Standardizimi i proceseve përfshin optimizimin e tyre dhe vendosjen dhe harmonizimin e mëvonshëm, duke lejuar performancën optimale afatgjatë – të pavarur nga përdoruesi. Standardizimi siguron rezultate me cilësi të lartë, si dhe riprodhueshmëri dhe krahasueshmëri të tyre.
Qëllimi i PCR (klasike) është gjenerimi i një rezultati të besueshëm dhe të riprodhueshëm. Për aplikime të caktuara, rendimenti iProdukt PCRështë gjithashtu relevante. Për këto reaksione, duhet pasur kujdes për të siguruar që mostrat të mos rrezikohen dhe që rrjedha e punës PCR të mbetet e qëndrueshme. Në mënyrë të veçantë, kjo përkthehet në minimizimin e futjes së kontaminimeve që mund të çojnë në rezultate false pozitive ose false negative ose edhe të pengojnë reagimin PCR. Për më tepër, kushtet e reagimit duhet të jenë sa më identike që të jetë e mundur për çdo mostër individuale brenda një serie dhe gjithashtu të jenë të transferueshme në reagimet pasuese (të së njëjtës metodë). Kjo i referohet përbërjes së reaksioneve si dhe llojit të kontrollit të temperaturës në ciklues. Gabimet e përdoruesit, natyrisht, duhet të shmangen sa më shumë që të jetë e mundur.
Më poshtë, ne do të demonstrojmë sfidat që hasen gjatë përgatitjes dhe gjatë gjithë ekzekutimit të një PCR - dhe qasjet ndaj zgjidhjeve që ekzistojnë në lidhje me instrumentet dhe materialet harxhuese të përdorura për standardizimin e flukseve të punës PCR.
Përgatitja e reagimit
Shpërndarja e komponentëve të reaksionit në enë PCR, ose pllaka, përkatësisht, përfshin sfida të shumta që duhet të kapërcehen:
Kushtet e reagimit
Dozimi i saktë dhe i saktë i përbërësve individualë është i domosdoshëm kur synohet për kushtet më identike të mundshme të reagimit. Përveç teknikës së mirë të tubimit, zgjedhja e mjetit të duhur është kritike. Përzierjet kryesore PCR shpesh përmbajnë substanca që rrisin viskozitetin ose prodhojnë shkumë. Gjatë procesit të tubimit, këto çojnë në lagështimin e konsiderueshëm tëmajat e pipetës, duke ulur kështu saktësinë e pipetimit. Përdorimi i sistemeve të shpërndarjes direkte ose majave alternative të pipetave që janë më pak të prirura për t'u lagur mund të përmirësojnë saktësinë dhe saktësinë e procesit të nxjerrjes me pipetë.
Kontaminimet
Gjatë procesit të shpërndarjes, gjenerohen aerosole të cilat, nëse lejohen të arrijnë në brendësi të pipetës, mund të kontaminojnë një mostër tjetër gjatë hapit tjetër të pipetimit. Kjo mund të parandalohet duke përdorur këshilla filtri ose sisteme të zhvendosjes direkte.
Materialet harxhuese si p.shkëshilla, enët dhe pllakat që përdoren në rrjedhën e punës PCR nuk duhet të përmbajnë substanca që komprometojnë kampionin ose falsifikojnë rezultatin. Këto përfshijnë ADN, DNase, RNase dhe frenues PCR, si dhe komponentë që potencialisht mund të kullohen nga materiali gjatë reagimit – substanca të njohura si të kullueshme.
Gabim përdoruesi
Sa më shumë mostra të përpunohen, aq më i lartë është rreziku i gabimit. Mund të ndodhë lehtësisht që një mostër të hidhet me pipetë në enën e gabuar ose në pusin e gabuar. Ky rrezik mund të reduktohet në mënyrë të konsiderueshme duke shënuar lehtësisht të dallueshme të puseve. Nëpërmjet automatizimit të hapave të shpërndarjes, "faktori njerëzor", dmth., gabimet dhe variacionet e lidhura me përdoruesit, minimizohen, duke rritur kështu riprodhueshmërinë, veçanërisht në rastin e vëllimeve të vogla të reagimit. Kjo kërkon pllaka me qëndrueshmëri të mjaftueshme dimensionale për t'u përdorur në një stacion pune. Barkodet e bashkangjitura ofrojnë lexueshmëri shtesë nga makina, gjë që thjeshton gjurmimin e mostrës gjatë gjithë procesit.
Programimi i termociktuesit
Programimi i një instrumenti mund të rezultojë se kërkon kohë, si dhe i prirur ndaj gabimeve. Karakteristikat e ndryshme të cikluesit termik PCR punojnë së bashku për të thjeshtuar këtë hap të procesit dhe, më e rëndësishmja, për ta bërë atë të sigurt:
Funksionimi i lehtë dhe udhëzimi i mirë i përdoruesit janë baza e programimit efikas. Duke u bazuar në këtë bazë, administrimi i përdoruesve i mbrojtur me fjalëkalim do të parandalojë që programet e dikujt të ndryshojnë nga përdoruesit e tjerë. Nëse përdoren çiklues të shumtë (të të njëjtit lloj), është e dobishme nëse një program mund të transferohet drejtpërdrejt nga një instrument në tjetrin nëpërmjet USB-së ose lidhjes. Softueri kompjuterik mundëson administrimin qendror dhe të sigurt të programeve, të drejtave të përdoruesit dhe dokumenteve në një kompjuter.
Drejtimi i PCR
Gjatë ekzekutimit, ADN-ja amplifikohet në enën e reaksionit, ku çdo mostër duhet t'i nënshtrohet kushteve identike dhe të qëndrueshme të reagimit. Aspektet e mëposhtme janë të rëndësishme për procesin:
Kontrolli i temperaturës
Saktësia e shkëlqyer në kontrollin e temperaturës dhe homogjeniteti i bllokut të cikluesit janë baza për kondicionimin e njëtrajtshëm të temperaturës të të gjitha mostrave. Cilësia e lartë e elementeve të ngrohjes dhe ftohjes (elementet peltier), si dhe mënyra se si ato lidhen me bllokun, janë faktorët vendimtarë që do të përcaktojnë rrezikun e mospërputhjeve të temperaturës të njohur si "efekti i skajit"
Avullimi
Përqendrimet e përbërësve individualë të reaksionit nuk duhet të ndryshojnë gjatë rrjedhës së reaksionit për shkak të avullimit. Përndryshe, është e mundur që shumë pakProdukt PCRmund të gjenerohet, ose aspak. Prandaj është thelbësore të minimizohet avullimi duke siguruar një vulosje të sigurt. Në këtë rast, kapaku i ngrohur i termociktuesit dhe vula e enës punojnë dorë për dore. Opsione të ndryshme vulosjeje janë në dispozicion përPllakat PCR (lidhja: artikull vulosje), ku vulosja më e mirë arrihet përmes izolimit termik. Mbylljet e tjera mund të jenë gjithashtu të përshtatshme, për sa kohë që presioni i kontaktit të kapakut të cikluesit mund të rregullohet në vulën e zgjedhur.
Standardizimi i procesit është vendosur për të mbrojtur rezultatet e sakta dhe të riprodhueshme në afat të gjatë. Kjo përfshin mirëmbajtjen e rregullt të pajisjes për të siguruar që ajo të jetë gjithmonë në gjendje të mirë pune. Të gjitha materialet harxhuese duhet të jenë të cilësisë së lartë në të gjitha pjesët e prodhuara dhe duhet të garantohet disponueshmëria e tyre e besueshme.
Koha e postimit: Nëntor-29-2022