Inkasta oo aragtida, hal molecule oo template ah ayaa ku filan, qadar aad u badan oo DNA ah ayaa sida caadiga ah loo isticmaalaa PCR-ga caadiga ah, tusaale ahaan, ilaa 1 µg ee DNA naasaha naasaha ah iyo in yar sida 1 pg ee DNA-da plasmid. Qadarka ugu fiican wuxuu si weyn ugu xiran yahay tirada koobiyada taxanaha bartilmaameedka, iyo sidoo kale kakanaanta.
Haddii template aad u yar la isticmaalo, korodhka u dhigma ee tirada wareegyada xoojinta ayaa loo baahan doonaa si loo helo qadar ku filan oo badeecad ah. A Taq polymerase ee loo isticmaalo inta badan tijaabooyinka PCR kuma laha hawl sixid (3'-5' dhaqdhaqaaqa exonuclease); sidaas awgeed, khaladaadka dhaca inta lagu jiro kordhinta lama sixi karo. Inta ay badato tirada wareegyada, waxa sii badanaya kordhinta alaabta cilladaysan. Haddii, dhanka kale, qadarka template aad u badan yahay, itimaalka primers annealing si kale (ma aha boqol boqol oo complimentary) taxane ah, iyo sidoo kale samaynta dimers primer, kordhin doonaa, taas oo keeni doonta in la kordhiyo wax soo saarka. Xaalado badan, DNA-da waa laga go'doomiyay dhaqamada unugga ama noolaha oo markaa loo isticmaalo qaab PCR ah. Nadiifinta ka dib, waa lagama maarmaan in la go'aamiyo diiradda DNA-da si loo awoodo in la qeexo mugga looga baahan yahay dejinta PCR. Iyadoo agarose gel electrophoresis laga yaabo inay u adeegto si ay u bixiso qiyaas, habkani waa mid ka fog sax. UV-Vis spectrophotometry ayaa loo aasaasay sidii heerka dahabka ee qiyaasida asiidhyada nucleic-ka; Habkan tooska ah oo sidaas darteed fudud oo degdeg ah ayaa cabbiraya nuugista muunada 260 nm, xoogga saarista waxaa lagu xisaabiyaa iyadoo la kaashanayo arrin beddelaad.
Haddii fiirsashada DNA-du ay aad u hooseyso, si kastaba ha ahaatee (<1 µg/mL dsDNA), ama haddii ay ku wasakhaysan yihiin walxo sidoo kale nuugaya qiyaasta 260 nm (tusaale RNA, borotiinka, cusbada), habkani wuxuu gaari doonaa xadkiisa. Marka laga hadlayo xog-ururinta aadka u hooseeya, akhrintu waxay dhowaan noqon doontaa mid aan sax ahayn oo aan la isticmaali karin, wasakhaysanna waxay horseedi doontaa (mararka qaarkood aad u weyn) in la qiimeeyo qiimaha dhabta ah. Xaaladdan oo kale, xisaabinta iyadoo la isticmaalayo fluorescence waxay soo bandhigi kartaa beddelka. Farsamadan waxay ku salaysan tahay isticmaalka dheeha fluorescent ee si gaar ah ugu xidha dsDNA oo keliya kakan ka kooban aashitada nucleic iyo dheeha ayaa ku farxay iftiinka, ka dibna waxa uu soo dayn doonaa iftiin ah hirarka dhererka sare. Halkan, xoojinta calaamadda fluorescent waxay u dhigantaa qadarka DNA-da, iyo go'aaminta diiradda waxaa lagu qiimeeyaa iyada oo la xiriirta qalooca caadiga ah. Faa'iidooyinka habkani waxay ku xiran yihiin sida gaarka ah ee curaarta, taas oo ka saaraysa saameynta dibadda ee wasakheynta, iyo sidoo kale awoodda natiijada si loo ogaado uruurinta aadka u hooseeya ee DNA-da. Ku habboonaanta labada dariiqo waxay inta badan ku xiran tahay saamiga saamiga iyo nadiifnimada; Xaalado badan ayaa xitaa laga yaabaa in lagugula taliyo in la isticmaalo labada hab si isbarbar socda.
Waqtiga boostada: Nov-30-2022