Si të pipetoni vëllime të vogla me pipeta manuale

Meqenëse po i kushtohet më shumë fokus reduktimit të reagentëve dhe kostove, vëllime më të vogla janë në kërkesë të lartë, p.sh. për përgatitjen e PCR Mastermix ose reaksionet enzimë. Por vendosja e vëllimeve të vogla me pipet nga 0,2 – 5 µL vendos sfida të reja për saktësinë dhe saktësinë e pipetimit. Pikat e mëposhtme janë thelbësore:

1. Madhësia e pipetës dhe majës: Zgjidhni gjithmonë pipetën me volumin nominal më të ulët të mundshëm dhe majën më të vogël për ta mbajtur jastëkun e ajrit sa më të vogël. Kur pipet 1 µL, p.sh., zgjidhni një pipetë 0,25 – 2,5 µL dhe majë që përputhet në vend të një pipete 1 – 10 µL.
2. Kalibrimi dhe mirëmbajtja: Është thelbësore që pipetat tuaja të kalibrohen dhe mirëmbahen siç duhet. Rregullimet e vogla dhe pjesët e thyera në një pipetë çojnë në një rritje masive të vlerave të gabimeve sistematike dhe të rastësishme. Një kalibrim sipas ISO 8655 duhet të kryhet një herë në vit.
3. Pipetë me zhvendosje pozitive: Kontrolloni nëse keni një pipetë me zhvendosje pozitive me një gamë vëllimi të ulët në laboratorin tuaj. Në përgjithësi, përdorimi i këtij lloji të pipetës çon në një rezultat më të mirë të pipetimit për sa i përket saktësisë dhe saktësisë sesa me pipetat klasike me jastëk ajri.
4. Përpiquni të përdorni vëllime më të mëdha: Ju mund të konsideroni hollimin e mostrës tuaj për të nxjerrë me pipetë vëllime më të mëdha me të njëjtën sasi në reagimin përfundimtar. Kjo mund të reduktojë gabimet e pipetimit me vëllime shumë të vogla të mostrës.

Përveç një mjeti të mirë, studiuesi duhet të ketë një teknikë shumë të mirë pipetimi. Kushtojini vëmendje të veçantë hapave të mëposhtëm:

1. Ngjitja e majës: Mos e bllokoni pipetën në majë, pasi kjo mund të dëmtojë skajin e hollë të majës, të shkaktojë ridrejtimin e rrezes së lëngut ose të dëmtojë vrimën. Ushtroni vetëm presion të lehtë kur vendosni një majë dhe përdorni një pipetë me një kon maje të ngarkuar me susta.
2. Mbajtja e pipetës: Mos e mbani pipetën në dorë ndërsa prisni për centrifugën, cikluesin, etj. Pjesa e brendshme e pipetës do të nxehet dhe do të çojë jastëkun e ajrit të zgjerohet, duke rezultuar në devijime nga vëllimi i caktuar gjatë nxjerrjes me pipetë.
3. Paralagia: Lagështimi i ajrit brenda majës dhe pipetës përgatit majën për kampionin dhe shmang avullimin gjatë aspirimit të vëllimit të transferimit.
4. Aspirimi vertikal: Kjo është shumë e rëndësishme kur trajtoni vëllime të vogla për të shmangur efektin kapilar që ndodh kur pipeta mbahet në një kënd.
5. Thellësia e zhytjes: Zhyt majën sa më pak të jetë e mundur për të parandaluar hyrjen e lëngut në majë për shkak të efektit kapilar. Rregulli i parë: Sa më i vogël të jetë maja dhe vëllimi, aq më e ulët është thellësia e zhytjes. Ne rekomandojmë një maksimum prej 2 mm kur futni me tuba vëllime të vogla.
6. Shpërndarja në kënd 45°: Rrjedhja optimale e lëngut garantohet kur pipeta mbahet në një kënd 45°.
7. Kontakti me murin e anijes ose sipërfaqen e lëngshme: Vëllimet e vogla mund të shpërndahen siç duhet vetëm kur maja mbahet në murin e enës ose zhytet në lëng. Edhe pika e fundit nga maja mund të shpërndahet me saktësi.
8. Fryrja: Fryrja është e detyrueshme pas shpërndarjes së vëllimeve të ulëta për të shpërndarë edhe pikën e fundit të lëngut të pranishëm në majë. Fryrja duhet të kryhet edhe kundër murit të anijes. Kini kujdes që të mos futni flluska ajri në mostër kur kryeni një fryrje në sipërfaqen e lëngshme.