Standardizimi i proceseve përfshin optimizimin e tyre dhe krijimin dhe harmonizimin e mëvonshëm, duke lejuar performancën optimale afatgjatë-të pavarur nga përdoruesi. Standardizimi siguron rezultate me cilësi të lartë, si dhe riprodhueshmërinë dhe krahasueshmërinë e tyre.
Qëllimi i PCR (klasik) është gjenerimi i një rezultati të besueshëm dhe të riprodhueshëm. Për aplikime të caktuara, rendimenti iProdukt PCRështë gjithashtu e rëndësishme. Për këto reagime, duhet pasur kujdes për të siguruar që mostrat të mos komprometohen dhe se fluksi i punës PCR mbetet i qëndrueshëm. Në mënyrë të veçantë, kjo përkthehet në minimizimin e prezantimit të ndotjeve që mund të çojnë në rezultate të rreme pozitive ose false negative ose madje të pengojnë reagimin e PCR. Për më tepër, kushtet e reagimit duhet të jenë sa më identike për secilin mostër individuale brenda një vrapimi dhe gjithashtu të transferohen në reaksionet pasuese (me të njëjtën metodë). Kjo i referohet përbërjes së reaksioneve, si dhe llojit të kontrollit të temperaturës në cikler. Gabimet e përdoruesit, natyrisht, duhet të shmangen sa më shumë që të jetë e mundur.
Më poshtë, ne do të demonstrojmë sfidat që hasen gjatë përgatitjes dhe gjatë gjithë drejtimit të një PCR - dhe qasjeve të zgjidhjeve që ekzistojnë në lidhje me instrumentet dhe harxhimet e përdorura për standardizimin e rrjedhës së punës të PCR.
Përgatitja e reagimit
Shpërndarja e përbërësve të reagimit në enë PCR, ose pllaka, përkatësisht, përfshin sfida të shumta që duhet të tejkalohen:
Kushtet e reagimit
Dozimi i saktë dhe i saktë i përbërësve individualë është e domosdoshme kur synoni kushtet më identike të reagimit të mundshme. Përveç një teknike të mirë të tubave, zgjedhja e mjetit të duhur është kritik. Master-miksat e PCR shpesh përmbajnë substanca që rrisin viskozitetin ose gjenerojnë shkumë. Gjatë procesit të tubacionit, këto çojnë në lagështi të konsiderueshme tëkëshilla për pipetë, duke zvogëluar kështu saktësinë e tubacionit. Përdorimi i sistemeve të shpërndarjes direkte ose këshilla alternative të pipetës që janë më pak të prirur për lagështinë mund të përmirësojnë saktësinë dhe saktësinë e procesit të tubacionit.
Ndotje
Gjatë procesit të shpërndarjes, gjenerohen aerosole të cilat, nëse lejohen të arrijnë pjesën e brendshme të pipetës, mund të kontaminojnë potencialisht një mostër tjetër gjatë hapit tjetër të tubacionit. Kjo mund të parandalohet duke përdorur këshilla të filtrit ose sisteme të drejtpërdrejta të zhvendosjes.
Harxhime të tilla sikëshilla, anijet dhe pllaka që përdoren në rrjedhën e punës PCR nuk duhet të përmbajnë substanca që komprometojnë mostrën ose falsifikojnë rezultatin. Këto përfshijnë ADN, DNases, RNases dhe frenuesit PCR, si dhe përbërës që mund të rrjedhin potencialisht nga materiali gjatë reagimit - substanca të njohura si Leachables.
Gabim i përdoruesit
Sa më shumë të përpunohen mostra, aq më i lartë është rreziku i gabimit. Mund të ndodhë lehtësisht që një mostër të futet në anije të gabuar ose mirë të gabuar. Ky rrezik mund të zvogëlohet në mënyrë të konsiderueshme duke shënuar lehtësisht të dallueshme të puseve. Përmes automatizimit të hapave të shpërndarjes, "faktori njerëzor", d.m.th., gabimet dhe ndryshimet e lidhura me përdoruesit, minimizohen, duke rritur kështu riprodhueshmërinë, veçanërisht në rastin e vëllimeve të vogla të reagimit. Kjo kërkon pllaka me stabilitet të mjaftueshëm dimensionale për t'u përdorur në një stacion pune. Barkodet e bashkangjitura ofrojnë lexueshmëri shtesë të makinerisë, e cila thjeshton përcjelljen e mostrës gjatë gjithë procesit.
Programimi i termociklit
Programimi i një instrumenti mund të dëshmojë se është kohë, si dhe i prirur nga gabimi. Karakteristikat e ndryshme të ciklit termik PCR punojnë së bashku për të thjeshtuar këtë hap të procesit dhe, më e rëndësishmja, për ta bërë atë të sigurt:
Funksionimi i lehtë dhe udhëzimi i mirë i përdoruesit janë baza e programimit efikas. Duke u bazuar në këtë fondacion, administrata e përdoruesve të mbrojtur me fjalëkalim do të parandalojë që programet e veta të ndryshohen nga përdoruesit e tjerë. Nëse cikle të shumta (të të njëjtit lloj) janë në përdorim, është i dobishëm nëse një program mund të transferohet direkt nga një instrument në tjetrin përmes USB ose lidhjes. Softueri kompjuterik mundëson administrimin qendror dhe të sigurt të programeve, të drejtave të përdoruesit dhe dokumenteve në një kompjuter.
PCR Run
Gjatë vrapimit, ADN -ja amplifikohet në enën e reagimit, ku secila mostër duhet t'i nënshtrohet kushteve identike, të qëndrueshme të reagimit. Aspektet e mëposhtme janë të rëndësishme për procesin:
Kontroll i temperaturës
Saktësi e shkëlqyeshme në kontrollin e temperaturës dhe homogjenitetin e bllokut të ciklit janë baza edhe për kondicionimin e temperaturës së të gjitha mostrave. Cilësia e lartë e elementeve të ngrohjes dhe ftohjes (elementët Peltier), si dhe mënyra në të cilën këto janë të lidhura me bllokun, janë faktorët vendosës që do të përcaktojnë rrezikun e mospërputhjeve të temperaturës të njohura si "Edge Effect"
Avullim
Përqendrimet e përbërësve të reagimit individual nuk duhet të ndryshojnë gjatë rrjedhës së reagimit për shkak të avullimit. Përndryshe, është e mundur që shumë pakProdukt PCRmund të gjenerohet, ose asnjëra fare. Prandaj është thelbësore të minimizohet avullimi duke siguruar një vulë të sigurt. Në këtë rast, kapaku i ndezur i termociklit dhe vula e punës së anijes dorë për dore. Opsione të ndryshme nënshkrimi janë në dispozicion për tëPllaka PCR (Lidhja: Artikull nënshkrimi), me anë të së cilës vula më e mirë arrihet përmes nënshkrimit të nxehtësisë. Mbylljet e tjera gjithashtu mund të jenë të përshtatshme, për sa kohë që presioni i kontaktit të kapakut të ciklit mund të rregullohet në vulën e zgjedhur.
Standardizimi i procesit është i vendosur në mënyrë që të mbrojë rezultatet e sakta dhe të riprodhueshme në planin afatgjatë. Kjo përfshin mirëmbajtjen e rregullt të pajisjeve për të siguruar që është gjithmonë në gjendje të mirë pune. Të gjitha harxhimet duhet të jenë me cilësi të vazhdueshme të lartë në të gjitha pjesët e prodhuara, dhe disponueshmëria e tyre e besueshme duhet të garantohet.
Koha e Postimit: Nëntor-29-2022