Standardizacija procesov vključuje njihovo optimizacijo in kasnejšo vzpostavitev in usklajevanje, kar omogoča dolgoročno optimalno delovanje-neodvisno od uporabnika. Standardizacija zagotavlja kakovostne rezultate, pa tudi njihovo obnovljivost in primerljivost.
Cilj (klasičnega) PCR je ustvarjanje zanesljivega in ponovljivega rezultata. Za nekatere aplikacije je donosPCR izdelekje tudi pomembna. Za te reakcije je treba paziti, da vzorci niso ogroženi in da delovni potek PCR ostane stabilen. Konkretno, to pomeni zmanjšanje uvedbe kontaminacij, ki bi lahko privedle do lažnih pozitivnih ali lažno negativnih rezultatov ali celo zaviranja reakcije PCR. Poleg tega bi morali biti reakcijski pogoji čim bolj enaki za vsak posamezen vzorec v teku in so tudi prenosljivi na naslednje reakcije (iste metode). To se nanaša na sestavo reakcij in na vrsto temperaturnega nadzora v kolesarju. Seveda se je treba čim bolj izogniti napakam uporabnikom.
Spodaj bomo prikazali izzive, ki se srečujejo med pripravo in v celotnem izvajanju PCR - in pristopov k rešitvam, ki obstajajo glede na instrumente in potrošni material, ki se uporabljajo za standardizacijo delovnih tokov PCR.
Priprava reakcije
Razporeditev reakcijskih komponent v PCR-žice oziroma plošče obsega več izzivov, ki jih je treba premagati:
Reakcijski pogoji
Natančno in natančno odmerjanje posameznih komponent je nepogrešljivo, če si prizadevate za najpogostejše možne reakcijske pogoje. Poleg dobre tehnike pipetacije je ključnega pomena izbira pravega orodja. PCR glavne mešanice pogosto vsebujejo snovi, ki povečajo viskoznost ali ustvarjajo peno. Med postopkom pipetacije to vodijo do znatnega vlaženjaNasveti za pipeto, s čimer se zmanjša natančnost pipeta. Uporaba neposrednih sistemov za razprševanje ali alternativnih nasvetov pipete, ki so manj nagnjeni k vlaženju, lahko izboljša natančnost in natančnost postopka pipetacije.
Kontaminacije
Med postopkom razprševanja se ustvarijo aerosoli, ki lahko med naslednjim korakom pipetacije potencialno onesnažijo drug vzorec. To je mogoče preprečiti z uporabo filtrirnih nasvetov ali sistemov neposrednega premika.
Potrošni material, kot jenasveti, plovila in plošče, ki se uporabljajo v delovnem toku PCR, ne smejo vsebovati snovi, ki ogrožajo vzorec ali ponarejajo rezultata. Sem spadajo DNK, DNAZA, RNAZA in zaviralci PCR, pa tudi komponente, ki se lahko med reakcijo potencialno izlivajo iz materiala - snovi, znane kot izcedne.
Uporabniška napaka
Več vzorcev se obdelamo, večje je tveganje za napako. Zlahka se lahko zgodi, da je vzorec vklopljen v napačno posodo ali napačen vodnjak. To tveganje je mogoče znatno zmanjšati z zlahka opazno označevanje vrtin. Z avtomatizacijo korakov izpuščanja se zmanjšajo "človeški faktor", tj. Napake in spremembe, povezane z uporabniki, kar povečuje obnovljivost, zlasti v primeru majhnih količin reakcije. To zahteva, da se na delovni postaji uporabijo plošče zadostne dimenzijske stabilnosti. Priložene črtne kode zagotavljajo dodatno strojno branje, ki poenostavi sledenje vzorcev skozi celoten postopek.
Programiranje termociklista
Programiranje instrumenta se lahko izkaže za dolgotrajno in nagnjeno k napakam. Različne funkcije termičnega kolesarja PCR delujejo skupaj, da poenostavijo ta korak procesa in, kar je najpomembneje, da bi bil varen:
Enostavno delovanje in dobre uporabniške smernice sta osnova učinkovitega programiranja. Na podlagi tega fundacije bo uporabniška administracija, zaščitena z geslom, preprečila, da bi jih lastne programe spremenile drugi uporabniki. Če je v uporabi več kolesarjev (istega tipa), je koristno, če se program lahko prenese neposredno iz enega instrumenta v drugega prek USB ali povezljivosti. Računalniška programska oprema omogoča centralno in varno upravljanje programov, uporabniških pravic in dokumentov v računalniku.
PCR Run
Med tekom se DNK amplificira v reakcijski posodi, kjer je treba vsak vzorec podvrženo enakim, doslednim reakcijskim pogojem. Za postopek so pomembni naslednji vidiki:
Nadzor temperature
Odlična natančnost pri nadzoru temperature in homogenosti kolesarskega bloka sta osnova za enakomerno temperaturno kondicioniranje vseh vzorcev. Visoka kakovost ogrevalnih in hladilnih elementov (Peltierjevi elementi) in način, kako so ti priključeni na blok
Izhlapevanje
Koncentracije posameznih reakcijskih komponent se zaradi izhlapevanja ne smejo spreminjati med reakcijo. V nasprotnem primeru je mogoče, da zelo maloPCR izdelekLahko se ustvari ali sploh nobena. Zato je ključnega pomena za zmanjšanje izhlapevanja z zagotavljanjem varnega tesnila. V tem primeru ogrevani pokrov termociklista in pečat plovila deluje v roki. Na voljo so različne možnosti tesnjenjaPCR plošče (povezava: tesnilni članek), s katerim se najboljši tesnilo doseže s toplotnim tesnjenjem. Primerne so lahko tudi druge zapiranja, dokler lahko kontaktni tlak kolesarskega pokrova prilagodimo izbranemu tesnilu.
Standardizacija procesa je dolga, da bi dolgoročno zaščitili natančne in ponovljive rezultate. To vključuje redno vzdrževanje opreme za zagotovitev, da je vedno v dobrem delovnem stanju. Vsi potrošni materiali bi morali biti dosledno kakovostni v vseh proizvedenih sklopih, njihova zanesljiva razpoložljivost pa je treba zagotoviti.
Čas objave: november-29-2022