Uvod
PCR plošče, stalni del laboratorija že vrsto let, postajajo še bolj razširjeni v sodobnem okolju, saj laboratoriji povečujejo svojo zmogljivost in vedno bolj uporabljajo avtomatizacijo v svojih delovnih tokovih. Doseganje teh ciljev ob ohranjanju natančnosti in celovitosti poskusov je lahko težavno. Eno od pogostih področij, kjer se lahko prikradejo napake, je tesnjenjePCR plošče, s slabo tehniko, ki omogoča izhlapevanje vzorcev, spreminja pH in s tem moti encimske funkcije ter povzroča kontaminacijo. Učenje pečatenja aPCR ploščapravilno odpravlja ta tveganja in zagotavlja ponovljive rezultate.
Poiščite pravo tesnilo za svojo PCR ploščo
Ploščni pokrovčki v primerjavi s filmskimi tesnili v primerjavi s pokrovi
kapeso dober način za tesno zapiranje plošče, hkrati pa vam še vedno omogočajo prilagodljivost, da zelo enostavno odprete in ponovno zaprete ploščo, kot jo potrebujete, brez kakršnih koli odpadkov. Vendar pa imajo pokrovčki nekaj ključnih pomanjkljivosti.
Prvič, kupiti boste morali posebno kapico, ki je združljiva, zaradi česar niso vsestranski. Prepričati se boste morali, da se pokrov, ki ga izberete, prilega plošči, kar je odvisno od proizvajalca, in izbrati kupolasto ali ravno glede na termocikler, ki ga uporabljate.
Drugič, nanašanje pokrovčkov na ploščo je lahko zelo ponavljajoče se in dolgočasno, s tveganjem navzkrižne kontaminacije, če namestite napačen pokrovček na napačno vdolbinico.
Medtem ko so folije manj prilagodljive v smislu odstranjevanja in zamenjave, so zelo vsestranske, saj se prilegajo kateri koli vrsti PCR plošče, ne glede na proizvajalca. Lahko jih enostavno razrežete na želeno velikost, zaradi česar so zelo učinkoviti.
Druga možnost je pokrov krožnika. Ti nudijo manjšo zaščito kot pokrovčki in tesnila in se večinoma uporabljajo samo za kratkoročno pokrivanje, da se prepreči kontaminacija.
Optična tesnila v primerjavi s folijo
Ne glede na to, ali potrebujete optično, prozorno tesnilo alifilm iz aluminijaste folijeza zapečatenje vaše plošče odloča vaš eksperimentalni format.Optične tesnilne folijeso prozorni, da vam omogočajo opazovanje vzorcev, hkrati pa jih še vedno ščitijo in preprečujejo izhlapevanje. Prav tako so še posebej uporabni pri poskusih qPCR, ki vključujejo zelo natančne meritve fluorescence neposredno s plošče; v tem primeru boste potrebovali tesnilno folijo, ki filtrira čim manj fluorescence. Pomembno je zagotoviti, da ima tesnilo ali pokrovček, ki ga uporabljate, dovolj visoko stopnjo optične čistosti, da zagotovite točnost odčitkov.
Folije so primerne za vse vzorce, ki so občutljivi na svetlobo ali jih je treba shranjevati pri temperaturi pod 80°C. Zaradi tega bo večina vzorcev, namenjenih dolgoročnemu shranjevanju, potrebovala folijo. Folijske folije so tudi prebojne, kar je uporabno bodisi za pregled posameznih vdolbinic ali za prenos vzorcev z iglami. To se lahko zgodi ročno ali kot del robotske platforme.
Upoštevajte tudi, da je za agresivne snovi, ki vključujejo kisline, baze ali topila, potrebno tesnilo, ki jih lahko prenese; v tem primeru je tesnilo s folijo verjetno primernejše.
Lepilo v primerjavi s filmom za toplotno tesnjenje
Tesnila z lepilno folijoso zelo enostavni in enostavni za uporabo. Vse kar potrebujete je, da uporabnik nanese tesnilo na ploščo in s preprostim orodjem za nanašanje pritisne navzdol in oblikuje tesno tesnilo.
Toplotna tesnila so naprednejša in zagotavljajo dolgotrajnejše tesnjenje z zmanjšano stopnjo izhlapevanja v primerjavi z običajnim lepilnim tesnilom. Ta možnost je primerna, če želite vzorce hraniti dolgoročno, čeprav to vključuje dodatno zahtevo za opremo za zapiranje plošč.
Kako zapreti ploščo PCR
Metoda tesnjenja plošče
Samolepilni
1. Prepričajte se, da delate na ravni in stabilni delovni površini
2. Odstranite folijo iz embalaže in odstranite podlogo
3. Previdno namestite tesnilo na ploščo, pri tem pa se prepričajte, da so vse vdolbinice pokrite
4. Uporabite orodje za nanašanje, da pritisnete na ploščo. Začnite z enega konca in se pomaknite do drugega ter enakomerno pritiskajte
5. To večkrat ponovite
6. Z aplikatorjem potegnite po zunanjih vdolbinicah, da se prepričate, da so tudi te pravilno zaprte.
Toplotna tesnila
Toplotno tesnjenje deluje tako, da se film stopi na rob vsake jamice s pomočjo tesnila za plošče. Za uporabo naprave za toplotno varjenje upoštevajte navodila proizvajalca opreme. Prepričajte se, da je proizvajalec, od katerega nabavljate opremo, ugleden, saj je zelo pomembno, da je tesnilo pravilno, učinkovito in vodotesno.
Top nasveti za tesnjenje plošč
a. Ko pritiskate na tesnilo, pojdite v vodoravni in navpični smeri, da zagotovite pravilno tesnjenje
b. Vedno je dobra praksa zagnati testno vožnjo, karkoli počnete, in to ni nič drugače pri tesnjenju plošč. Preizkusite s praznim krožnikom, preden uporabite krožnika z vzorci.
c. Pri preskušanju odstranite pečat in preverite, ali se je lepilo pravilno prilepilo, brez rež. V prvem referenčnem dokumentu je to vizualno predstavljeno. Če plošče niste pravilno zalepili, bodo ob odstranitvi tesnila ostale vrzeli, kjer se lepilo ni popolnoma spojilo s ploščo.
d. Pri pošiljanju in transportu vzorcev se vam bo morda zdelo koristno, če boste na folijsko tesnilo nalepili plastično tesnilo za dodatno zaščito (zlasti pred prebadanjem).
e. Vedno se prepričajte, da pri nanašanju filma ni izboklin ali gub – ti bodo povzročili puščanje in izhlapevanje
Čas objave: 23. nov. 2022