Цриовиалссе обично користе за криогено складиштење ћелијских линија и других критичних биолошких материјала, у деварима испуњеним течним азотом.

Постоји неколико фаза укључених у успешно очување ћелија у течном азоту. Док је основни принцип спор замрзавање, тачна техника запослена зависи од врсте ћелије и коришћених криопротектантница. Постоји неколико безбедносних разматрања и најбоље праксе које треба узети у обзир приликом чувања ћелија на таквим ниским температурама.

Овај пост има за циљ дати преглед како се криовиал се чувају у течном азоту.

Шта су кривичне

Цриовиалс су мали, затворени бочице дизајнирани за чување течних узорака на изузетно ниским температурама. Они осигуравају да ћелије сачувају у криепротектантцима не уђу у директан контакт са течним азотом, минимизирајући ризик од ћелијских прелома док и даље има користи од екстремног расхладног ефекта течног азота који и даље користи екстремни азот који и даље има користи од екстремних азотних азота који и даље има користи од екстремних азотних азота.

Бочице су обично доступне у низу количина и дизајна - могу бити интерно или екстерно навоје равним или заобљеним дном. Доступне су и стерилне и нестерилне формате.

Ко користиЦировиалсДа бисте сачували ћелије у течном азоту

Распон НХС-а и приватних лабораторија, као и истраживачке институције специјализоване у банкарству у крви, епителних ћелијских биологија, имунологије и матичне ћелијске биологије користе криовијске криопресервене ћелије.

Ћелије сачуване на овај начин укључују Б и Т ћелије, ЦХО ћелије, хематопоетичне ћелије и ћелије, хибридоме, цревне ћелије, макрофаге, мезенхимске стабљике и ћелије за меломе, моноците, миелома, НК ћелије и плурипотентне матичне ћелије.

Преглед како да чувате криовиалс у течном азоту

ЦриоиПресервација је процес који чува ћелије и друге биолошке конструкције хлађењем на врло ниске температуре. Ћелије се годинама могу чувати у течном азоту без губитка одрживости ћелије. Ово је прекривање запослених поступка.

Припрема ћелија

Тачна метода за припрему узорака ће се разликовати у зависности од врсте ћелије, али уопште ће се ћелије прикупљати и центрирати да развију пелет богат ћелијом. Тај пелет се затим ресуспендира у супернатантном мешану са криопротектантном или криопрезервацијском медију.

Цриоипресервертион Медиум

Овај медијум је запослен да сачува ћелије у окружењу ниског температура, они ће бити подвргнути инхибицији формирања унутар и ванћелијских кристала и самим тим да ће ћелијске смрти. Њихова улога је да се обезбеде сигурно, заштитно окружење за ћелије и ткива током замрзавања, складиштења и омаловажавања процеса.

Медијум попут свеже смрзнуте плазме (ФФП), хепаринизовани раствор плазмалита или решења без серума мешати са криопротективним средствима као што су диметил сулфоксид (ДМСО) или глицерол.

Поновни ликвифицирани узорак пелета се аливокује у полипропиленски криовијал као што суСузхоу Аце Биомедицинска компанија Цриогени бочице за складиштење.

Важно је да не преносите криовијске кривике јер ће то повећати ризик од пуцања и могућег ослобађања садржаја (1).

Контролисана брзина замрзавања

Генерално, споро контролисана стопа смрзавања је запослена за успешну криопрезервацију ћелија.

Након што се узорци аликвотирају у криогене бочице, постављају се на влажно лед или у фрижидеру од 4 ℃ и поступци замрзавања се покреће у року од 5 минута. Као општи водич, ћелије се охладе брзином од -1 до -3 у минути (2). То се постиже помоћу програмабилног хладњака или постављањем бочица у изоловане кутије постављене у А -70 ° Ц до -90 ° Ц ФОРМЕНТИОН ФОРМЕР.

Пренос у течни азот

Затим се замрзнуте криогене бочице преносе у течни резервоар за азот за неодређено време дане температура мања од -135 ℃.

Ове ултра-ниске температуре могу се добити урањањем у течно или азот фазе паре.

Течна или фаза паре?

Складиштење у течној фази Азот је познато да одржава хладну температуру са апсолутном доследношћу, али се често не препоручује из следећих разлога:

• Потреба за великим количинама (дубине) течног азота који је потенцијална опасност. Бурнс или асфиксија због тога је прави ризик.
• Документовани случајеви унакрсне контаминације инфективним агенсима као што су Аспергиллус, ХЕП Б и вирусно ширење путем течног азотног медија (2,3)
• Потенцијал течног азота да процури у бочице током урањања. Када се уклања из складиштења и загрејане до собне температуре, азот се брзо шири. Сходно томе, бочица се може разбити када се уклони са течног складиштења азота, ствара опасност од и летећих крхотина и изложености садржају (1, 4).

Из тих разлога је ултра-ниска складиштења температуре најчешће у азоту фазе паре. Када се узорци морају чувати у течној фази, треба користити специјализовани криофлек цеви.

Машина за палошку фазу је да се доноси вертикални градијент температуре, што резултира флуктуацијама температуре између -135 ℃ и -190 ℃. Ово захтева пажљиво и марљиво надгледање нивоа течног азота и варијација температуре (5).

Многи произвођачи препоручују да су кривиале погодне за одлагање до -135 ℃ или за употребу само у фази паре.

Одмрзавање твојих кријумчараних ћелија

Поступак одмрзавања је стресан за смрзнуту културу, а правилно руковање и технику је потребно да би се осигурала оптимална одрживост, опоравак и функционалност ћелија. Тачни протоколи одмрзавања ће зависити од одређених врста ћелија. Међутим, брзо одмрзавање сматра се стандардним на:

• Смањити било какав утицај на ћелијски опоравак
• Помозите у смањењу времена излагања у растворе присутне у медијима замрзавања
• Смањите било какву штету од рекристализације леда

Водене купке, купатило на перли или специјализовани аутоматизовани инструменти се обично користе за узорке отапања.

Најчешће је ћелијска линија одмрзана у трајању од 1-2 минута, лаганим се вртлићи у воденој купељи од 37 ℃ све док не постоји само мали лед који је остао у бочици пре него што се испере на предметом медијуму раста.

За неке ћелије као што су сисарски ембриони, споро загревање је неопходно за њихов опстанак.

Ћелије су сада спремне за ћелијску културу, изолуцију ћелије, или у случају хематопоетских матичних ћелија - Студије одрживости да гарантују интегритет матичних ћелија донатора пре мијелопокладне терапије.

Нормална је пракса да узмете мале аликвоте прекривеног узорка који се користи за извођење броја ћелије да би се одредила концентрације ћелија за облагање културе. Затим можете да процените резултате процедура изолације ћелије и одредити одрживост ћелије.

Најбоље праксе за складиштење криовијаца

Успешна криопрезервација узорака сачуваних у кривићама зависи од многих елемената у протоколу, укључујући правилно складиштење и чување евиденције.

• Сплит ћелије између локација за складиштење- Ако волумен омогућавају, поделите ћелије између бочица и чувају их на засебним локацијама како би се смањили ризик губитка узорка због неуспеха опреме.
• Спречити унакрсно загађење- Одлучите за ситно коришћење стерилних криогених бочица или аутоклава пре следеће употребе
• Користите одговарајуће величине бочице за своје ћелије- Бочице долазе у низ количина између 1 и 5 млс. Избегавајте да премијерите бочице да бисте смањили ризик од пуцања.
• Изаберите интерне или екстерно навојне кришне бочице- Интерно навојне бочице препоручују неки универзитети за мере безбедности - такође могу да спрече контаминацију током пуњења или када се чувају у течном азоту.
• Спречити цурење- Користите би-убризгане бртве у обликовање у капу за вијак или о-прстенове да спречите цурење и контаминацију.
• Користите 2Д Барцодес и ознаке- Да би се осигурала сљедивост, бочице са великим писањем подручја омогућавају сваком бочицом да буду адекватни означени. 2Д Барцодес може помоћи у управљању складиштењем и вођењем евиденције. ЦОТО ЦОДИЕД ЦАПС су корисне за лакшу идентификацију.
• Адекватно одржавање складиштења- Да би се осигурало да ћелије нису изгубљене, складишни судови не би требали стално надгледати ниво температуре и течног азота. Аларми треба да буду постављени да упозоравају кориснике грешака.

Мере предострожности

Течни азот је постао уобичајена пракса у савременом истраживању, али носи ризик од озбиљних повреда ако се неправилно користи.

Правилна лична заштитна опрема (ППЕ) треба да се носи да би се смањила ризик од смрзавања, опекотина и других нежељених инцидената приликом руковања течним азотом. Носити

• Криогене рукавице
• Лабораторијски капут
• Отпоран на ударце у потпуности оклоп који такође покрива врат
• Ципеле за затворене пете
• Отпорна на пластичну прегачу

Хладњаци течних азота треба да се поставе у добро прозраченим подручјима како би се смањили ризик од асфиксија - побјеђе од азотних исхрањивања и померање атмосферског кисеоника. Велике продавнице запремине треба да имају низак алармни системи за кисеоник.

Радећи у паровима приликом руковања течним азотом је идеалан и његова употреба изван нормалног радног времена треба забрањена.

Цриовиалс за подршку вашем радном току

Биомедицинска компанија Сузхоу Аце нуди широк избор производа који задовољавају ваше кријопрезервационе потребе за различитим врстама ћелија. Портфељ укључује низ Тубеса, као и низ стерилних криовијаца.

Наше криовијске су:

• Лабораторијски вијак 0,5 мл 1,5 мл 2.0мл Цриотиал Цриогени бочице конична доња криотубе са заптивачем

  ● 0,5 мл, 1.5МЛ, 2.0МЛ спецификација, са сукњом или без сукње
  ● Коночни или самоћи дизајн, стерилни или нестерилни су доступни
  ● Цреве за вијке су направљене од полипропилена медицинског разреда
  ● ПП Цриоотубе бочице се могу више пута смрзнути и одмрзнути
  ● Спољни дизајн капа може смањити вероватноћу контаминације током обраде узорка.
  ● Криогене цеви вијчане капице Универзални вијци за употребу
  ● цеви се прилагоде најчешћим роторима
  ● Цриогенична цеви за окривене цеви Фит Стандард 1-инчни и 2-инчни, 48елл, 81велл, 96велл и 100ЕЛЛед замрзивачки оквири
  ● Аутокларисан на 121 ° Ц и замрзавање на -86 ° Ц

  Део не	Материјал	Запремина	КапуБоја	Рачунари /Торба	Кесе / футрола
  АЦТ05-БЛ-Н	PP	0,5 мл	Црна, жута, плава, црвена, љубичаста, бела	500	10
  АЦТ15-БЛ-Н	PP	1.5мл	Црна, жута, плава, црвена, љубичаста, бела	500	10
  АЦТ15-БЛ-НВ	PP	1.5мл	Црна, жута, плава, црвена, љубичаста, бела	500	10
  АЦТ20-БЛ-Н	PP	2.0мл	Црна, жута, плава, црвена, љубичаста, бела	500	10