Kako pipetirati majhne količine z ročnimi ročnimi pipetami

Ker se večji poudarek namenja zmanjšanju reagentov in stroškov, je veliko povpraševanje po manjših količinah, npr. za pripravo PCR Mastermix ali encimskih reakcij. Toda pipetiranje majhnih količin od 0,2 do 5 µL postavlja nove izzive za točnost in natančnost pipetiranja. Bistvene so naslednje točke:

1. Velikost pipete in konice: vedno izberite pipeto z najnižjo možno nazivno prostornino in najmanjšo konico, da bo zračna blazina čim manjša. Pri pipetiranju 1 µL npr. izberite pipeto 0,25–2,5 µL in ustrezno konico namesto pipete 1–10 µL.
2. Umerjanje in vzdrževanje: bistveno je, da so vaše pipete pravilno umerjene in vzdrževane. Majhne prilagoditve in zlomljeni deli na pipeti vodijo do velikega povečanja sistematičnih in naključnih vrednosti napak. Kalibracijo v skladu z ISO 8655 je treba opraviti enkrat letno.
3. Pipete s pozitivnim izpodrivom: Preverite, ali imate v laboratoriju pipete s pozitivnim izpodrivom z nizkim obsegom prostornine. Na splošno uporaba te vrste pipete vodi do boljšega rezultata pipetiranja v smislu točnosti in natančnosti kot pri klasičnih pipetah na zračni blazini.
4. Poskusite uporabiti večje volumne: Razmislite o redčenju vzorca, da pipetirate večje volumne z enako količino v končni reakciji. To lahko zmanjša napake pipetiranja pri zelo majhnih količinah vzorcev.

Raziskovalec mora imeti poleg dobrega orodja zelo dobro tehniko pipetiranja. Posebno pozornost posvetite naslednjim korakom:

1. Pritrditev konice: Ne zagozdite pipete na konico, saj lahko s tem poškodujete fin konec konice in povzročite preusmeritev žarka tekočine ali poškodujete odprtino. Pri nameščanju konice uporabite samo rahel pritisk in uporabite pipeto z vzmetnim stožcem konice.
2. Držanje pipete: ne držite pipete v roki, medtem ko čakate na centrifugo, cikel itd. Notranjost pipete se segreje in povzroči razširitev zračne blazine, kar povzroči odstopanja od nastavljene prostornine pri pipetiranju.
3. Predhodno vlaženje: Vlaženje zraka znotraj konice in pipete pripravi konico za vzorec in prepreči izhlapevanje pri aspiraciji volumna za prenos.
4. Vertikalna aspiracija: To je zelo pomembno pri rokovanju z majhnimi volumni, da se izognete kapilarnemu učinku, ki nastane, ko pipeto držite pod kotom.
5. Globina potopitve: konico potopite čim manj, da preprečite vdor tekočine v konico zaradi kapilarnega učinka. Osnovno pravilo: manjša kot je konica in prostornina, manjša je globina potopitve. Pri pipetiranju majhnih količin priporočamo največ 2 mm.
6. Doziranje pod kotom 45°: Optimalen iztok tekočine je zagotovljen, ko pipeto držite pod kotom 45°.
7. Stik s steno posode ali površino tekočine: Majhne količine je mogoče pravilno odmeriti le, če konico držimo ob steni posode ali potopimo v tekočino. Tudi zadnjo kapljico s konice je mogoče natančno odmeriti.
8. Izpihovanje: Izpihovanje je obvezno po doziranju majhnih količin, da se izpusti še zadnja kapljica tekočine v konici. Izpihovanje naj poteka tudi ob steni posode. Pri izpihovanju površine tekočine pazite, da v vzorec ne pridejo zračni mehurčki.