E ui lava i le talitonuga, e tasi le mole o le mamanu o le a lava, e sili atu le tele o DNA e masani ona faʻaogaina mo se PCR masani, mo se faʻataʻitaʻiga, e oʻo atu i le 1 µg o genomic mammalian DNA ma laʻititi e pei o le 1 pg o le plasmid DNA. O le aofaʻi sili ona lelei e faʻalagolago tele i le numera o kopi o le faʻasologa faʻasologa, faʻapea foʻi ma lona lavelave.
Afai e la'ititi la'ititi e fa'aaogaina, o le a mana'omia se fa'aopoopoga tutusa i le aofa'i o ta'amilosaga fa'aopoopo ina ia maua ai le aofa'i o oloa. O le Taq polymerase o lo'o fa'aaogaina mo le tele o su'ega PCR e le fa'aalia ai se galuega fa'asa'o (3'-5' exonuclease activity); o lea, o mea sese e tutupu i le taimi o le faʻalauteleina e le mafai ona faʻasaʻo. O le maualuga o le numera o taamilosaga, o le sili atu ona taatele o le faʻateleina o oloa faʻaletonu. Afai, i le isi itu, o le aofaʻi o faʻataʻitaʻiga e maualuga tele, o le avanoa e faʻapipiʻi ai mea muamua i isi (e le o se selau pasene faʻafetai) faʻasologa, faʻapea foʻi ma le faʻavaeina o dimers muamua, o le a faateleina, lea o le a mafua ai le faʻateleina o le. mea fa'atau. I le tele o tulaga, o le DNA e tu'u'ese'ese mai aganu'u sela po'o mai meaola ninii ma mulimuli ane fa'aaoga e fai ma fa'ata'ita'iga PCR. A maeʻa le faʻamamaina, e tatau ona fuafua le faʻatonuga o le DNA ina ia mafai ai ona faʻamalamalamaina le voluma e manaʻomia mo le seti PCR. E ui o le electrophoresis gel agarose e mafai ona tuʻuina atu se faʻatusatusaga, o lenei metotia e mamao mai le saʻo. UV-Vis spectrophotometry ua faʻavaeina e avea ma tulaga auro mo le faʻatusatusaina o nucleic acids; o lenei auala tuusao ma o lea faigofie ma vave fua absorbance o le faataitaiga i le 260 nm, ma le faʻatonuga e faʻatatau i le fesoasoani a se mea liua.
Afai e maualalo tele le faʻaogaina o le DNA, peitaʻi (<1 µg/mL dsDNA), pe afai foʻi ua pisia i mea e faʻafefe foi i le 260 nm laina (faʻataʻitaʻiga RNA, porotini, masima), o lenei metotia o le a oʻo i ona tapulaʻa. I le tulaga e matua'i maualalo fa'atonuga, o faitauga o le a le pine ae le sa'o e fa'aoga, ma fa'aleagaina o le a ta'ita'ia ai (o nisi taimi e matua'i tele) le fa'atatauina o le tau moni. I lenei tulaga, o le fa'atusatusaina o le fa'aogaina o le fluorescence e mafai ona maua ai se isi mea. O lenei metotia e fa'avae i luga o le fa'aogaina o se vali felanulanua'i e pipii fa'apitoa i le dsDNA na'o le lavelave e aofia ai le nucleic acid ma le vali e fa'afiafiaina e le malamalama, ma o le a mulimuli ane fa'aolaina le malamalama o se umi teisi maualuga. O iinei, o le malosi o le faailo o le fluorescent e faʻatusatusa i le aofaʻi o le DNA, ma mo le fuafuaina o le faʻatonuga o loʻo iloiloina e faʻatatau i se faʻasologa masani. O le lelei o lenei metotia o loʻo faʻalagolago i le faʻapitoa o le faʻamau, lea e le aofia ai aʻafiaga i fafo na faʻaalia e le faʻaleagaina, faʻapea foʻi ma le mafai ona maua ai le maualalo o faʻatonuga o DNA. O le talafeagai o so'o se auala e fa'alagolago tele i le fa'ata'ita'iga fa'atonuga ma le mama; i le tele o tulaga e ono fautuaina ai le fa'aogaina o auala uma e lua i le tutusa.
Taimi meli: Nov-30-2022