Pri objemoch pipetovania od 0,2 do 5 µl je presnosť pipetovania a presnosť nanajvýš dôležitá, dobrá technika pipetovania je nevyhnutná, pretože chyby manipulácie sú zrejmejšie pri malých objemoch.
Keďže sa viac zameriava na znižovanie činidiel a nákladov, menšie objemy sú vysoké, napr. Pri príprave Mastermixu PCR alebo enzýmových reakcií. Pipetovanie malých objemov z 0,2 - 5 µl však predstavuje nové výzvy pre presnosť a presnosť pipetovania. Nasledujúce body sú nevyhnutné:
- Veľkosť pipety a špičky: Vždy vyberte pipetu s najnižším možným objemom a najmenším špičkou, aby bol vzduchový vankúš čo najmenší. Pri pipetovaní 1 µl, napr. Vyberte skôr pipetu 0,25 - 2,5 µl a porovnávaciu špičku ako pipetu 1 - 10 ul.
- Kalibrácia a údržba: Je nevyhnutné, aby boli vaše pipety správne kalibrované a udržiavané. Malé úpravy a zlomené časti na pipetke vedú k obrovskému zvýšeniu systematických a náhodných hodnôt chýb. Kalibrácia podľa ISO 8655 sa musí vykonávať raz ročne.
- Kladné pipety: Skontrolujte, či máte vo svojom laboratóriu kladnú pipetu s kladným výtlakom s nízkym rozsahom objemu. Všeobecne platí, že použitie tohto typu pipety vedie k lepšiemu výsledku pipetovania, pokiaľ ide o presnosť a presnosť ako pri klasických pipetach s vzduchom.
- Pokúste sa použiť väčšie objemy: v konečnej reakcii môžete zvážiť zriedenie vzorky na pipetu väčšie objemy s rovnakým množstvom. To môže znížiť chyby pipetovania s veľmi malými objemami vzorky.
Okrem dobrého nástroja musí mať výskumný pracovník veľmi dobrú techniku pipetovania. Venujte osobitnú pozornosť nasledujúcim krokom:
- Pripevnenie na špičku: Neodekontávajte pipetu na špičku, pretože to môže poškodiť koniec jemnej špičky spôsobiť presmerovanie tekutého lúča alebo poškodenie otvoru. Pri pripojení špičky naneste iba tlak svetla a použite pipetu s pružinovým kužeľom.
- Držanie pipety: Nezdržujte pipetu v ruke a čakajte na odstredivku, cykler atď. Vnútri pipety sa zahreje a vedie vzduchový vankúš, aby sa rozšíril, čo viedlo k odchýlkam od nastaveného objemu pri pipetovaní.
- Predbežné zviera: Zhlučenie vzduchu vo vnútri špičky a pipety pripravuje špičku pre vzorku a pri aspirovaní objemu prenosu sa vyhýba odparovaniu.
- Vertikálna aspirácia: Je to veľmi dôležité pri manipulácii s malými objemami, aby sa zabránilo kapilárnemu efektu, ktorý sa vyskytuje, keď je pipetka držaná pod uhlom.
- Hĺbka ponorenia: Ponorte špičku čo najmenej, aby ste zabránili vstupu na špičku v dôsledku kapilárneho efektu. Pravidlo: čím menší je špička a objem, tým nižšia je hĺbka ponorenia. Pri pipetovaní malých zväzkov odporúčame maximálne 2 mm.
- Dávka pod uhlom 45 °: Optimálny prietok kvapaliny je zaručený, keď je pipetka držaná pod uhlom 45 °.
- Kontakt na stenu nádoby alebo povrch kvapaliny: Malé objemy sa dajú správne vydávať iba vtedy, keď je hrot držaný na stene nádoby alebo ponorený do kvapaliny. Dokonca aj posledný pokles z hrotu je možné presne vydať.
- Vyfukovanie: Vyhodenie je povinné po vydávaní nízkych objemov, aby sa vydal aj posledná kvapka kvapaliny prítomnej v špičke. Vyhodenie by sa malo vykonávať aj proti stene plavidla. Pri vykonávaní vyfukovania na povrchu kvapaliny buďte opatrní, aby ste do vzorky nepriviedli do vzorky vzduchové bubliny.
Čas príspevku: 18. februára-2021