Folasaga
O le a le Nucleic Acid Extraction?
I se faaupuga sili ona faigofie, o le faʻaaogaina o le nucleic acid o le aveeseina lea o le RNA ma / poʻo le DNA mai se faʻataʻitaʻiga ma mea uma e le manaʻomia. O le fa'agasologa o le su'eina e tu'u'ese'ese ai nucleic acids mai se fa'ata'ita'iga ma maua mai i foliga o se eluate fa'ato'a, e sa'oloto mai mea fa'afefeteina ma fa'aleagaina e ono a'afia ai so'o se fa'aoga i lalo.
Fa'aaogāga ole Su'ega ole Nucleic Acid
Fa'amama nucleic acids o lo'o fa'aaogaina i le tele o fa'aoga eseese, fa'asaga i le tele o alamanuia eseese. O le soifua maloloina atonu o le vaega e sili ona faʻaaogaina, faʻatasi ai ma RNA mama ma DNA e manaʻomia mo le tele o suʻega eseese.
Fa'aaogāga ole su'ega nucleic acid ile tausiga fa'alesoifua maloloina e aofia ai:
- PCR ma le qPCR Amplification
- Fa'asologa o Tupulaga e sosoo ai (NGS)
- Fa'avae SNP Genotyping
- Genotyping fa'avae fa'asologa
- Fa'atapula'a Enzyme Digestion
- Su'esu'ega i le fa'aaogaina o Enzymes Suia (fa'ata'ita'iga Ligation ma Cloning)
E iai fo'i isi matā'upu i tua atu o le tausiga fa'alesoifua maloloina lea e fa'aogaina ai le fa'aaogāina o le nucleic acid, e aofia ai ae lē fa'atapula'aina ile su'ega fa'atama, fa'afoma'i ma genomics.
Ose Tala'aga Pu'upu'u ole Nucleic Acid Extraction
Su'ega DNAna amata mai i se taimi umi, ma o le muaʻi iloa o le vavaeeseina na faia e se fomaʻi Suiselani e igoa ia Friedrich Miescher i le 1869. Sa faamoemoe Miescher e foia mataupu faavae o le olaga e ala i le fuafuaina o le tuufaatasiga o kemikolo o sela. Ina ua le manuia i le lymphocytes, na mafai ona ia maua se maalili o le DNA mai leucocytes na maua i le namu i fusi ua lafoai. Na ia faia lenei mea e ala i le faaopoopoina o le acid ona sosoo ai lea ma le alkali i le sela e alu ese ai le cytoplasm o le sela, ona faia lea o se maliega e tuueseese ai le DNA mai isi polotini.
I le mae'a ai o su'esu'ega a le 'ele'ele a Miescher, e to'atele isi saienitisi ua aga'i i luma ma fa'atupuina auala e fa'amama ma fa'amamā ai le DNA. Edwin Joseph Cohn, o se saienitisi polotini na atiae le tele o auala mo le faamamaina o polotini i le taimi o le Taua Lona Lua a le Lalolagi. O ia na nafa ma le vavaeeseina o le vaega o le albumin serum o le plasma toto, lea e taua i le faatumauina o le osmotic pressure i totonu o alatoto. Na taua tele lenei mea mo le fa'aolaina o fitafita.
I le 1953, na fuafuaina ai e Francis Crick, faatasi ai ma Rosalind Franklin ma James Watson, le fausaga o le DNA, ma faaalia ai na faia aʻe i ni filifili uumi e lua o nucleotides nucleic acid. O lenei su'esu'ega mata'utia na saunia ai le ala mo Meselson ma Stahl, oe na mafai ona atia'e se fa'asologa o le centrifugation gradient e fa'aesea ai le DNA mai le siama E. Coli a'o latou fa'aalia le kopi semi-conservative o DNA i le taimi o la latou su'ega 1958.
Fa'ainisinia o le Su'eina o Su'a Nucleic
O a vaega e 4 o le su'eina o DNA?
O auala uma e fa'apipi'i ai e fa'apipi'i i lalo i laasaga fa'avae tutusa.
Fa'alavelaveina sela. O lenei laʻasaga, e taʻua foi o le cell lysis, e aofia ai le talepeina o le puipui o le sela ma / poʻo le membrane sela, ina ia faʻasaʻo ai le vai i totonu o le telefoni feaveaʻi o loʻo i ai le nucleic acids e fiafia i ai.
Ave'esea o otaota e le mana'omia. E aofia ai le membrane lipids, proteins ma isi acids nucleic e le mana'omia e mafai ona fa'alavelave i fa'aoga i lalo.
Tu'ufua. E tele auala eseese e fa'aesea ai le nucleic acids o tului mai le lysate fa'amama na e faia, lea e pa'ū i le va o ni vaega autu se lua: fofo fa'avae po'o le malo (silasila i le isi vaega).
Fa'atotonuga. A mae'a ona tu'u'ese'ese le nucleic acids mai isi mea leaga uma ma vai fa'afefete, ona tu'uina atu lea i totonu o se eluate e sili ona fa'atumauina.
O Ituaiga e Lua o le Aveina
E lua ituaiga o su'esu'ega nucleic acid - auala fa'avae fofo ma auala fa'amautu. Ole auala e fa'avae ai fofo e ta'ua fo'i ole auala e aveese mai ai vaila'au, aua e aofia ai le fa'aogaina o vaila'au e talepe ai le sela ma maua ai le mea fa'aniani. E mafai ona fa'aogaina mea fa'aola e pei o le phenol ma le chloroform, po'o le fa'aitiitia le afaina ma o lea e sili atu le fautuaina o mea fa'apitoa e pei ole Proteinase K po'o le silica gel.
O faʻataʻitaʻiga o auala eseese e faʻaaogaina ai vailaʻau e talepe ai se sela e aofia ai:
- Osmotic rupture o le membrane
- Enzymatic digestion o puipui sela
- Solubilisation o membrane
- Fa'atasi ma vai fa'amama
- Fa'atasi ai ma togafitiga alkali
O auala fa'atekonolosi, e ta'ua fo'i o metotia fa'ainisinia, e aofia ai le fa'aogaina o le auala e fegalegaleai ai le DNA ma se mea'ai mautu. E ala i le filifilia o se pulu po'o se mole o le a fusifusia e le DNA ae le mafai e le analyte, e mafai ona vavaeeseina ia mea e lua. Fa'aa'oa'oga o faiga fa'a-malō e fa'aaogā e aofia ai le fa'aogaina o le silica ma le maneta.
Fa'amatalaina le Fa'amama maneta
O le Metotia o le Aveesea o Bead Magnetic
O le avanoa mo le fa'aaogaina o lopa mageta na muamua iloa i se pateni a Amerika na fa'aulu e Trevor Hawkins, mo le fa'alapotopotoga su'esu'e a le Whitehead Institute. O lenei pateni na fa'ailoa mai e mafai ona maua mai mea tau kenera e ala i le fusifusia o i latou i se va'a lagolago malosi, lea e mafai ona avea ma se maneta. O le fa'avae o lou fa'aogaina lea o se lopa fa'amageta e fa'aogaina e fa'apipi'i i ai le mea tau kenera, lea e mafai ona vavae'ese mai le supernatant e ala i le fa'aogaina o le malosi fa'amaneta i fafo o le va'a o lo'o uuina le fa'ata'ita'iga.
Aisea e Fa'aaoga ai le Fa'amagnetic Bead Extraction?
Ua fa'atuputeleina le fa'aogaina o mea fa'atekonolosi fa'amaneta, ona o le malosi o lo'o i ai mo faiga fa'avavevave ma lelei. I taimi talu ai nei, sa iai ni atina'e o lo'o fa'aogaina maneta fa'atasi ai ma faiga fa'apolopolo talafeagai, lea na mafai ai ona fa'aautomatikaina le fa'aaogaina o le nucleic acid ma se fa'agasolo galuega e mama tele ma taugofie. E le gata i lea, o auala e aveese ai le maneta e le aofia ai laasaga o le centrifugation e mafai ona mafua ai le sele malosi e malepe ai fasi DNA uumi. O lona uiga e tumau pea laina uumi o DNA, lea e taua i suʻega genomics.
Taimi meli: Nov-25-2022