од примене и врсте течности која се може допустити, треба изабрати исправну технику пипетирања (1) и одабрана одговарајућа опрема. За рјешења која садрже детерџенте, препоручује се систем директног расељавања или такозване "ниске резервне" пипете пипете као алтернативу за пипете за ваздух-јастук. ЕфекатСавет за пипете АЦЕзаснован је на посебно хидрофобној површини. Течности које садрже детерџенти не остављају остатак са унутрашњошћу и споља, тако да губитак раствора може да се минимизира.
Поред тачног дозирања свих компоненти, важно је и да се не догоди контаминација препарата. Није довољно користити потрошни материјал високе чистоће, јер процес пипетирања у пипету за јастук ваздуха може произвести аеросоле који остају у пипету. ДНК која може бити садржана у аеросолу може се пренијети из једног узорка у следећи корак у следећем кораку пипетирања и на тај начин довести до контаминације. Горе наведени системи директног расељавања могу такође да минимизирају овај ризик. За пипете за ваздушне јастуке има смисла користити савет за филтрирање да бисте заштитили конус пипете задржавајући прскање, аеросоле и биомолекуле.
Вријеме поште: Дец-06-2022