Pri pipetovaní objemov od 0,2 do 5 µl je presnosť a presnosť pipetovania nanajvýš dôležitá. Dobrá technika pipetovania je nevyhnutná, pretože chyby pri manipulácii sú zreteľnejšie pri malých objemoch.
Keďže sa kladie väčší dôraz na znižovanie reagencií a nákladov, vyžadujú sa menšie objemy, napr. na prípravu PCR Mastermix alebo enzýmových reakcií. Pipetovanie malých objemov od 0,2 do 5 µl však predstavuje nové výzvy pre presnosť a presnosť pipetovania. Nasledujúce body sú nevyhnutné:
- Veľkosť pipety a špičky: Vždy si vyberte pipetu s čo najnižším nominálnym objemom a najmenšou špičkou, aby bol vzduchový vankúšik čo najmenší. Pri pipetovaní napr. 1 µL zvoľte radšej 0,25 – 2,5 µL pipetu a zodpovedajúcu špičku ako 1 – 10 µL pipetu.
- Kalibrácia a údržba: Je nevyhnutné, aby boli vaše pipety správne kalibrované a udržiavané. Malé úpravy a rozbité časti na pipete vedú k masívnemu nárastu hodnôt systematických a náhodných chýb. Kalibrácia podľa ISO 8655 sa musí vykonať raz ročne.
- Pipety s pozitívnym výtlakom: Skontrolujte, či vo svojom laboratóriu nemáte pipetu s pozitívnym výtlakom s nízkym objemom. Vo všeobecnosti použitie tohto typu pipiet vedie k lepšiemu výsledku pipetovania z hľadiska presnosti a presnosti ako pri klasických pipetách so vzduchovým vankúšikom.
- Skúste použiť väčšie objemy: Môžete zvážiť zriedenie vzorky na pipetovanie väčších objemov s rovnakým množstvom vo finálnej reakcii. To môže znížiť chyby pipetovania pri veľmi malých objemoch vzoriek.
Okrem dobrého nástroja musí mať výskumník veľmi dobrú techniku pipetovania. Venujte zvláštnu pozornosť nasledujúcim krokom:
- Upevnenie špičky: Neprilepujte pipetu do špičky, pretože to môže poškodiť jemný koniec špičky a spôsobiť presmerovanie lúča kvapaliny alebo poškodenie ústia. Pri nasadzovaní špičky aplikujte iba mierny tlak a použite pipetu s odpruženým kužeľom špičky.
- Držanie pipety: Nedržte pipetu v ruke, kým čakáte na odstredivku, cyklovač atď. Vnútro pipety sa zahreje a spôsobí expanziu vzduchového vankúša, čo má za následok odchýlky od nastaveného objemu pri pipetovaní.
- Predvlhčenie: Zvlhčenie vzduchu vo vnútri špičky a pipety pripraví špičku na vzorku a zabráni vyparovaniu pri nasávaní prenášaného objemu.
- Vertikálna aspirácia: Toto je veľmi dôležité pri manipulácii s malými objemami, aby sa predišlo kapilárnemu efektu, ku ktorému dochádza pri držaní pipety pod uhlom.
- Hĺbka ponorenia: Hrot ponorte čo najmenej, aby ste zabránili vniknutiu tekutiny do hrotu v dôsledku kapilárneho efektu. Základné pravidlo: Čím menší je hrot a objem, tým menšia je hĺbka ponorenia. Pri pipetovaní malých objemov odporúčame maximálne 2 mm.
- Dávkovanie pod uhlom 45°: Optimálny výtok kvapaliny je zaručený, keď je pipeta držaná pod uhlom 45°.
- Kontakt so stenou nádoby alebo povrchom kvapaliny: Malé objemy je možné správne dávkovať len vtedy, keď je hrot priložený k stene nádoby alebo je ponorený do kvapaliny. Dokonca aj posledná kvapka zo špičky môže byť presne dávkovaná.
- Vyfúknutie: Vyfúknutie je povinné po nadávkovaní malého množstva, aby sa vypustila aj posledná kvapka tekutiny prítomnej v hrote. Vyfukovanie by sa malo vykonávať aj proti stene nádoby. Dávajte pozor, aby ste do vzorky nevniesli vzduchové bubliny, keď vykonávate vyfukovanie na povrch kvapaliny.
Čas odoslania: 18. februára 2021