Cryovialspërdoren zakonisht për ruajtjen kriogjene të linjave qelizore dhe materialeve të tjera kritike biologjike, në dewars të mbushura me azot të lëngshëm.

Ka disa faza të përfshira në ruajtjen e suksesshme të qelizave në azot të lëngshëm. Ndërsa parimi themelor është një ngrirje e ngadaltë, teknika e saktë e përdorur varet nga lloji i qelizës dhe krioprotektuesi i përdorur. Ekzistojnë disa konsiderata të sigurisë dhe praktikat më të mira për t'u marrë parasysh kur ruani qelizat në temperatura kaq të ulëta.

Ky postim synon të japë një përmbledhje të mënyrës se si cryovials ruhen në azot të lëngshëm.

Çfarë janë Cryovials

Cryovials janë shishka të vogla, të mbuluara, të dizajnuara për ruajtjen e mostrave të lëngshme në temperatura jashtëzakonisht të ulëta. Ata sigurojnë që qelizat e ruajtura në cryoprotectant nuk vijnë në kontakt të drejtpërdrejtë me azotin e lëngshëm, duke minimizuar rrezikun e frakturave qelizore ndërsa ende përfitojnë nga efekti ekstrem i ftohjes së azotit të lëngshëm.

Shishet janë zakonisht të disponueshme në një sërë vëllimesh dhe modelesh - ato mund të jenë të fiksuara nga brenda ose nga jashtë me fund të sheshtë ose të rrumbullakosur. Format sterile dhe jo-sterile janë gjithashtu të disponueshme.

Kush përdorKirovialsPër të ruajtur qelizat në azot të lëngshëm

Një gamë e NHS dhe laboratorëve privatë, si dhe institucione kërkimore të specializuara në bankingun e gjakut të kordonit, biologjinë e qelizave epiteliale, imunologjinë dhe biologjinë e qelizave burimore përdorin cryovials në qelizat cryopreserve.

Qelizat e ruajtura në këtë mënyrë përfshijnë qelizat B dhe T, qelizat CHO, qelizat e rrjedhin hematopoietike dhe qelizat progjenitore, hibridomat, qelizat e zorrëve, makrofagët, qelizat e rrjedhin mesenchymal dhe qelizat progjenitore, monocitet, mielomën, qelizat NK dhe qelizat burimore pluripotente.

Pasqyrë e mënyrës se si të ruani cryovials në azot të lëngshëm

Cryopreservation është një proces që ruan qelizat dhe ndërtimet e tjera biologjike duke i ftohur ato në temperatura shumë të ulëta. Qelizat mund të ruhen në azot të lëngshëm për vite pa humbje të qëndrueshmërisë së qelizave. Ky është një skicë e procedurave të përdorura.

Përgatitje e qelizave

Metoda e saktë për përgatitjen e mostrave do të ndryshojë në varësi të llojit të qelizave, por në përgjithësi, qelizat mblidhen dhe centrifugohen për të zhvilluar një topth të pasur me qelizë. Kjo fishekë më pas është rivendosur në supernatant të përzier me krioprotektant ose një medium cryopreservation.

Medium cryopreservation

Ky medium është përdorur për të ruajtur qelizat në mjediset me temperaturë të ulët, të cilave do t'i nënshtrohen duke penguar formimin e kristaleve intra dhe jashtëqelizore dhe kështu vdekjen e qelizave. Roli i tyre është të sigurojnë një mjedis të sigurt, mbrojtës për qelizat dhe indet gjatë proceseve të ngrirjes, ruajtjes dhe shkrirjes.

Një medium i tillë si plazma e ngrirë e freskët (FFP), zgjidhja plazmalite e heparinizuar ose zgjidhjet pa serum, pa përbërës të kafshëve është i përzier me cryoprotectants siç janë dimetil sulfoksid (DMSO) ose glicerinë.

Peleti i rivlerësuar i mostrës është alikuar në kriipropilen cryovials siç ështëSUZHOU ACE ACE BIOMEDIKE E KOMPANIS BIOMEDIKE SHUMS.

Shtë e rëndësishme të mos i tejkaloni Cryovials pasi kjo do të rrisë rrezikun e plasaritjes dhe lëshimin e mundshëm të përmbajtjes (1).

Shkalla e ngrirjes së kontrolluar

Në përgjithësi, një normë ngrirjeje e kontrolluar e ngadaltë është përdorur për cryopreservation të suksesshëm të qelizave.

Pasi mostrat janë alikuar në shishka kriogjenike, ato vendosen në akull të lagësht ose në një frigorifer 4 ℃ dhe procedura e ngrirjes fillohet brenda 5 minutave. Si një udhëzues i përgjithshëm, qelizat ftohen me një normë prej -1 deri -3 në minutë (2). Kjo arrihet duke përdorur një ftohës të programueshëm ose duke vendosur shishka në një kuti të izoluar të vendosur në një frigorifer të kontrolluar të një –70 ° C deri -90 ° C.

Transferoni në azot të lëngshëm

Shishet kriogjenike të ngrira transferohen më pas në një rezervuar të lëngshëm të azotit për periudha të pacaktuar me kusht që të mirëmbahet një temperaturë më e vogël se -135 ℃.

Këto temperatura ultra të ulëta mund të merren nga zhytja në azot të lëngshëm ose të fazës së avullit.

Faza e lëngshme apo e avullit?

Magazinimi në azot të fazës së lëngshme dihet se ruan temperaturën e ftohtë me qëndrueshmëri absolute, por shpesh nuk rekomandohet për arsyet e mëposhtme:

• Nevoja për vëllime të mëdha (thellësi) të azotit të lëngshëm që është një rrezik i mundshëm. Djegiet ose asfiksimi për shkak të kësaj është një rrezik i vërtetë.
• Rastet e dokumentuara të ndotjes kryq nga agjentë infektivë si Aspergillus, HEP B dhe përhapja virale përmes mediumit të lëngshëm të azotit (2,3)
• Potenciali që azoti i lëngshëm të rrjedhë në shishka gjatë zhytjes. Kur hiqet nga ruajtja dhe ngrohet në temperaturën e dhomës, azoti zgjerohet me shpejtësi. Si pasojë, shishka mund të copëtohet kur hiqet nga ruajtja e azotit të lëngshëm, duke krijuar një rrezik si nga mbeturinat fluturuese ashtu edhe nga ekspozimi ndaj përmbajtjes (1, 4).

Për këto arsye, ruajtja ultra e ulët e temperaturës është më së shpeshti në azotin e fazës së avullit. Kur mostrat duhet të ruhen në fazën e lëngshme, duhet të përdoret tubi i specializuar i kriofleksit.

Dobësitë në fazën e avullit është se një gradient vertikal i temperaturës mund të ndodhë duke rezultuar në luhatjet e temperaturës midis -135 ℃ dhe -190. Kjo kërkon monitorim të kujdesshëm dhe të zellshëm të niveleve të azotit të lëngshëm dhe ndryshimeve të temperaturës (5).

Shumë prodhues rekomandojnë që Cryovials të jetë i përshtatshëm për ruajtje deri në -135 ℃ ose për përdorim vetëm në fazën e avullit.

Shkrirja e qelizave tuaja të cryopreserved

Procedura e shkrirjes është stresuese për një kulturë të ngrirë, dhe trajtimi dhe teknika e duhur kërkohet për të siguruar qëndrueshmërinë, rikuperimin dhe funksionalitetin optimal të qelizave. Protokollet e sakta të shkrirjes do të varen nga llojet specifike të qelizave. Sidoqoftë, shkrirja e shpejtë konsiderohet standarde për:

• Ulni çdo ndikim në rikuperimin e qelizave
• Ndihmoni në uljen e kohës së ekspozimit ndaj solucioneve të pranishme në mediat e ngrirjes
• Minimizoni çdo dëmtim nga rikristalizimi i akullit

Banjat me ujë, banjot me rruaza ose instrumentet e specializuara të automatizuara zakonisht përdoren për shkrirjen e mostrave.

Më shpesh 1 linjë qelizore është shkrirë në një kohë për 1-2 minuta, duke u tundur butësisht në një banjë me ujë 37 ℃ derisa të mbetet vetëm një pjesë e vogël e akullit të mbetur në shishkë para se të lahen në një medium të rritjes së paracaktuar.

Për disa qeliza të tilla si embrionet e gjitarëve, ngrohja e ngadaltë është thelbësore për mbijetesën e tyre.

Qelizat tani janë të gatshme për kulturën e qelizave, izolimin e qelizave, ose në rastin e qelizave burimore hematopoietike - studime të qëndrueshmërisë për të garantuar integritetin e qelizave burimore të donatorëve para terapisë myeloablative.

Shtë praktikë normale të marrësh pjesë të vogla të mostrës së paracaktuar të përdorura për të kryer një numër qelizash për të përcaktuar përqendrimet e qelizave për plating në kulturë. Pastaj mund të vlerësoni rezultatet e procedurave të izolimit të qelizave dhe të përcaktoni qëndrueshmërinë e qelizave.

Praktikat më të mira për ruajtjen e Cryovials

Cryopreservation i suksesshëm i mostrave të ruajtura në Cryovials varet nga shumë elementë në protokoll, përfshirë ruajtjen e duhur dhe mbajtjen e regjistrave.

• Ndahen qelizat midis vendndodhjeve të ruajtjes- Nëse vëllimet lejojnë, ndahen qelizat midis shishkave dhe ruajini ato në vende të ndara për të zvogëluar rrezikun e humbjes së mostrës për shkak të dështimeve të pajisjeve.
• Parandaloni ndotjen e kryqëzuar-Zgjedhin për shishka kriogjenike sterile me një përdorim të vetëm ose autoklavë para përdorimit të mëvonshëm
• Përdorni shishka me madhësi të përshtatshme për qelizat tuaja- Shishkat vijnë në një sërë vëllimesh midis 1 dhe 5ml. Shmangni shishkat e tepërta për të zvogëluar rrezikun e plasaritjes.
• Zgjidhni shishka kriogjenike të brendshme ose të fiksuara nga jashtë- Shishet e filetuara nga brenda rekomandohen nga disa universitete për masa sigurie - ato gjithashtu mund të parandalojnë ndotjen gjatë mbushjes ose kur ruhen në azot të lëngshëm.
• Parandaloni rrjedhjen-Përdorni vula me dy injeksion të formuara në kapakun e vidhave ose unazat O për të parandaluar rrjedhjen dhe ndotjen.
• Përdorni barkodët 2D dhe shishkat e etiketave- Për të siguruar gjurmueshmërinë, shishkat me zona të mëdha shkrimi mundësojnë që çdo shishkë të etiketohet adekuat. Barkodet 2D mund të ndihmojnë në menaxhimin e ruajtjes dhe mbajtjen e regjistrave. Kapakët e koduar me ngjyra janë të dobishme për identifikim më të lehtë.
• Mirëmbajtja adekuate e ruajtjes- Për të siguruar që qelizat nuk humbasin, anijet e ruajtjes duhet të monitorojnë vazhdimisht temperaturën dhe nivelin e azotit të lëngshëm. Alarmet duhet të jenë të pajisura për të paralajmëruar përdoruesit për gabime.

Masat paraprake të sigurisë

Azoti i lëngshëm është bërë praktikë e zakonshme në hulumtimet moderne, por mbart rrezikun e dëmtimit serioz nëse përdoret në mënyrë të gabuar.

Pajisjet e duhura mbrojtëse personale (PPE) duhet të vishen për të minimizuar rrezikun e ngricave, djegies dhe incidenteve të tjera të pafavorshme kur merren me azot të lëngshëm. Vesh

• Doreza kriogjenike
• Pallto laboratori
• Ndikimi i plotë rezistent ndaj fytyrës që mbulon gjithashtu qafën
• Këpucë me këmbë të mbyllura
• Platformë plastike e papërshkueshme nga spërkatja

Frigoriferë të lëngshëm të azotit duhet të vendosen në zona të ajrosura mirë për të minimizuar rrezikun e asfiksimit-të shpëtuar nga azoti avullon dhe zhvendos oksigjenin atmosferik. Dyqanet me vëllim të madh duhet të kenë sisteme alarmi të ulët të oksigjenit.

Puna në çifte kur trajtimi i azotit të lëngshëm është ideal dhe përdorimi i tij jashtë orarit normal të punës duhet të ndalohet.

Cryovials për të mbështetur rrjedhën tuaj të punës

Kompania Biomjekësore Suzhou Ace ofron një përzgjedhje të gjerë të produkteve që plotësojnë nevojat tuaja për kripresimin për lloje të ndryshme të qelizave. Portofoli përfshin një gamë të tubave dhe një gamë të Cryovials sterile.

Cryovials tona janë:

• Kapak i vidhave laboratorike 0.5ml 1.5ml 2.0ml Vials Cryogenial Cryogenial Cryotube konike e poshtme me copë litari

  ● 0.5ml, 1.5ml, specifikim 2.0ml, me skaj ose pa skaj
  Design Dizajn konik ose vetë në këmbë, sterile ose jo-sterile janë të dyja në dispozicion
  Tuba Tubat e kapakut të vidhave janë bërë nga polipropileni i shkallës mjekësore
  ● PP Vials Cryotube mund të ngrihen vazhdimisht dhe të shkrirë
  Dizajni Dizajni i Kapakut të Jashtëm mund të zvogëlojë probabilitetin e ndotjes gjatë trajtimit të mostrës.
  Tub Tubat e vidhave të vidhave të vidhave të vidhave të vidhave për përdorim
  ● Tubat përshtaten me rotorët më të zakonshëm
  Tub Tubat e tubave të tubave kriogjenikë të tubave përshtaten standarde 1-inç dhe 2-inç, 48well, 81well ， 96well dhe 100 well frigorifer
  ● Autoclavable në 121 ° C dhe e ngrirë në -86 ° C

  Pjesa Nr.	Material	Vëllim	KapakNgjyrë	PCS/Thes	Çanta/Rasti
  Akt05-bl-n	PP	0,5ml	E zezë, e verdhë, blu, e kuqe, vjollcë, e bardhë	500	10
  Akt15-bl-n	PP	1.5ml	E zezë, e verdhë, blu, e kuqe, vjollcë, e bardhë	500	10
  Akt15-bl-nw	PP	1.5ml	E zezë, e verdhë, blu, e kuqe, vjollcë, e bardhë	500	10
  Akt20-bl-n	PP	2.0ml	E zezë, e verdhë, blu, e kuqe, vjollcë, e bardhë	500	10