ක්‍රියාවලිවල ප්‍රමිතිකරණයට ඒවායේ ප්‍රශස්තකරණය සහ පසුකාලීනව ස්ථාපිත කිරීම සහ සුසංයෝගය ඇතුළත් වන අතර, පරිශීලකයාගෙන් ස්වාධීනව - දිගු කාලීන ප්‍රශස්ත කාර්ය සාධනයට ඉඩ සලසයි. ප්රමිතිකරණය උසස් තත්ත්වයේ ප්රතිඵල මෙන්ම ඒවායේ ප්රතිනිෂ්පාදනය සහ සංසන්දනාත්මක බව සහතික කරයි.
(සම්භාව්‍ය) PCR හි පරමාර්ථය විශ්වාසදායක සහ ප්රතිනිෂ්පාදනය කළ හැකි ප්‍රතිඵලයක් ජනනය කිරීමයි. ඇතැම් යෙදුම් සඳහා, අස්වැන්නPCR නිෂ්පාදනයද අදාළ වේ. මෙම ප්රතික්රියා සඳහා, නියැදි සම්මුතියකට ලක් නොවන බවත් PCR කාර්ය ප්‍රවාහය ස්ථායීව පවතින බවත් සහතික කිරීමට වග බලා ගත යුතුය. විශේෂයෙන්, මෙය ව්‍යාජ ධනාත්මක හෝ ව්‍යාජ ඍණාත්මක ප්‍රතිඵලවලට තුඩු දිය හැකි හෝ PCR ප්රතික්රියාව පවා වළක්වන දූෂණයන් හඳුන්වාදීම අවම කිරීමට පරිවර්තනය කරයි. තවද, ප්රතික්රියා තත්ත්‍වයන් ධාවනයක් තුළ එක් එක් නියැදිය සඳහා හැකි තරම් සමාන විය යුතු අතර පසු ප්රතික්රියා වලට (එකම ක්‍රමයේම) මාරු කළ හැකිය. මෙය ප්රතික්රියා වල සංයුතිය මෙන්ම චක්‍රයේ උෂ්ණත්ව පාලන වර්ගය ද සඳහන් කරයි. පරිශීලක දෝෂ, ඇත්ත වශයෙන්ම, හැකිතාක් දුරට වළක්වා ගත යුතුය.
පහත, අපි PCR සකස් කිරීමේදී සහ ධාවනය පුරාවට මුහුණ දෙන අභියෝග - සහ PCR කාර්ය ප්‍රවාහයන් ප්රමිතිකරණය සඳහා භාවිතා කරන උපකරණ සහ පරිභෝජන ද්‍රව්‍ය සම්බන්ධයෙන් පවතින විසඳුම් සඳහා ප්‍රවේශයන් නිරූපණය කරන්නෙමු.
ප්රතික්රියාව සකස් කිරීම
ප්රතික්රියා සංරචක පිළිවෙලින් PCR යාත්‍රා හෝ තහඩු වලට බෙදා හැරීම ජයගත යුතු අභියෝග කිහිපයකින් සමන්විත වේ:
ප්රතික්රියා කොන්දේසි
හැකි වඩාත්ම සමාන ප්රතික්රියා තත්වයන් ඉලක්ක කර ගැනීමේදී තනි සංරචකවල නිවැරදි හා නිරවද්‍ය මාත්‍රාව අත්‍යවශ්‍ය වේ. හොඳ පයිප්ප තැබීමේ තාක්ෂණයට අමතරව, නිවැරදි මෙවලම තෝරා ගැනීම ඉතා වැදගත් වේ. PCR ප්‍රධාන මිශ්‍රණවල දුස්ස්‍රාවීතාව වැඩි කරන හෝ පෙන ජනනය කරන ද්‍රව්‍ය නිතර අඩංගු වේ. පයිප්ප තැබීමේ ක්‍රියාවලියේදී, මේවා සැලකිය යුතු ලෙස තෙත් කිරීමට හේතු වේපයිප්ප ඉඟි, මේ අනුව පයිප්ප තැබීමේ නිරවද්‍යතාවය අඩු කරයි. සෘජු බෙදා හැරීමේ පද්ධති හෝ තෙත් කිරීමට අඩු ප්‍රවණතාවක් ඇති විකල්ප පයිප්ප ඉඟි භාවිතා කිරීම පයිප්ප තැබීමේ ක්‍රියාවලියේ නිරවද්‍යතාවය සහ නිරවද්‍යතාවය වැඩි දියුණු කළ හැකිය.
දූෂණය
බෙදා හැරීමේ ක්‍රියාවලියේදී, aerosols ජනනය වන අතර, එය පයිප්පයේ අභ්‍යන්තරයට ළඟා වීමට ඉඩ දෙන්නේ නම්, ඊළඟ පයිප්ප තැබීමේ පියවරේදී තවත් නියැදියක් දූෂණය කළ හැකිය. පෙරහන් ඉඟි හෝ සෘජු විස්ථාපන පද්ධති භාවිතා කිරීමෙන් මෙය වළක්වා ගත හැකිය.
වැනි පරිභෝජන ද්රව්යඉඟි, PCR කාර්ය ප්‍රවාහයේ භාවිතා වන යාත්‍රා සහ තහඩු වල නියැදිය සම්මුතියට පත් කරන හෝ ප්‍රතිඵලය අසත්‍ය කරන ද්‍රව්‍ය අඩංගු නොවිය යුතුය. මේවාට DNA, DNases, RNases සහ PCR inhibitors, මෙන්ම ප්රතික්රියාව අතරතුර ද්‍රව්‍ය වලින් කාන්දු විය හැකි සංරචක - leachables ලෙස හඳුන්වන ද්‍රව්‍ය ඇතුළත් වේ.
පරිශීලක දෝෂය
වැඩි සාම්පල සැකසෙන තරමට, දෝෂ අවදානම වැඩි වේ. නියැදියක් වැරදි යාත්රාවකට හෝ වැරදි ළිඳකට නලයක් දැමීම පහසුවෙන් සිදු විය හැකිය. ළිං පහසුවෙන් හඳුනාගත හැකි සලකුණු කිරීමෙන් මෙම අවදානම සැලකිය යුතු ලෙස අඩු කළ හැකිය. බෙදා හැරීමේ පියවර ස්වයංක්‍රීය කිරීම හරහා, “මානව සාධකය”, එනම් දෝෂ සහ පරිශීලක-ආශ්‍රිත වෙනස්කම් අවම කරනු ලැබේ, එමඟින් ප්රතිනිෂ්පාදනය වැඩි වේ, විශේෂයෙන් කුඩා ප්රතික්රියා පරිමාවන්හිදී. මේ සඳහා ප්‍රමාණවත් මාන ස්ථායීතාවයකින් යුත් තහඩු අවශ්‍ය වේ. අමුණා ඇති තීරු කේත අමතර යන්ත්‍ර කියවීමේ හැකියාව ලබා දෙයි, එය සම්පූර්ණ ක්රියාවලිය පුරාම නියැදි ලුහුබැඳීම සරල කරයි.
තාප චක්රලේඛය ක්රමලේඛනය කිරීම
උපකරණයක් ක්රමලේඛනය කිරීම කාලය ගතවන මෙන්ම දෝෂ සහිත බව ඔප්පු කළ හැක. විවිධ PCR තාප චක්‍රීය විශේෂාංග මෙම ක්‍රියාවලි පියවර සරල කිරීමට සහ වඩාත් වැදගත් ලෙස එය ආරක්ෂිත කිරීමට එකට ක්‍රියා කරයි:
පහසු ක්‍රියාකාරිත්වය සහ හොඳ පරිශීලක මාර්ගෝපදේශය කාර්යක්ෂම ක්‍රමලේඛනයේ පදනම වේ. මෙම පදනම මත ගොඩ නැගීම, මුරපද-ආරක්ෂිත පරිශීලක පරිපාලනය වෙනත් පරිශීලකයින් විසින් තමන්ගේම වැඩසටහන් වෙනස් කිරීම වලක්වනු ඇත. බහු සයික්ලර් (එකම වර්ගයේ) භාවිතා කරන්නේ නම්, වැඩසටහනක් USB හෝ සම්බන්ධතාවය හරහා එක් උපකරණයකින් තවත් උපකරණයකට කෙලින්ම මාරු කළ හැකි නම් එය ප්‍රයෝජනවත් වේ. පරිගණක මෘදුකාංග මඟින් පරිගණකයක වැඩසටහන්, පරිශීලක අයිතිවාසිකම් සහ ලේඛනවල මධ්‍යම සහ ආරක්ෂිත පරිපාලනය සක්‍රීය කරයි.
PCR ධාවනය
ධාවනය අතරතුර, DNA ප්රතික්රියා යාත්‍රාව තුළ විස්තාරණය කරනු ලැබේ, එහිදී එක් එක් නියැදිය සමාන, ස්ථාවර ප්රතික්රියා තත්වයන්ට යටත් කළ යුතුය. ක්රියාවලිය සඳහා පහත සඳහන් අංග අදාළ වේ:
උෂ්ණත්ව පාලනය
උෂ්ණත්ව පාලනයේ විශිෂ්ට නිරවද්‍යතාවය සහ සයිකල් බ්ලොක් එකේ සමජාතීයතාවය සියලු සාම්පලවල ඒකාකාර උෂ්ණත්ව සමීකරණය සඳහා පදනම වේ. උනුසුම් සහ සිසිලන මූලද්‍රව්‍යවල (පෙල්ටියර් මූලද්‍රව්‍ය) ඉහළ ගුණාත්මක භාවය මෙන්ම මේවා බ්ලොක් එකට සම්බන්ධ කර ඇති ආකාරය, “දාර ආචරණය” ලෙස හඳුන්වන උෂ්ණත්ව විෂමතා අවදානම තීරණය කරන තීරණාත්මක සාධක වේ.
වාෂ්පීකරණය
වාෂ්පීකරණය හේතුවෙන් ප්රතික්රියාව අතරතුර තනි ප්රතික්රියා සංරචකවල සාන්ද්‍රණය වෙනස් නොවිය යුතුය. එසේ නොමැති නම්, එය ඉතා සුළු විය හැකියPCR නිෂ්පාදනයඋත්පාදනය විය හැකිය, නැතහොත් කිසිවක් නැත. එබැවින් ආරක්ෂිත මුද්රාවක් සහතික කිරීම මගින් වාෂ්පීකරණය අවම කිරීම ඉතා වැදගත් වේ. මෙම නඩුවේදී, thermocycler හි රත් වූ පියන සහ යාත්රාවේ මුද්රාව අත්වැල් බැඳගනී. සඳහා විවිධ මුද්රා තැබීමේ විකල්ප තිබේPCR තහඩු (සබැඳිය: මුද්රා තැබීමේ ලිපිය), එමගින් තාප මුද්රා තැබීම හරහා හොඳම මුද්රාව ලබා ගනී. සයිකල් පියනේ ස්පර්ශක පීඩනය තෝරාගත් මුද්‍රාවට සකස් කළ හැකි තාක් කල් වෙනත් වසා දැමීම් ද සුදුසු විය හැකිය.
ක්‍රියාවලි ප්රමිතිකරණය දිගු කාලීනව නිවැරදි හා ප්රතිනිෂ්පාදනය කළ හැකි ප්රතිඵල ආරක්ෂා කිරීම සඳහා ක්‍රියාත්මක වේ. උපකරණ සෑම විටම හොඳ තත්ත්වයේ පවතින බව සහතික කිරීම සඳහා නිතිපතා නඩත්තු කිරීම මෙයට ඇතුළත් වේ. සියලුම පරිභෝජන ද්‍රව්‍ය නිෂ්පාදනය කරන ලද සියලුම කොටස් හරහා අඛණ්ඩව උසස් තත්ත්වයේ තිබිය යුතු අතර, ඒවායේ විශ්වාසනීය බව සහතික කළ යුතුය.
පසු කාලය: නොවැම්බර්-29-2022