Kako pipete majhne količine z ročnimi ročnimi pipetami

Ker se več osredotoča na zmanjšanje reagentov in stroškov, je manjše količine veliko povpraševanje, npr. Za pripravo PCR MasterMix ali encimskih reakcij. Toda majhne količine od 0,2 - 5 µl postavlja nove izzive za natančnost in natančnost pipetacije. Naslednje točke so bistvene:

1. Pipeta in velikost konic: Vedno izberite pipeto z najnižjo možno količino in najmanjšo konico, da bo zračna blazina čim manjša. Pri pipetu 1 µl npr izberite 0,25 - 2,5 µl pipete in ujemajoče se konice, ne pa 1 - 10 µl pipete.
2. Kalibracija in vzdrževanje: Ključnega pomena je, da so vaše pipete pravilno umerjene in vzdrževane. Majhne prilagoditve in pokvarjeni deli na pipeti vodijo do ogromnega povečanja sistematičnih in naključnih vrednosti napak. Kalibracija v skladu z ISO 8655 je treba izvesti enkrat na leto.
3. Pozitivne premike pipete: preverite, ali imate v laboratoriju pozitivno premik pipete z nizko količinsko območje. Na splošno uporaba te vrste pipete vodi do boljšega rezultata pipeta v smislu natančnosti in natančnosti kot pri klasičnih pipetah zračnega moči.
4. Poskusite uporabiti večje količine: razmislite lahko, da bi svoj vzorec razredčili na pipeto večje količine z enako količino v končni reakciji. To lahko zmanjša napake s pipettiranjem z zelo majhnimi količinami vzorca.

Poleg dobrega orodja mora imeti raziskovalec zelo dobro tehniko pipetacije. Bodite posebno pozornost na naslednje korake:

1. Pritrditev na konico: Pipete ne zataknete na konici, saj lahko to poškoduje končni končnik fine konice, zaradi česar se tekoči snop preusmeri ali poškoduje odprtino. Lahki tlak pritrdite le pri pritrditvi konice in uporabite pipeto s koničnim stožcem, napolnjenim z vzmetnim konico.
2. Držite pipeto: Ne držite pipete v roki, medtem ko čakate na centrifugo, kolesarje itd. Notranjost pipete se bo segrela in vodila zračno blazino, da se razširi, kar bo povzročilo odstopanja od nastavljenega volumna pri pipetu.
3. Prednastavljanje: vlaženje zraka znotraj konice in pipete pripravi konico za vzorec in se izogne ​​izhlapevanju, ko se aspirira volumen prenosa.
4. Navpična težnja: To je zelo pomembno pri ravnanju z majhnimi količinami, da se izognete kapilarnemu učinku, ki se pojavi, ko je pipeta pod kotom.
5. Globina potopitve: Konico potopite čim manj, da preprečite, da bi tekočina vstopila v konico zaradi kapilarnega učinka. Pravilo palca: Manjša je konica in prostornina, nižja je globina potopitve. Pri tem, da pipet majhne količine, priporočamo največ 2 mm.
6. Izdavanje pod kotom 45 °: Zagotovljen je optimalni pretok tekočine, ko je pipeta pod kotom 45 °.
7. Stik na steno ali površino posode: Majhne količine lahko pravilno izpustite šele, ko je konica držati ob steni posode ali potopljena v tekočino. Tudi zadnji kapljico z vrha je mogoče natančno izpustiti.
8. Blow-out: Izpustitev je obvezna po tem, ko razprostirajo nizke količine, da se razprostira tudi zadnji kapljici tekočine, ki je prisotna v konici. Izvleček je treba izvesti tudi ob steni posode. Pazite, da v vzorec ne vnesete zračnih mehurčkov, ko izvedete izstrelitev na površini tekočine.