Стандардизација процеса укључује њихову оптимизацију и накнадно успостављање и усклађивање, омогућавајући дугорочне оптималне перформансе - независно од корисника. Стандардизација осигурава висококвалитетне резултате, као и њихову репродуктивност и упоредивост.
Циљ (Цлассиц) ПЦР је генерација поузданог и репродуцираног резултата. За одређене апликације, приносПЦР производје такође релевантно. За ове реакције мора се водити брига да се осигура да узорци нису угрожени и да је ПЦР радио ток остао стабилан. Конкретно, то значи минимизирање увођења контаминација које би могле довести до лажних позитивних или лажних негативних резултата или чак инхибирати ПЦР реакцију. Поред тога, реакциони услови треба да буду што идентичан за сваки појединачни узорак у покретању и такође се могу преносиви на наредне реакције (истог метода). То се односи на састав реакција, као и на врсту температуре контроле у бициклиру. Корисничке грешке, наравно, треба избегавати што је више могуће.
У наставку ћемо показати изазове који се сусрећу током припреме и током читања ПЦР - и приступима решењима која постоје у погледу инструмената и потрошног материјала који се користе за стандардизацију ПЦР радног тока.
Припрема реакције
Диспензија реакционих компоненти у ПЦР-пловилама или плоче, односе се на више изазова који се морају превазићи:
Реакциони услови
Тачно и прецизно дозирање појединих компоненти је неопходно када је циљ најактивније могуће реакционе услове могуће. Поред добре технике пипетирања, одабир правог алата је критично. ПЦР мастер мешавине често садрже супстанце које повећавају вискозност или генеришу пену. Током процеса пипетирања, то воде до значајног влажењаСавети за пипете, тако смањујући тачност пипетирања. Употреба система директних диспензија или алтернативне врхове пипета који су мање склони влажињу могу побољшати тачност и прецизност процеса цепетирања.
Контаминације
Током процеса диспензије, генеришу се аеросоли који, ако је дозвољено да досегне унутрашњост пипете, може потенцијално да контаминира још један узорак током следећег корака пипетирања. Ово се може спречити коришћењем типова филтра или директним системима за померање.
Потрошни материјал као што јесавети, пловила и плоче које се користе у ПЦР радном току не смеју да садрже супстанце које компромитују узорак или фалсификују резултат. Они укључују ДНК, ДНАСС, РНАСЕС и инхибиторе ПЦР-а, као и компоненте које могу потенцијално да се измакују из материјала током реакције - супстанци познате као искривљавања.
Корисничка грешка
Што се више узорака обрађује, то је већи ризик грешке. Лако се може догодити да је узорак пипет у погрешан брод или погрешан добро. Овај ризик се може значајно смањити лако уочљивим ознаком бунара. Аутоматизацијом корака дискусирања, "људски фактор", тј. Грешке и варијације повезане са корисницима, наминују се, чиме се повећавају репродуктивност, посебно у случају малим реакционим количинама. Ово захтева да се плоче довољне димензионалне стабилности запошљавају у радној станици. Приложене баркоде пружају додатну машинску читљивост, што поједностављује праћење узорка током целог процеса.
Програмирање термоциклара
Програмирање инструмента се може показати да је временски конзумирање као и склони грешци. Различити ПЦР топлотни цикличар функционише заједно да поједноставе овај корак процеса и, што је најважније, да бисте га учинили сигурним:
Једноставан рад и добри упутство за кориснике основа је ефикасног програмирања. Изградња овог фондације, администрација заштићена лозинком, Управа за корисничку пасиву спречава да се измене сопствене програме од стране других корисника. Ако се користе више цикленаца (истог типа), корисни су да се програм може пренијети директно из једног инструмента на други путем УСБ или повезивања. Рачунарски софтвер омогућава централну и сигурност администрацију програма, права корисника и докумената на рачунару.
Пцр трчати
Током вожње, ДНК је појачан у реакционом пловилу, где сваки узорак треба да буде подвргнут идентичним, доследним реакционим условима. Следећи аспекти су релевантни за поступак:
Контрола температуре
Одлична тачност у контроли температуре и хомогености блока бициклисте основа је за чак и условљавање температуре свих узорака. Висок квалитет грејних и расхладних елемената (Пелтиер Елементс), као и начин на који су то повезани на блок, да ли су одлучни фактори који ће одредити ризик од температурних дискреге познатих као "ефекат ивице"
Испаравање
Концентрације појединачних реакционих компоненти не би требало да промене током реакције због испаравања. У супротном, то је могуће врло малоПЦР производможе се генерисати или уопште нема. Стога је пресудно минимизирати испаравање обезбеђивањем сигурног заптивача. У овом случају, грејан поклопац термоциклара и печат радне посуде ручно. За различите опције заптивања доступне су заПЛЦР плоче (Линк: Чланак за бртвљење), при чему се најбољи печат постиже заптивањем топлоте. Остале затварање такође могу бити погодне, све док се контактни притисак поклопца бициклисте може подесити на изабрани печат.
Стандардизација процеса је на снази да би се дугорочно заштитио тачне и репродуктивне резултате. Ово укључује редовно одржавање опреме како би се осигурало да је увек у добром радном стању. Сва потрошна материјала треба да буде доследно високих квалитета у свим произведеним групама, а њихова поуздана доступност мора бити загарантована.
Вријеме поште: Нов-29-2022