සාර්ථක විස්තාරණ ප්‍රතික්‍රියා සඳහා, එක් එක් සූදානමෙහි තනි ප්‍රතික්‍රියා සංරචක නිවැරදි සාන්ද්‍රණයේ තිබීම අවශ්‍ය වේ. ඊට අමතරව, කිසිදු දූෂණයක් සිදු නොවන බව වැදගත් වේ.
විශේෂයෙන් බොහෝ ප්‍රතික්‍රියා සැකසීමට සිදු වන විට, එක් එක් ප්‍රතික්‍රියාකාරකය වෙන වෙනම එක් එක් යාත්‍රාවට බට කිරීම වෙනුවට ඊනියා ප්රධාන මිශ්රණයක් සකස් කිරීම ස්ථාපිත කර ඇත. පෙර-වින්‍යාස කළ මිශ්‍රණ වාණිජමය වශයෙන් ලබා ගත හැකි අතර, ඒවාට නියැදි-විශේෂිත සංරචක (ප්‍රාථමික) සහ ජලය පමණක් එකතු වේ. විකල්පයක් ලෙස, ප්රධාන මිශ්රණය ඔබ විසින්ම සකස් කළ හැකිය. ප්‍රභේද දෙකෙහිම, මිශ්රණය අච්චුවකින් තොරව සෑම PCR යාත්‍රාවකටම බෙදා හරින අතර අවසානයේ තනි DNA සාම්පලය වෙන වෙනම එකතු කරනු ලැබේ.
ප්රධාන මිශ්රණයක් භාවිතා කිරීමෙන් වාසි කිහිපයක් ඇත: පළමුව, තනි පයිප්ප තැබීමේ පියවර ගණන අඩු වේ. මේ ආකාරයෙන්, පයිප්ප තැබීමේදී පරිශීලක දෝෂ ඇතිවීමේ අවදානම සහ දූෂණය වීමේ අවදානම යන දෙකම අවම වන අතර, ඇත්ත වශයෙන්ම, කාලය ඉතිරි වේ. ප්‍රතිපත්තිමය වශයෙන්, විශාල පරිමාවන් මාත්‍රා කරන බැවින් පයිප්ප තැබීමේ නිරවද්‍යතාවය ද වැඩි වේ. පයිප්පවල තාක්ෂණික දත්ත පරීක්ෂා කිරීමේදී මෙය තේරුම් ගැනීම පහසුය: මාත්‍රා පරිමාව කුඩා වන තරමට, අපගමනය වැඩි විය හැකිය. සියලුම සූදානම එකම යාත්රාවකින් පැමිණෙන බව (හොඳින් මිශ්ර නම්) සමජාතීයතාවයට ධනාත්මක බලපෑමක් ඇත. මෙය අත්හදා බැලීම්වල ප්‍රතිනිෂ්පාදනය ද වැඩි දියුණු කරයි.
ප්රධාන මිශ්රණය සකස් කිරීමේදී අවම වශයෙන් 10 % අමතර පරිමාවක් එකතු කළ යුතුය (උදා: සූදානම් කිරීම් 10 ක් අවශ්‍ය නම්, 11 පදනම මත ගණනය කරන්න), එවිට අවසාන යාත්‍රාව පවා නිසි ලෙස පිරවිය යුතුය. මේ ආකාරයට, (සුළු) පයිප්ප වැරදි සහ ඩිටර්ජන්ට් අඩංගු විසඳුම් මාත්‍රා කිරීමේදී නියැදි අලාභයේ බලපෑමට වන්දි ගෙවිය හැකිය. ඩිටර්ජන්ට් පොලිමරේස් සහ ප්රධාන මිශ්‍රණ වැනි එන්සයිම ද්‍රාවණවල අඩංගු වන අතර එමඟින් සාමාන්‍ය අභ්‍යන්තර පෘෂ්ඨයේ පෙන සෑදීම සහ අපද්‍රව්‍ය ඇති කරයි.පයිප්ප ඉඟි.
යෙදුම සහ නිකුත් කළ යුතු දියර වර්ගය අනුව, නිවැරදි නල තාක්ෂණය (1) තෝරාගෙන සුදුසු උපකරණ තෝරා ගත යුතුය. ඩිටර්ජන්ට් අඩංගු විසඳුම් සඳහා සෘජු විස්ථාපන පද්ධතියක් හෝ වායු කුෂන් පයිප්ප සඳහා විකල්පයක් ලෙස ඊනියා "අඩු රඳවා තබා ගැනීමේ" පයිප්ප ඉඟි නිර්දේශ කරනු ලැබේ. බලපෑමACE PIPETTE ඉඟියවිශේෂයෙන් ජලභීතික පෘෂ්ඨයක් මත පදනම් වේ. ඩිටර්ජන්ට් අඩංගු ද්‍රව, ද්‍රාවණයේ අලාභය අවම කර ගත හැකි වන පරිදි, ඇතුළත හා පිටත අවශේෂ පටලයක් ඉතිරි නොවේ.
සියලුම සංරචකවල නිශ්චිත මාත්‍රාවට අමතරව, සූදානමේ කිසිදු දූෂණයක් සිදු නොවීම ද වැදගත් ය. ඉහළ සංශුද්ධතාවයකින් යුත් පරිභෝජන ද්‍රව්‍ය භාවිතා කිරීම ප්‍රමාණවත් නොවේ, මන්ද වායු කුෂන් පයිප්පයක පයිප්ප තැබීමේ ක්‍රියාවලිය පයිප්පයේ ඉතිරිව ඇති aerosols නිපදවිය හැකිය. Aerosol තුළ අඩංගු විය හැකි DNA පහත නල තැබීමේ පියවරේදී එක් නියැදියක සිට තවත් නියැදියකට මාරු කළ හැකි අතර එමඟින් දූෂණයට හේතු වේ. ඉහත සඳහන් කළ සෘජු විස්ථාපන පද්ධති ද මෙම අවදානම අවම කර ගත හැකිය. වායු කුෂන් පයිප්ප සඳහා ස්ප්ලෑෂ්, එයරොසෝල් සහ ජෛව අණු රඳවා තබා ගනිමින් පයිපෙට් කේතුව ආරක්ෂා කිරීමට පෙරහන් ඉඟි භාවිතා කිරීම අර්ථවත් කරයි.
පසු කාලය: දෙසැම්බර්-06-2022